Способ оценки функционального состояния лимфоцитов

(й)з 6 01 й ЗЗ/53 ЕНИ САНИЕ И едицин чечила ы/ Под ре87, с. 294.ИОНАЛЬНО ся к медицине, в и может быть исостояния иммуни пробы храповышение эконоагностических обследующим обраГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ(71) Донецкий государственнский институт им. М. Горького(54) СПОСОБ ОЦЕНКИ ФУНКЦГО СОСТОЯНИЯ ЛИМФОЦИТ Изобретение относи астности к иммунологи ользовано для оценки ой системы организма.Цель иэобретения - ичности способа при д ледованиях.Способ осуществляю зом.Катрэкс (вытяжку из печени черноморской акулы катрон), используют в реакции бластной трансформации лимфоцитов радиоиммунологическим методом в микромодификации Назарова П,Г. Гепаринизированную венозную кровь больных по 0,1 мл вносят в стерильные пенициллиновые флаконы с 3 мл питательной смеси (среда 199 с 10 сыворотки крупного рогатого скота и 200 единицами пенициллина со стрептомицином). В опытные пробы (по 2 флакона на каждую пробу) добавляют по 0,1 мл катрэкса, Пробы инкубируют в термостате при 37 С 72 ч. За 20 ч до окончания инкубации во все пробы в стерильных условиях вносят по 0,2 мл раствора тимидина, меченного тритием, содержащего 2 мк Ки. После(57) Изобретение относится к медицине, в частности к иммунологии. Целью изобретения является повышение экономичности способа при диагностических обследованиях. Катрэкс (вытяжку из печени черноморской акулы - катрана) используют для постановки реакции бласттрансформации лимфоцитов радиоиммунологическим методом в микромодификации Назарова П,Г, Митогенное действие катрэкса в разведении 1:10 не уступает таковой ФРА - Р ("ОИсо") в концентрации 15 мкг/мл. внесения радиоактивной меткнят при 37 С.После завершения периода культивирования производят специальную обработку культур с целью отмывания клеток от невключившейся метки и подготовки их для радиометрии в сцинтилляционном счетчике,На первом этапе осуществляют лизис эритроцитов и отмывку лимфоцитов 3-ной уксусной кислотой центрифугированием в течение 10 мин при 1,5 тыс. оборотах в минуту (двухкратно). На следующем этапе осаждают нуклеиновые кислоты и белок, охлажденной 5 ь-ной трихлоруксусной кислотой (ТХУК) путем тщательного перемешивания содержимого проб, а затем - отсутствие при + 4 С в течение 30 мин и последующего центрифугирования при 1,5 тыс, об/мин 10 мин.Гидролиэ ДНК проводят добавлением 0,5 мл горячей 5-ной ТХУК и инкубацией проб в водяной бане при 90 С в течение 30 мин. После окончания гидролиза пробы центрифугируют в том же режиме, Центрифугат переносят в счетные флаконы, разбавляют. его 10 мл сцинтилляционной жидкости1635141 Составитель Р.ГуменюкТехред М.Моргентал Корректор О.Ципле Редактор А.Ревин Заказ 754 Тираж 410 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101(ЖС - 8) и помещают в счетчик "Бета" вместе с флаконами с чистой ЖС (фон),Счет каждой пробы осуществляют в течение 2 мин, После подсчета результаты опытных проб, контрольных (без митогена) и фоновых соответственно усредняют и выражают в числе импульсов в минуту или рассчитывают индекс стимуляции бластной трансформации (ИС) после вычитания фона по формулеЗначение с еднего счета опытной и обыЗначение счета контрольной пробы П р и м е р. Кровь обследуемого М. вносили в 7 флаконов с 3 мл питательной смеси по 0,1 мл. Во флаконы 2 и 3 добавляли по 0,1 мл ФГА, разведенного в 120 раз (5 мкг/мл); во флаконы 4 и,5 и 6 и 7 - по 0,1 мл катрэкса в разведении соответственно 1:10 и 1;20; флакон 1 оставили без митогена (контроль). Все пробы инкубировали 72 ч. За 20 ч до окончания инкубации в пробы внесли по 0,2 мл ЗН-тимидина (все этапы осуществляли в стерильных условиях), а после окончания процесса культивирования - специально обработаны и подготовлены к счету. Получены такие результаты (в имп/мин и ИС): фон - 248,260 - средняя 254; контроль - 1674; опыт с ФГА - 7029, 7872 - средняя 7450; ИСфгд 1674 254 - 5,1; Опыт с7450 - 254катрэксом (К) - средняя 27322 в разведении 1;10 (К 1:10) и 1:20 (средняя 21129):5 27322 - 254ИС к 1, 10 1674 - 254 19 2 .21129 - 254ИС к 1: го - 1674 - 254 ИЯ Следовательно, активность катрэкса в 10 10-кратном разведении примерно в 3,8 разавыше таковой фитогемагглютинина, разведенного 120 раз (при сопоставлении как индексов стимуляции, так и числа импульсов в минуту).15 Таким образом, катрэкс имеет выраженный митогенный эффект на лимфоциты и в разведении 1:10 соответствует активности ФГА-Р (ОИсо) в концентрации 15 мкг/мл при стоимости 1 дозы катрэкса - 10 коп.20 Формула изобретения Способ оценки функционального состояния лимфоцитов путем проведения реакции бласттрансформации с митогеном и 25 последующей оценкой индекса стимуляциилимфоцитов, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения экономичности способа при диагностических обследованиях в качестве митогена используют катрэкс.