Способ получения ферритина

(56) Сапг 1 п.ег С ргоседиг Сац. 494-498, 1.А, Тйе и Ьцшап - В 1 о, р,51-59 ие относится использовано ологии при по я количествен Изобрет ожет бы и биоте иохимиимедици и м е е ного имму е и а такжпродуДп еэкстракт того получ елеэенки ч ьфатом амм нини или руют с водят ни ем,ТЯК-гел ловека, фракц ния и очистку про ана ли ацентрифугиро:роматографиеакриле Б гел е. ачапа уль затем гелье НЧ, Се-тартратном кальции ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯПРИ ГКНТ СССР 664.38 (088,8)Раде М., Ьаяцецх 1.,А гЬгее вгер рцгЫ 1 саг 1 опГог Ьцшап 11 чег Еегг 1 г 1 п.Восйет., 1980, ч. 58, р.СггсЬгоп Н.К., М 111 егСцшпппя К.1,.СВгуц С.Р. Авресдг 1 сгегу оЕ Гегггггпапй Ьогве 1 чег апЛ вр 1 ееселеш, 3., 1 973, ч. 131, Н нохимического анализа, Цель изобретения - сохранение ои структуры и иммунохимичес ств ферритина при его получее повышение выхода целевог(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФЕРРИТИНА(57) Изобретение относится к биохимии и может быть использовано для иммунохимического микроанализа ферритина в медицине, в клинической биохимии и биотехнологии, Цель изобретения - сохранение нативной структуры и иммунохимических свойств ферритина при его получении и повышениевыхода целевого продукта, Для этогополучают тканевый экстракт печениили селезенки человека, фракционируют экстракт сульфатом аммония,подвергают ультрацентрифугированию ихроматографируют. Для получения ферритина в препаративных количествахпри хроматографировании используюткальций-тартратный гель. 1 з,п,ф-лы. П р и м е р 1. Быстрозамороженную ткань печени или селезенки человека измельчают и гомогенизируют в течение 5 мин в охлажденном 0,05 М трисНС 1 буфере, р 7,4, Неразрушенную ф ткань удаляют центрифугированием при (Х 14000 я в,течение 20 мин.Супернатант фракционируют сульфатом аммония до концентрации 307. Образующийся осадок удаляют центрифу- фр гированием.В супернатант добавляют новую пор цию сульфата аммония до конечной концентрации 607. и перемешивают 30 - 60 мин. Центрифугируют, супернатант отбрасывают, осадок растворяют в минимальном объеме буфера, повторно15887 г 8 20 Формула изобретения Составитель Н.КостюнинаТехред Л.Олийнык Корректор О.Кравцова Редактор Н. Киштулинец Заказ 2516 Тираж 480 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР1.13035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г,ужгород, ул. Гагарина,101 центриАугируют при 14000 я в течение20. мин.Осветленный супернатант собираюти центрифугируют при 200000 я в тече 5ние 60 мин, Полученный осадок растворяют в буАере и повторно центриАУгируют. Осадок растворяют в минимальном объеме 0,05 М трис-НС 1 буАере,рН 7,4, содержащем 0,5 М ЯаС 1, ицентриАугируют при 37000 8 в течение20 мин,Полученный препарат частями хроматограАируют на колонке 2,5 х 90 см с ТЯК-гелем НИ, уравновешенной 0,01 М трис-НС 1 буФером, рН 7,4, содержащем 0,5 М НаС 1, Элюирование проводят этим же буАером, собирая фракции объемом 5-6 мл. Окрашенные Аракции объединяют.Выход белка составляет 10-12 мг иэ 100 г. ткани печени и 15-19 мг из 100 г ткани селезенки,25Чистоту полученного препарата Аер-. ритина контролируют электроАоретически, Анализ выявляет единственную зону Ферритина при отсутствии апоАерритина и нримесных белков с меньшими 30 молекулярными массами,П р.и м е р 2, Все стадии способа выполняют как описано в примере 1 эа исключением того, что на стадии гель-хроматограАии используют СеАакрил 8-300.35 П р и м е р 3. Все стадии способа выполняют как описано в примере 1 за исключением того, что стадию хроматограАической очистки проводят на кальций-тертратном геле (КТГ),Для этого на хроматограАическую колонку размером 1,5 х 3,0 см, заполненную 5-6 см КТГ и уравновешенную 0,05 М трис-НС 1 буАером, рН 7,4, содержащем 0,5 М КаС 1, наносят 40 мг белкового материала в том же буФере, Элюируют этим же буАером (скорость элюирования 40-50 мп/ч) до прекращения поглощения при длине волны 280 нм.Выход белка составляет 70-807. от Аерритина, содержащегося в исходном белковом препарате. 1. Способ получения Аерритина,включающий получение тканевого экстракта, Фракционирование сульАатомаммония, ультрацентриАугирование игельхроматограФию, о т л и ч а ю -щ и й с. я тем, что, с целью сохранения нативной структуры и иммунохимических свойств, Аракционированиюподвергают непосредственно тканевыйэкстракт,2. Способ по п.1, о т л и ч а ющ и й с я тем, что, с целью повышения выхода целевого продукта,проводят хроматограАию на кальций -тартратном геле.