Способ отбора перспективных рекомбинантов при скрещивании родов сiтrus и poncirus

(54) СПОСОБ О КОМБИНАНТОВ П С 1 ТЮВ И РОЙС (57) Изобрете елекци е относится ится к Изобретение отн цитрусовых и может но в сельском хозяЦелью изобретен ние трудоемкости и ти отбора.и елекпии льзоваащиваютидангайбыть и стве. я являетсниж Для электройореэа используют бел ковые экстракты листьев . Листья зали вают жидким азотом, растирают до го- -Могенного состояния в ступке и экстрагируют ферменты в течение 18 чпри 4 С равным объемом буферногораствора: 0,05 М трис, 0,04 М аскорбиновая кислота, 0,005 М цистеин,0,001 М ЭДТА, рН 7,2, включающего 202-ную сахарозу, Гомогенаты центрифугируют при 15000 об/мин в течение 30 мин. Электрофореэ проводят в вертикальном блоке полиакриламидного ге, ля в трис-ЭДТА-боратной непрерывной буферной системе, рН 8,3. повышен точно П р м е р, Для получения потомства Г отбирают гибриды Р, с сравнительно упорядоченным мейозом - меньше 207. нарушений и наличием иэоЬерментных локусов Со, Сой, Рр 1,1 с 111,14 ейоз изучают на давленных препаратах пыльников, Бутоны очищают отчашелистников и лепестков, фиксируютв смеси спирта с ледяной уксуснойкислотой (3;1), Перед иитологическиманализом пыльники протравливают в 43 ном растворе железоаммонийных квас вайа госуадРственнцй КомитетПО ИЗОБ ЕТЕНИЯМ И ОТНЕЦТИПРИ ГКНТ СССР ВТОРСНОМУ СВИДЕТ(56) Субтропические культуры, 1976,Кф 1, с. 59-62. усов, и моет быть использовано льском хозяйстве, Цель изобретения - снижение трудоемкости и повьппеие точности отбора. Для получения потомства Г у гибридов Р измеряют1проиент нарушения мейоэа и анализируют данные электрофореза белковых экстрактов . Отбирают гибриды Р, с нарушением мейоэа меньше 207 и наличи- ем изоферментных локусов Сой, Сой, Рр,1 и И 11, Потомство Р 1 получают от самоопыления отобранных гибридов Г, . В гибридах Р на стадии семян определяют наличие крахмала в семядолях, Для посева используют бескрахмальные семена, а в качестве перспективных рекомбинантов отбирают морозоустойчивые сеянцы Р,цов в течение 3-4 ч, затемжелезным гематоксилином пону 4-5 сут.54074 В случае использования Р гибри гдов с нормально протекающим мейоэом и с указанными изоферментными покусами среди сеяниев Г, подвергнутых двойному отбору (морозоустойчивость и бескрахмальные семядоли), частота образования съедобных гЬорм 0,037 + +0,015, В известном способе, где не проводился предварительный отбор Г гибридов и семян Рг, частота получения перспективных Форм 0,00057 Ь +0,000018. Формула и э о б р е т е н и я Корректор И,Эрдейи Тираж 435 Подписное Заказ 238 ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, .Раушская наб., д. 4/5Производственно-издательский комбинат "Патент", г,ужгород, ул. Гагарина,101 Гистохимическое окрягггив гггие гЬерментных систем проводят следующимобразом.Глутаматоксапоацетаттрансамипаза,локусьг СоС- и Сот.-2, О, И трис-НС 1,буфер р 8,8 50 мл, 1.-аспарагиноваякислота 160 мг, кетоглутаровая кислота 40 мг, прочный синий ББ соль66 мг, гепевый блок инкубируют при37 С О 5 ч.Изоцитдегидрогеназа, покус 1 Й 1 г0,1 М трис-НС 1, бугЬер рН 8,0 50 мл,0,1 -изопитрат натрия 40 мг, НАДФ20 мг, 0,2 И ИоС 1 г 2,5 мп, ИТТ 10 мг,ФИС 3 мг, гепевый блок инкубируютпри 37 С 1 ч,Гпюкозофосфатизомераза, покус Рвг.0,1 И трис-НС 1, буфер рН 8,0 80 мл,фруктоэа-фосфат (натриевая соль)100 мг, глюкозо-фосфатдегидрогеназа 80 ед, 0,2 И ИоС 1 г 2,5 мп, НАДФ20 мг, ИТТ 10 мг, ФИС 3 мг, гелевыйблок инкубируют при 37 С 20 мин,Потомство Рг получают от самоопыленин. Цветки изолируют 2-слойноймарлей,Для выявления крахмала вырезаютмаленькие Фрагменты иэ халазальнойчасти семени. Присутствие крахмала.определяют иодным реактивом, Бескрахмальные семена проращивают в стерильном песке. По окончании вегетационного периода (О мес ) сеянпы переносят в рефрижератор. Температуру понижают в следующем режиме, ч: О Со 3572, -6 С 48; -12 С 24. Не поврежден ные и малоповрежденные растения в2 балла переносят в грунт. Составитель Е.гкрадюкРедактор О.Гоповач Техред Л,олейник Способ отбора перспективных рекомбинантов при скрещивании родов Сь 1 тив и Ропса.тоа, включающий измерение и анализ биологических показателей у гибридов Р и Р, по результатам которого выделяют перспективные гибриды, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью снижения грудоем- . кости и повышения точности отбора, в качестве биологических показателей у гибридов Р,. измеряют процент нарушения мейоза и анализируют данные злектрофореза белковых экстрактов, для получения, гибридов Рг отбирают гибриды Р, с нарушением мейоэа меньше 207 и наличием иэогЬерментных локусов Соей=1, Со 1=2, Ррг. и 11 г, в гибридах Р на стадии семян определяют наличие крахмала в семядолях, для посева Рг используют бескрахмальные семена, а в качестве перспективных рекомбинантовотбирают морозоустойчивые сеянцы Рг .