C12N 15/58 — активаторы плазминогена, например урокиназа, ТПА
Способ получения полипептида со свойствами проурокиназы и штамм бактерий еsснеriсна coli продуцент полипептида со свойствами проурокиназы (варианты)
Номер патента: 1695827
Опубликовано: 30.11.1991
Авторы: Еити, Казуо, Кен, Мидори, Мунеку, Наганори, Рейко, Тецузои, Тосио, Ясуо
МПК: C12N 15/58
Метки: бактерий, варианты, еsснеriсна, полипептида, продуцент, проурокиназы, свойствами, штамм
...ДНК, служащей н качествефона. 2 мкл реакционной смеси гидролизуют Я 1-нуклеазой, инкубируют прио,26 С в течение 30 мин, Реакцию завершают добавлением 10 мкл 0,25 Х трисНС 1 (рН 8, О) .4. Трансформация Е.со 1 з(Х 103.10 мкл указанной реакционной смеситрансформируют Е.со 13(Х 103,5. Классификация мутантов.С использованием зонда - олигонук-",пеотида, использовавшегося н качествезатравки, Фаговые бляшки классифицируют гибридизацией бляшек для определе.ния мутантного Фага. Бляшки переносят50с мягкой агаровой среды на нитроцеллюлозный Фильтр, нагревают н вакуумев течение 2 ч при 80 С и гибридизируютв течение ночи и растворе. Фильтр55промывают и мутантно-Фагонь(е бляшки,дающие положительные сигналы, изолируют, Мутантный Фаг дает...
Способ получения гибридного активатора плазминогена, содержащего область, ответственную за средство с фибрином активатора плазминогена ткани, и область, ответственную за ферментную активность проурокиназного по
Номер патента: 1732814
Опубликовано: 07.05.1992
Авторы: Масакацу, Масаюки, Митито
МПК: C12N 15/58, C12N 15/70
Метки: активатора, активность, гибридного, область, ответственную, плазминогена, проурокиназного, содержащего, средство, ткани, ферментную, фибрином
...Гибридизацию проводятпри 60 С.Фильтр. сушат на воздухе после промывания два или три раза 2 хЯЯС при 60 С иклоны, гибридизирующиеся с указаннымзондом, обнаруживают с помощью авторадиографии, Получают восемь положительных клонов. Плазмиды в этих клонах далееобозначают как плазмиды рРЕ 1 - рРЕ 8. Прирасщеплении ДНК этих плазмид рестриктазой Рва подтверждают, что плазмида рРЕЗсодержит вставку кДНК длиной приблизительно в 420 п.о,Фрагменты, полученные расщеплениемДНК плазмиды рРЕЗ эндонуклеазной рестрикции Рва, субклонируют в М 13 рв 8 ипроводят определение последовательности оснований. Результаты подтверждают,что кДН К содержит не только кодирующуюобласть достаточной длины на 5-концевой стороне гена проуроклиназы, но также...