Способ получения культуры протея в о-форме

(54)ТЕЯ ЛКСМ ренко,ов относится к ме Изобретений микробиол ольэовано и отея,их шт ея:1858,ГОСУДАРСТВЕННЬ 1 Й НОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИПРИ ГКНТ СССР ПИСАНИЕ ИЭОБ ВТОРСНОМУ СВИДЕТЕЛЬСТ(71) Башкирский государственныйдицинский институт им, 15-летияи Уфимский научно-исследовательинститут вакцин и сыворотоким. И,И.Мечникова(56) ЛЗИ, 1940,9, с. 58-64. ии и может быть испроизводстве вакцинных препаратов,Цель изобретения - повышение выхода целевого продукта и стабилизации его свойств,П р и м е р, Дозецилсульфат натрия (Яд 8) добавляют в стерильныймясопептонный бульон (МПБ) (рН ,27,4) в концентрации 5%.Полученную смесь разливают в пробирки по 8 мл, кипятят трехкратнопо 30 мин, сеют Н-Формы пр Дляопыта берут 9 роящихся дик аммоввульгарного и мирабильного прот290, 2731, 29, 1481, 737, 610,СНОС)Б ГКЛУЧГНИЯ КУЛЬТУРЫ ПРОВ О-РОРМЕ(57) Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано при производстве вакцинных препаратов, Цель изобретения - повышение выхода целевого продукта и стабилизации его свойств, Исходную культур протея в Н-форме засевают в мясопеп тонный бульон, в которой вносят 4-6% додецилсульфата натрия, Посевы инкубируют в течение 28-30 дней при комнатной температуре, Выделяют кло ны, растущие в виде О-волонии. Ста- б льность приооретенных свопств со раняется культурои протея в течение5 лет (срок наблюдения), Частотавозникновения мутантов повышается псравнению с известным способом,178, 1419, культивируют посевы в течение 28 дней при комнатной температуре, Затем по 0,1 мл бульонной культуры сеют на чашки Петри с 1,5% мясопептонным агаром (рН 7,2-7,4)ои ставят в термостат при 37 С на 48 ч, Все 28-дневные бульонные культуры без додецилсульфата натрия (контроль) при посеве на 1,5% мясопептонный агар растут в виде Н-формы, а большинство культур, выросших в мясопептонном бульоне с 5%-ной концентрацией додецилсульфата натрия на чашках Петри с 1,5%-ным мясопептонньм агаром, растут в виде изолированных О-клонов, В дальнейшем от каждого штамма берут по 100 изолированныхформула и з о б р е т е н и я Способ получения культуры протеяв О-форме путем выращивания культурыпротея в Н-форме в жидкой питательнойсреде в присутствии мутагена с последующим отбором клонов, о т л и ч а -ю щ и й с я тем, что, с целью повы щения выхода целевого продукта и стабилизации его свойств, выращиваниеосуществляют в течение 28-30 днейв присутствии додецилсульфата натрияв концентрации 4-6% к объему среды,Составитель Г.СмирноваРедактор Н,Рогулич Техред М.Чидык Корректор М.Шароши Заказ 4216/25 Тираж 500 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г.Ужгород, ул . Гагарина, 101 3 1495370О-клонов и в течение 8 мес их периодически пересевают по Шукевичу (черезкаждые 15 дней), е клоны, которыерастут в виде О-колонии, трехкратнопересевают в нативный мясопептонныйбульон, каждый раз проверяя роениена скошенном 1,5 -ном мясопептонномагаре по Шукевичу,Результаты исследований показали,что 93-95% клонов штаммов РФ 1858,178,737,1419,610 после 2-3-кратногопосева по Щукевичу превращаются вН-формы, 24 - после 9-10-кратного,а оставшиеся 7 клонов реверсируютсяв ползучие формы только после 3-кратного культивирования в нативном мясопептонном бульоне. У культур 0 Ф 290,29 и 273 1 9-10 клонов после 4-5 кратного посева на скошенный мясопептонный агар по Щукевичу 15-17 посФле 9-10-кратного посева по Щукевйчупревращаются в исходные Н-формы,Трехкратное культивирование оставшихся изолированных клонов в мясопептонном бульоне показало, что у штаммаУР 290 и 29 28-29% соответственноостаются в виде стабильных О-форм,у штамма У 273 1 26 . клонов остаютсяв виде стабильных О-клонов. Дальнейшие наблюдения показали, что большинство клонов стабильно остаютсяизолированными и не реверсируются висходные Н-формы.Таким образом, культивированиеН-формы протея в течение 29 дней вмясопептонном бульоне, содержащем5 . концентрации додецилсульфата натрия, приводит к образованию стабильных 0-форм клонов этого микроорганизма,Далее изучена скорость их размноженияПля этого 2 млрд суспенэиисуточной агаровой культуры сеют по 10 млн микр,.кл . в пробирки, содержащие 8 мл МПБ, ставят в термостат нао8 ч при 37 С и определяют оптическую плотность по стандарту мутности, Клетки стабильной О-формы протея обладают значительно пониженной скоростью размножения по сравнению с исходной Н-формой культуры.При переходе Н-формы протея в стабильную О-форму одновременно с утратой их способности к роению происходит и изменение рибосомальных признаков, в частности снижается активность фермента гемолиэина, утрачивается устойчивость. к антибиотикам, ослабляется вирулентность. Стабильность свойств сохраняется в течение 5 лет (срок наблюдения).Таким образом, использование способа позволяет получать стабильную О-форму протея, Чувствительность к широко применяемым в практике антибиотикам, авирулентность, не способностьпродуцировать гемолизин, пониженная скорость размножения дает основание рекомендовать полученные стабильно нероящиеся клоны в качестве живого вакцинного штамма для профилактики протейной инфекции.