Способ дифференциального определения доброкачественных и злокачественных опухолей молочных желез

(5)5 3/53//С О 1 Н 33/577 ВЕННЫЙ КОМИТЕТТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМССР ГОСУДАРСПО ИЗОБПРИ П(Н ЕТЕН(71) Всесоюзный онкологиченыл центр АМ СССР(54) СПОСОБ Д 1 ЖЕРЕЦИАЛЫЛЕНИЯ ДОБРОКАЧЕСТВЕННЪЕ ИВЕННЪЕ ОПУХ 01 ЕЙ ОЛОЧНЪХ Ж 1Изобретение относится к медицине,в частности к гистологической диагностике злокачественных опухолей, иможет быть использовано в целях уточнения дифференциального гистологического диагноза между доброкачественной и злокачественной природой поражения молочной железы, Изобретение. основано на применении иммуногисто-химического анализа опухолей молочных желез с помощью набора моноклональных антител (МКАт).Цель предлагаемого изобретениясостоит в повьшении точности диффе ренциальной диагностики между доброкачественной и злокачественной природой наиболее часто встречающихся .опухолей молочной железы.Способ осуществляется следующимобразом,Каждый из серийных срезов исследуемых образцов опухолей, помещенных(57) Изобретение относится к медицине и может быть йспольэовано длядифференциальной диагностики опухолей молочных желез, Цель иэобретенияповышение точности способа. Цельдостигается с помощью моноклональньпсантител к белкам промежуточных филаментов - кератинам В 8, У 17 и к виментину. При наличии в клетках кератинов8, 17 и виментина опухольдиагностируют как доброкачественную,а при наличии кератина У 8 - какзлокачественную. Точность способавозрастает на 60%,па предметное стекло, окрашивают одним иэ моноклональных антител (МКАт) против следующих белков промежуточных филаментов: кератина Р 8, кератина Р 17 или виментина. На окрашенных препаратах сопоставляют локализацию данных белков в одних и техже гистологнческих структурах, что позволяет судить о природе опухоли, В способе применяют ПАП-реакцию (пероксидаза. - антипероксидаэа) или реакцию непрямой иммунофпуоресценции.Гистологический диагноз, ставится на.параллельных парафиновых срезах, окрашенных гематоксилин-эоэином, до и независимо от иммуногистохимического исследования, на основании гистологической классификации опухолей молочных желез, предложенной ВОЗ. р 1, Доставленныи в Кусочек ткани молочно1477087 железы больной А удаленный прибиопсии, заливают в 7/-ный растворжелатина на забуференном физиологи.ческом растворе (ЗФР). Изготовленысерийные срезы на криотоме 1.ее2 ГОО, которые помещают на предметныестекла. Дляисследования берут двастекла (всего 6 срезов). Способ дифференциального определения доброкачественных и злокачественных опухолей молочных желез, включающий нанесение на гистологические срезы специических антител, о т л ич а и щ и й с. я тем, что, с целью повышения точности способа, используют моноклональные антитела к белкам промежуточных филаментов - кератина У 8, кератина Р 17 и виментина и при наличии трех филаментов определяют доброкачественную опухоль, а при наличии кератина Р 8 - злокачественную,И.Башкаевык КорректорС.Шекмар Составитель .Техред М.Дид Редактор Л.Павлова,Заказ 3331Тираж 531 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открь 1 тиям при ГКНТ СССР113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул, Гагарина, 101 10Гистохимическое исследование методом ПАП. Срезы фиксируют 4 Е-ным формалином на ЗФР 4 мин, отмывают в трех сменах ЗФР. Проводка по спиртамовосходящей крепости от 45 до абсолютного, обработка метанолом с 0,3 перекиси водорода 15-13 мин, проводка по. спиртам нисходящей крепости, Инкубация с испытуемыми Г 1 КАт: на каждый срез наносят по 20 мкг одного из ИКАт; против кератина У 17 (клон ЕЗ), против кератина Р 8 (клон Н 1), или . против виментина (клон .БТ 30) и инкубируют при комнатной температуре во влажной камере 30 мин, По окончании 25 инкубации МКАт тщательно убирают, для чего срезы промывают в. трех сменах ЗФР. Инкубация всех срезов с кро- личьей сывороткой против, мышиных гамма-глобулинов, специфически связы вающнх белки промежуточных филаментов. Отмывание в трех сменах ЗФР. Проявление специфического связывания с помощью комплекса пероксидаэа-антипероксидаэа. Промывание в трех сменах ЗФР. Выявление окраски специфической для пероксидазы, обработка 3-3 - днамино-бензидином"тетрахлоридом(ДАБ) и закрепление 0,5%-ным осмием до.5 мин. Проводка по спиртам восход 40 дящей крепости и заключение в канадский бальзам. На одном из стекол срезы докрашивают гематоксилином, Контрольные срезы обрабатывают. аналогичным образом, за исключением 1-й ин-кубации с испытуемыми К(Ат. Вместо МКАт срезы инкубируют с ЗФР, Готовыепрепараты можно хранить длительноевремя, Просматривают в просвечивающеммикроскопе, Фотографируют.на пленку Положительная реакция с МКАт оценивается по коричневому окрашиваниюцитоплаэмы.При микроскопии объекта видно, чтопролиферирующие клетки в альвеолахдольки положтельно окрашены накератин У 8, Р 17 и виментин. Данноесочетание маркеров свидетельствуето доброкачественной природе пролиферации. Гистологический диагноз, поставленный до и независимо от иммуногистохимического исследования: фиброэно-кистоэная болезнь, дольковаягиперплаэия,ФП р и м е р 2. Больная Б. Методикаиммуногистохимического исследованияаналогична примеру 1.Видно, что клетки, расположенныев просвете альвеол, окрашены толькона кератин В 8 и не окрашены на кератин 9 17. Последний выявляется только н клетках, окружающих пролиферати являющихся остатками предсущество-.вавших миоэпитепиальных клеток.По маркерной характеристике картина соответствует раковой опухоли, Вданном случае был поставлен гистологический диагноз долькового рака.Аналогичные результаты, как приПАП-реакции, дает реакция непрямойиммупофлуоресценции.Диагностическая эффекТивность способа показала, что точность способавозрастаег приблизительно на 60 ,Ф о р и у л а и к о б р е т е н и я