Способ оценки устойчивости картофеля к микромицетам fusаriuм sамвuсinuм fuск

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК 7027 1 Н 1/04 ИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ 1.следующим обОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИРИ ГКНТ СССР К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТ(56) Дорожкин Н, А., Михальчук В, Т. Методы оценки устойчивости к фузариознойгнили. - Селекция и семеноводство, 1979, 3,с. 19 - 20.(54) СПОСОБ ОЦЕНКИ УСТОЙЧИВОСТИКАРТОФЕЛЯ К МИКРОМИЦЕТАМ Г 8 АК 11)М 5 АМВ 1 С 1 М(М Г(1 СК(57) Изобретение относится к сельскому хозяйству и может быть использовано в селекции картофеля на устойчивость к болезням. Цель изобретения - ускорение оцен 1Изобретение относится к области сельского хозяйства и может быть использова. но в селекции картофеля на устойчивость к болезням.Цель изобретения - ускорение оценки и снижение трудозатрат.Способ осуществляетсяразом.Навеску муки из клубня картофеля экстрагируют 0,2 М МаС 1. Экстракт центрифугируют и получают солерастворимые белки. Определяют протеолитическую активность фермента, выделенного из фитопатогенного гриба, вызывающего сухую гниль картофеля, без добавления экстракта белков и в их присутствии. По способноти солерастворимых белков из различных по устойчивости к болезни образцов картофеля ингибировать активность ферментного препарата судят об устойчивости картофеля к сухой фузариозной гнили.Пример. Клубень картофеля пробуравли. вают сверлом по вертикальной и горизонки и снижение трудозатрат. Для оценки устойчивости картофеля к сухой фузариозной гнили навеску муки из клубня картофеля экстрагируют 0,2 М ХаС 1. Экстракт центрифугируют и получают солерастворимые бел. ки. Определяют протеолитическую активность фермента, выделенного нз фитопатогенного гриба, вызывающего сухую гниль картофеля, без добавления экстракта белков и в их присутсгвии. По способности солерастворимых белков из различных по устойчивости к болезни образцов картофеля ингибировать активность ферментного препарата судят об устойчивости картофеля к сухой фузариозной гнили. Показатель активности в среднем 40 мкг/г воздушно- сухого вещества свидетельствует об устойчивости, 20 мкг/го восприимчивости к указанному заоолеванию. 1 табл. тальной осям. Выссчку вь 1 суц вают на воздухе, смалывают и среднюю навеску мукив 50 мг экстрагируют 20 мл 0,2 М ХаС 1.Экстракт центрифугируют при 8000 об/мин 4 аь в течение 15 мин и получают таким об- ъ. разом надосадочную жидкость (ЖК), годер- ю жащую солерастворимые белю.Ферментный препарат, необходимый дляанализа, получают из культуральной кид-ф 4 кости гриба возбудителя сухой фузариозной в 4 гнили путем осаждения белка сульфатомаммония до 8000 насыщения, ра:творенияосадка в дистиллированной воде и пропуска.нием через колонку с акрилсксом Р в -00.Активную ферментную фракцию лиофилнзи- ф:в руют и используют для работы. Из одного1 л культуральной жидкости получают около250 мг лиофилизированного фермента возбудителя болезни. Для анализа используютконцентрацию 140 мкг/мл 0,2 М МаС 1.Для осуществления способа берутмлферментного препарата, 1 мл 0,06 М фосфатного буфера рХ 7,6. 1 мл 1 Я, казеина в1470271 4Д, - экстинкция пробы со смесьюфермент-надосадочная жидкость за вычетом контроля;о - объем экстракта;5т - навеска материала;140 - содержание фермента в мкг/мл.На основе экспериментальных данных выявлено, что существует тесная корреляционная зависимость между активностью соле- растворимого белка по отношению к фер менту фитопатогенного гриба и устойчивостью сортообразцов картофеля к инфекции.Показатель активности в среднем 40 мкгна 1 г воздушно-сухого вещества свидетельствует об устойчивости, 20 мкг - о восприимчивости, 26 мкг - о средней восприимчивости (таблица).Способ позволяет оценить большое количество образцов за короткий промежуток времени (30 образцов в трехкратной повторности за 7-часовой рабочий день). Для 20 определения требуется незначительное количество материала (50 мг). Способ прост в исполнении, не требует дефицитных, а также вредных для здоровья реактивов. Формула изобретения Индекс тнп устойИнгибито;ная активность белка, мкг, на возушносухое вещество, г Сортообразцы чино( тн пора- шения 3,73,933,53,62,2 устойчивые 34,45,43,38,42,34,В среднем 40,29,зо,гз,19,28,25,В среднем 26,21,20,17,20,18,22в среднем 20,46-823782763-13 101481-1 868254 4969-8дошицкий н устойчивые 5,2 6,7 5,О 5,506,911,2 15,8 14,9 11,8 1 О,411,9 БосприимчиСоставитель Л.Марченкова Редактор Л. Гратилло Техред И. Верес Корректор М. Максимишинец Заказ 1374/4 Тираж 618 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж - 35, Рау шская наб., д. 4/5 Производственно-издательский комбинат Патент, г. Ужгород, ул. Гагарина, 10130,06 М фосфатном буфере, рН 7,6 и инкубируют реакционную смесь в термостате при 37 С в течение 30 мин. Реакцию останавливают 3 мл 5%-ной трихлоруксусной кислоты (ТХУ). Смесь фильтруют и измеряют экстинкцию при 280 нм. Одновременно ставят контрольную пробу на реактивы. Для этого смешивают 1 мл фосфатного буфера, 3 мл 50-ной ТХУ, 1 мл казеина и 1 мл фермента. Смесь фильтруют и измеряют экстинкцию при 280 нм, Таким образом получают активность ферментного препарата (Д). Далее определяют активность фермента в присутствии солерастворимых белков. Для этого берут 1 мл ферментного препарата, 1 мл НЖ, 1 мл казеина и инкубируют реакциюнную смесь при 37 С в течение 30 мин. Реакцию останавливают 3 мл 5 охх-ной ТХУ. Смесь фильтруют и измеряют экстинкцию при 280 нм. Контрольная проба состоит из 1 мл НЖ, 3 мл 50 у-ной ТХУ, 1 мл казеина и 1 мл ферментного препарата, Смесь фильтруют и измеряют экстинкцию. Получают Д. Ингибиторную активность солерастворимых белков из картофеля выражают в микрограммах угнетенного фермента на грамм воздушно-сухой массы и определяют по формуле ИЕ ---- ф - оиД,г 77где ИЕ -- ингибиторная единица;Др - экстинкция пробы с ферментом завычетом контроля; Способ оценки устойчивости картофеля к микромицетам Гцзаг 1 цгп загпЬцс 1 пцгп Гцс 1 с путем определения биохимическго показателя, отличающийся тем, что, с целью ускорения оценки и снижения трудозатрат, в качестве биохимического показателя используют активность протеолитических ферментов возбудителя в присутствии солерастворимых белков картофеля, по величине которой оценивают устойчивость картофеля. 7+0,72 6+0,925+О,8 О 8+0,62 6+0,86 9+0,35 10,71 3+0,43 8+0,65 2 0,43 6+0,705+0,55 З.О,46 1;О,53 7+0,86 4+0,62 3+0,90 8+0,75 5+О 92 1+0,77 1+О,8 О