Способ получения стабилизированной формы папаина

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК 14217 159 4 ГО СЖВЦДУ.,ди,:,. ы Я", Щ;"тр,фа ьт:р ПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНАВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ А,Д но (5 НО АРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ(71) Всесоюзный кардиологическийнаучный центр АМЕ СССР, Московскийнаучно-исследовательский институтглазных болезней им.Гельмгольца иИнститут фармакохимии им, И.ГКутателадзе(56) Давыдов А.Б Майгут Ю.ФХромов Г.Л. Разработка высокоэффективного способа лечения глазных бо-.лезней, создание и внедрение в меди.цинскую практику нбвых лекарственныхсредств - глазных, лекарственных плек. МЗ СССР, М., 1978, с.3,4) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СТАБИЛИЗИРОВАНИ ФОРМЫ ПАПАИНА(57) Изобретение относится к медицине, точнее к биомедицинской химии, касается способа получения стабилизированной формы папаина. Цель изобрететния - повышение специфической активности. Для этого порцию альдегиддекстрана (АД) растворяют в 0,02 М фосфатого буфера рН 6,0 и добавляют цистеин (Ц) в 1 мл того же буфера. Молярное соотношение АД;Ц = 1:100. Через 10 мин перемешивания добавляют очищенный папаин в 1 мл 0,02 М фосфатного буфера рН 6,0, Смесь инкубируют приоперемешивании 20 ч при 4 Ср затем восстанавливают продукт боргидратом натрия. Затем модифицированное производ- а но фермента выделяют на системе ультрацильтрации и мофальио высушивают, (/) С носителем связывается 902 белка от исходного количества, сохраняемая пре- С паратом эстеразная активность ЗОБ. Содержание белка 257., кол-во БН- Б групп на моль фермента 2,16,3 щщй1421770 Предлагаемый способ получения модифицированных альдегиддекстраном водорастворимый иммобилизованный препарат молекулярной массы 55-85 .тыс. с остаточной каталитической активностью 30-80 от первоначальной, когда с носителем связывается до 90 . белка,содержание БН"групп 2,0-30,0 и при исходном соотношении альдегидцек"стран:цистеин от 1:100 до 1;1000,Формула и з о б р е т.-егн и я Способ получения стабилизированной формы папаина путем его присоединения к носителю, о т л и ч а ющ и Й с я тем, что, с целью повыше" ния специфической активности, в качестве носителя используют альдегиддекстран:цистеин в соотношении 1:(100-1000), диализуют, инкубируютс папаином и проводят обработку боргидратом натрия. Составитель С, Техред М,Морге Мельниковаитал Корректор М.Васильева Редактор В,Данко Заказ 4391/25 Тираж 520 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Производственно"полигргфическое предприятие, г, Ужгород, ул. Проекткгя, 4 Изобретение относится к медицине,а именно к биомедицинской химии, икасается способа получения стабилизированной формы папаина,5Цель изобретения - повышение специфичной активности.П.р и м е р 1. 100 мг альдегидгдекстрана (АД) растворяют в 3 мл,0,02 М фосфатного буфера рН 6,0 и добавляют 24 мг цистеина (Ц) в 1 мл того же буфера. Молярное соотношениеАД:Ц1:100. Через 10 мин перемешивания добавляют 20 мг очыценного папаина в 1 мл 0,02 М фосфатного буфера 15(рН 6,0). Смесь инкубируется прн перемешивании в течение 20 ч при 4 С,е затем проводят восстановление продукта боргидридом натрия. После этогомодифицйрованное производное фермента выделяется на системе ультрафильте 3рации Апасеп с фильтром УМи лиофильно высушивается, В результатеэксперимента с носителем связывается90 белка от исходного количества, 25сохраняемая препаратом эстеразнаяактивность 30 . Содержание белка 25 ,количество БН-групп на моль фермента 2,16,П р и м е р 2, Процесс осуществля- З 0ется так же, как в примере 1, эа исключением того, что на 100 мг АД добавляется 72 мг цистеина, молярное соотношение АД:Ц = 1:300. С носителемсвязывается 90 белка, сохраняемая,эстераэная активность 70 , содержание белка 25 , количество БН-группна моль фермента 4,32, Полученныйпрепарат является оптимальным по сво-им свойствам в ряду предлагаемых модифицированных производных папаина,П р и м е р 3. Процесс осуществляется так же, как в примере 1, за исключением того, что на 100 мг АД добавляется 120 мг цистеина, молярное 45соотношение АД:Ц = 1:500. С носителемсвязывается 90% белка, сохраняемаяэстераэная активность 45 , содержание белка 25 , количество БН-групп,на моль фермента 20. П р и м е р 4, Процесс осуществляется так же, как в примере 1, за исключением того, что на 100 мг АД добав" ляется 240 мг цистеина, малярное соотношение Ад:Ц = 1:1000. С носителемсвязывается 90 белка, сохраняемаяэстеразная активность 45%, содержаниебелка 25 , количество БН"групп намоль фермента 33. производных папаина с защитным цистеиновым окружением позволяет получать При местном применении для леченияпоражения глаз папаина полученногопо предлагаемому способу, уже к концу .3-х суток констатируется практическиполное исчезновение крови в переднейкамере глаза, в то время как препарат по известному способу обладаетменее выраженным литическим эффектом.и его воздействие на поражение глазменее эффективно (тотальная гефемазалечиваетсяв срок не менее 10 сут),при этом наблюдаются побочные явления;гиперемия коньюнктивы, началь"ные явления. кератита и т,д,