Способ определения устойчивости растений к вирусу желтой мозаики фасоли

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ РЕСПУБ 19) 4 А 01 Н е НИ Вг"хЕА ЕЛЬ 21) 4147891/3022) 17. 11. 8646) 07,07,88,71) Университем. Патриса Лум72) И.А. ЧумикМ.А. Келдьпп53) 631.52(088 ОБ ОПРЕДЕЛЕК ВИРУСУ юл. В 25дружбы народобы, Ю,И. Помазков в о(56) Палиловатурный способ тойчивости се картофеля. Те союзного сове с, 69-7 1. тм Ж ОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРО ДЕЛАМ ИЗОбРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ ПИСАНИЕ К АВТОРСКОМУ СВИД А.И, и др. Ультрастру определения вирусоусекционного материала исы докладов Ч 111 Все ания. - Вильнюс, 198 щ ига, ьур с3 г .1(54) СПОС НИЯ УСТОФЫВОСТИ РАСТЕНИЙ ЖЕЛТОЙ МОЗАИКИ ФАСОЛИ(57) Изобретение относится к сельск му хозяйству и позволяет ускорить и упростить способ. Вьщеляют изолированные хлоропласты с получением суспензии хлоропластов с концентрацией хлорофилла 60-120 мкг/мл, Суспензию инкубируют, перемешивая с очищенным вирусным препаратом с концентрацией вируса 50-200 мкг/мл в течение 1-2 чов темноте при 2-4 С. Измеряют выделе ние хлоропластами кислорода на свету в присутствии феррицианида калия, Устойчивые сорта по сравнению с кон ролем быстрее выделяют кислород, че восприимчивые к вирусу.1407457 Лзобретение относится к сельскомуозяйству и может быть использованоселекции сельскохозяйственных расений на иммунитет,Цель изобретения - ускорение ипрощение способа.П р и м е р. Растения гороха ввозрасте 4-6 недель двух различныхго устойчивости к вирусу желтой мо.аики фасоли сортов Рамонский (восиимчивый) и Перфекшн (иммунный)ьдерживают в темноте не менее 24 ч.стья с растений измельчают в ступе или гомогенизаторе в среде слеющего состава, г/л: сорбит 66,ерев 11,92, ЭДТА 0,756, МяС 1 0,476,аС 1 0,293, бычий сывороточный альин 1; рН 7,8, Соотношение листьевсреды 1:10. Все операции выполняютО20и 4 С. Гомогенат фильтруют череза слоя капрона или нейлона и центу фугируют при 3000 об/мин. Осадокоропластов ресуспендируют в средев деления мягкой кисточкой в 1/5о первоначального объема среды ие е раэ осаждают при тех же условиях,Р суспендируют в том же объеме средыв деления без альбумина. Определяютс держание хлорофилла в суспензииоропластов по Ариону и доводят егос едой до 60 мкг/мл. Затем суспензиюоропластов одного сорта гороха дел т пополам и в одну часть приливаютс спензию вируса, в другую - равныйо ъем раствора, в котором вирус рес спендирован (на 1 мл раствора берутс рбита 66,0 мг, Нерев-ИаОН 11,92 мг,г,ицерина 1, О мл, рН 8,5) .Конечная концентрация вируса вссцензии хлоропластов 100 мкг/мл,Пфученные смеси инкубируют в темнотФ в течение 2 ч при 4 С, перемешивая на магнитной мешалке, установленной на минимальной скорости. ЗатемхЛоропласты осаждают при 3000 об/мини промывают один раз средой выделения без альбумина повторным центрифугированием. Определяют хлорофилл в каждой суспензии, Для определения скорости выделения кислорода содержание хлорофилла 60 мкг/мл. Скорость выделения кислорода определяют на полярографе ОН с использованием электрода Кларка В суспензию хлоропластов вводят 6 мг феррицианида калия КРе(СИ) и фиксируют скорость выделения кислорода на свету (20 тыс.лк). Результаты выражают в микромолях кислорода на 1 мг хлорофилла в 1 ч. Расчет ведут, учитывая скорость выделения кислорода за вторую минуту от начала выделения.Устойчивые сорта по сравнению с контролем быстрее вьделяют кислород, чем хлоропласты восприимчивых,Предложенный, способ значительно ускоряет и упрощает оценку вирусоустойчивости при создании непоражаемых сортов и гибридов. формула и э обретения Способ определения устойчивости растений к вирусу желтой мозаики фасоли, включающий вьделение изолированных хлоропластов и измерение показателей, корреляционно связанных с вирусоустойчивостью, о т л и ч а ющ и й с я тем, что, с целью ускорения и упрощения способа, в качестве показателя используют выделение хлоронластами кислорода на свету в присутствии феррицианида калия, при этом вьделение изолированных хлоропластов. осуществляется с получением суспензии хлоропластов с концентрацией хлорофилла 60-120 мкг/мл, которую перед измерением инкубируют, перемешивая с очищенным вирусным препаратом с концентрацией вируса 50- 200 мкг/мл в течение 1-2 ч в темноте при 2-4 С. Составитель Л,МарченковаТехред А.Кравчук Корректор М,Васильева Редактор А.Мотыль Заказ 3232/3 Тираж 661 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб д, 4/5