2-(5-нитротиазолил-2-азо)фенолсульфокислота в качестве реагента для обнаружения белков в полиакриламидном геле

(19) 111) 51)4 С 07,0 277/8 01 И 33/ ОПИСА ОБРЕТ ОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ ССС О ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫ ВТОРСКОМ,/ СВИ ЕТ(56) Каутпапс 1 Б., ЪГапд 1.-Р. РгерагаГгопя,апс 1 ргорегГея оГ асгу 1 ашгс)еяе 1 аког цяе п е 1 есСгорйогеяея.Апа 1. Вз.осетп. 1960,8, р, 391-396.(54) 2-(5-НИТРОТИАЗОЛИЛ-АЗО)-ФЕНОЛСУЛЬФОКИСЛОТА В КАЧЕСТВЕ РЕАГЕНТАДЛЯ ОБНАРУЖЕНИЯ БЕЛКОВ В ПОЛИАКРИЛАМИДНОМ ГЕЛЕ(ТФК), которая может быть реагентомдля белков в полиамидном геле. Длявыявления соединений указанного класса, позволяющих сократить время обнаружения белков при электрофорезе, в полиамидных гелях было получено новое замещенное тиазолина 1. Его получение ведут нитрозированием 2- амино-нитротиазола в среде концентрированной Н РО с помощью ИаЯО, в присутствии НИО с последующим азовсочетанием с п-фенолсульфокислотой, растворенной в водном этаноле, при охлаждении до (-2)-0 С, ТФК очищают, переосаждением из этанола. Выход 41,47 11 ри использовании ТФК для гелей, которые они окрашивают, не требуется время для отмывания фона красителя в противоположность известному - с красителем амидовым черным ЮБ нужно 15-20 ч при высоком расходе 7 Е-ного раствора СН СООН -200-300 мл. Определяемая с помощью ТФК концентрация белков составляет 10 6 -10 моль/л.1 табл.1286598 20 Краситель Расход77-ной уксусной кисВремяотмывания фона кра лоты мл сителя 2-(5-НитроЗ 0 тиазолил-азо)- фенолсульфо- кислота 0 Амидовый черный10 Б 15-20 200-300 Кумасси голубой Б.-250 200-3 00 Он ираж 371 Подписное ИИПИ Заказ 7681/24 Произв,-полигр. пр-тие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 Изобретение относится к новомухимическому соединению, конкретнок 2-(5-нитротиазолил-азо)-фенолсульфокислоте, которая может бытьиспользована в качестве реагента дляобнаружения белков.Цель изобретения - новые реагенты,позволяющие снизить время обнаружения белков при их электрофорезе в полиакриламидном геле.10Изобретение иллюстрируется следующими примерами,П р и м е р 1, Диазотирование2-амино-нитротиазола.В круглодонную колбу объемом на500 мл, снабженную механической мералкой, капельной воронкой и термометром, помещают 14,7 г (0,1 м)2-амино-нитротиазола, растворенного в 100 мл концентрированной ортоФосфорной кислоты. К смеси приливают80 мл концентрированной азотной кислоты, раствор охлаждают до (-2)-0 Си медленно в течение 15-20 мин, покаплям приливают 6,9 г (0,1 м) нитрита натрия, растворенного в минимальном количестве воцы. После прибавления всего нитрита натрия раствор перемешивают 10 мин. Полученныйдиазораствор используют для сочетания с и- фенолсульфокислотой.Для проведения реакции азосочетания к 19,6 г (0,1 М) и-Фенолсульфокислоты, растворенной в 300 мл водного спирта (1:1), при охлаждении до .35(-22)-0 С и перемешивании приливаютнебольшими порциями в течение 30 миндиазораствор 2-амино-нитротиазола.При этом выпавший мелкодисперсныйосадок красно-желтого цвета оставля 40ют на ночь при охлаждении, Полученный продукт очищают переосаждениемиз этилового .спирта водой, сушат навоздухе. Выход 15 г (41,47). Для анализа полученное вещество перекристаллизовывают из муравьиной кислоты.Найдено, 7.: С 29,62; Н 2,07.СН 811 0 Н 0Вычислено, 7.: С 31,03; Н 2,29,П р и м е р 2. Злектрофорез белков 0(рибонуклеазы, гистона) в полиакриламидном геле (ПААГ) проводили в трубках диаметром 5 мм высотой 100 мм.После электрофореза гели окрашивали0,27-ным раствором 2-(5-нитротиазолил-азо)-фенолсульфокислоты в смеси этанол - вода - уксусная кислота (5:5:1),Параллельно для сравнения гели окрашивали 0,2%-ными растворами амидо-черного 10 Б и кумасси голубого Рв смеси этанол - вода - уксусная кислота.(5:5:1). Затем гели, окрашенные растворами амидо-черного 10 Б и кумасси голубого Котмывали 77-ным раствором уксусной кислоты. Во всех случаях белки определяли по появлению окрашенных зон.Для гелей, окрашенных раствором 2-(5-нитротиазолил-азо) фенолсульфокислоты, не требуется дополнительная отмывка красителя, что делает. удобным его применение при серийном анализе (см. таблицу). Определяемая с помощью 2-(5-нитротиазолил-азо)-фенолсульфокислоты-6 концентрация белков составляет 10 10 моль/л. Формула и з о б р е т е Р и я 2-(5-Нитротиазолил-азо)-фенолсульфокислота формулы в-ыо,зо,н в качестве реагента для обнаружени белков в полиакриламидном геле,