Способ реверсии l-форм микобактерий туберкулеза

СОЮЗ СОВЕТСКИСОЦИАЛИСТИЧЕСНРЕСПУБЛИН О 1/02/ у) .С 11 // 1/00 //(с 12 и 1/ 2 Е 1:32 ЕН для ми пересе сл едоват ел слаева ельство СССР 1/00, 1984,.-ФОРИ И 1 КОБ микоба рии тубер вежей кул довании2-4 суНа 6-7ется. я к медицитности кЦель изоборение сп и алоис содгсут процесс з.п. ф-лы. посева, тики, б окрашив скопиру (х 90),строго соблюдая пра рут мазок-отпечаток ют по Цилю-Нильсену т с иммерсионным об ила асеп- Иа зокмикр Начиная со 2 сут (иногда на 4- 6 сут) на фоне некислотоустойчивых синих шаров 1.-форм появляются кислотоустойчивые зерна и палочковидные структуры. В некоторых случаях палочковидные формы сначала могут быть некислотоустойчивыми (синий цвет), затем в них появляются красные кислотоустойчивые зерна и происходит формирование кислотоустойчивыхпалочковидных микобактерий.Для получения культурыревертанта после недели культивирования. на чашке Петри соскоб с поверхности питательной среды в месте посева переносят в жидкую среду Ыкольниковой с 102 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОЩРЫТИЯПРИ Гкнт СССР ОПИСАНИЕ ИЗО(57) Изобретение относитсской микробиологии, в часдиагностике туберкулеза.ретения - упрощение и уск Изобретение относится к мской микробиологии, в частности к диагностике туберкулеза.Цель изобретения - упрощение и ускорение способа.Способ заключается в следующем. На чашке Петри с плотной личной средой Левенштейна-Йенсена или Финна платиновой гетлей очерчивают окружность диаметром приблизительно 1,5 см, Стерильной пипеткой набирают культуру 1-форм, выращенную из патологического материала на модифицированной среде Школьниковой, и наносят на очерченный круг в количестве 0,1-0,2 мп. Чашку Петри. помещают в плотно закрытый полиэтиленовый мешок или пластиковый контейнер во избежание высыхания среды и инкубируют при 37 С в течение 7 сут, Через каждые сутки с поверхности среды в участке 2 соба, Исследуемый м вают в полужидкойкобактерий, з вают на плоти например Левенштейн Финна. Посев осу кратно, локально в личество посевного0,2 мл, Ежедневно гные микроскопическвыявления кислотоус атериал подращипитательной средеатем культуруую яичную среду,Йечена илиществляют одноцентр среды, коматериала 0,1- отовят окрашене препараты для тойчивых форм улеза. При исслетуры, начиная с реверсия 1.-форм. реверсии заверша 1604841сыворотки крупного рогатого скотаили непосредственно на косяки сяичной средой Левенштейна-Йенсенаили Финна.П р и м е р 1, Берут культуруЬ-форм микобактерий, выделенную измокроты больного. Культуру выращивают на полужидкой среде Школьнико. -вой в модификации Дорожковой, В мазке с исходной культуры при окраскепо Пилю-Нильсену обнаружены зернистые шары Ь-форм микобактерий, пред. ставляющие округлые образования синего цвета размером около 5 мкм безядра, Кислотоустойчивые микобактериине обнаружены. Производят посев культуры на чашку Петри с яичной средойЛевенштейна-Йенсена. Через каждыесутки готовят мазки-отпечатки с места посева. Уже через 24 ч в единичныхшарах обнаруживают зернистые кислотоустойчивые микобактерии,Дляпроверки воспроизводимостирезультата способа опыт повторен через 2 мес: произведен повторно посевтой же культуры, хранившейся в холодильнике, на чашку Петри со средойЛевенштейна-йенсена, Через 1 сут реверсии не наблюдалось, через 4 сутв зернистыхшарах Ь-форм обнаруженыкислотоустойчивые зерна, а через6 сут и кислотоустойчивые палочки.Этот пример демонстрирует воспроизводимость результатов способа с некоторым удлинением времени реверсии,что может быть обусловлено длительным хранением культуры Ь-форм, приведшим к снижению ее жизнеспособности.После пересева с чашки Петри нажидкую среду Школьниковой, а затемпосле недели культивирования - накосяки с плотной средой ЛевенштейнаЙенсена получена культура микобактерий, дающая рост в виде гладких, пигментированным, оранжевых колоний,которая была идентифицирована какскотохромогенная атипичная культура,Одновременно иэ мокроты больногополучен рост типичной культуры микробактерий туберкулеза. Полученные дан.ные о наличии у больного смешаннойкультуры микобактерий туберкулеза иЬ-форм микобактерий, реверсирующихв атипичные микобактерии, позволяютизменить тактику химиотерапии.П р и м е р 2, Культуру Ь-форм,микобактерий, выделенную иэ лимфатического узла ребенка, засевают на чашку Петри с плотной яичной средойФинна, При изучении маэков-от-.печатков, полученных через 1 и 2 сут,обнаружены лишь скопления синих некислотоустойчивых зернистых шаров.Через 3 сут зернистость теряет четкость очертаний и распадается на си 10 ние гомогенные облаковидные скопления, на фоне которых появляются кислотоустойчивые зерна. Через 4 сутв мазках выявляют кислотоустойчивыепалочки. Через 20 дн.после пересевана косяки со средой Финнаполучентипичный рост микобактерий, идентифицированных как микобактерии туберкулеза человеческого вида,При гистологическом исследованиилимфатического узла, иэ которогополучен рост Ь-форм микобактерий,реверсировавших затем в микобактериитуберкулеза, в нем обнаружены лишьказеозные массы без признаков актив- .25 ного туберкулеза.П р и м е р 3. Культуру Ь-форм,выделенную из экссудата больного(диагноз - плеврит неясной этиологии, ВК-), засевают на чашку Петрисо средой Левенштейна-Йенсена. Последующей микроскопией мазков-отпечатков с чашки выявляют появлениекислотоустойчивых зерен и зернистыхформ микобактерий на 4 сут после засева. После высека на яичные сРедыполучен рост бактерий туберкулезачеловеческого вида, Реверсия подтверждает специфическую этиологиюпроцесса, позволяет уточнить диагноз4 О и химиотерапевтическую тактику,1По сравнению с известным способом,предусматривающим проведение пассажейна куриных эмбрионах, предлагаемый45 способ более прост, не требует экспериментальных животных и позволяет вболее ранние сроки идентифицироватьЬ-формы микобактерий,Формула изобретения501. Способ реверсии Ь-форм микобактерий туберкулеза, включающий посев исследуемого материала в полужидкую питательную среду, пересев иинкубирова- ,55 ние культуры,ежедневный бактериоскопический контроль инкубируемой культуры и определение наличия реверсии по появлению кислотоустойчивых форм,1604841 6культуру вносят в количестве 0,10,2 мл локально.2. Способ по п. 1, о т л и ч а 5ю щ и й с я тем, что в качествеэлективноь среды используют средуЛевенштейна-Йенсена или Финна.,о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью упрощения и ускорения способа, пересев культуры осуществляют однократно на плотную элективную среду для микобактерий, при этом Составитель Г. СмирноваТехред М.Ходанич 1(орректор Л.Патай Редактор Н.Яцола Заказ 3434 Тираж 495 ПодписноеВНИИПИ Государственногс .митета по изобретениям и открытиям 113035, :.сква, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Производственно в издательск комбинат "Патент", г.Ужгород, ул. Гагарина,101