Способ идентификации ингибиторов -амилаз

Номер патента: 1175967

Автор: Конарев

ZIP архив

Текст

СОЮЗ СОВЕТСНИХсОцИАлистичеснихРЕСПУбЛИК ЯО 3 37596(51)4 С 12 Я 1 гОсудАРственнцй кОмитет сссРпо делдм изаб етений и ОткРытий ррГ;дрищОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ ., цН АВТОРСКОМУ ОЗИДЕТЕЛЬСТВУюиюэ.язв,геля ерж рН,но акрил л, с - т опт милазу и буфе мального, инк бациизначеере и темпе птималь ового К вательс ы с после сй личающии ом,оз ия ра фракю овышсоб ц нос ство СССРО, 1982,не сотем проводят вхмала с-амилна разделяющиержащий крахрхивают в те зы,й ге ь гел с-ами 30 мал и чение(71) Всесоюзный орденаного Знамени научно-исинститут защиты растен(54)(57) СПОСОБ ИДЕНТИФИКАЦИИ ИНГИБИТОРОВ К-АМИЛАЗ путем фракционированиябелков в гелях с использованием пластины поли щеи крахм отличным геля в бу ниях рН и окраской ся тем, чт решающей спо ционирование держащих кра накладывают реплику, сод лазу, и выде 90 мин.11759 б 7 Составитель Н.Гуляева Техред С,Мигунова Корректор М.Пожо Редактор Л,Пчелинская Заказ 5312/30 Тираж 525 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Филиал ППП "Патент", г, Ужгород, ул. Проектная, 4 Изобретение относится к биохимии растений и может быть использовано для защиты растений, в общей биохимии и биохимии пищеварения, генетике и селекции растений. 5Цель изобретения - повышение разрешающей способности способа,П р и м е р, Идентификация ингибиторов 4,-амилаэы мучного хрущака. О1 О мг муки пшеницы или другого знака заливают 0,2 мл 2 М мочевины и оставляют на 18 ч при 4 С. Экстракцию проводят в лунках пластмассовой кассеты, предназначенной для 60 об разцов, Кассету помещают в термостат на 20 мин при 80 С, Раствор белкаонаносят на пластину разделяющего тела при помощи полосок фильтровальной бумаги 5 3 мм, впитавших по 3 мкл 2 О экстракта, На одной пластине разделяющего геля анализируют одновременно 40 образцов. Гель содержит 5,87, акриламида, 0,253 метиленбисакриламида, 17 амфолин (ц 1 КВ") рН 5-8 и 2 М 25 мочевину, Для приготовления геля размером 240 120 1 мм к 30 мл дегазированного раствора добавляют 30 мкл ТЕМЕДа и 1,5 мл раствора рибофлавина (4 мг на 100 мл), Разделяющий гель помещают на охлаждающую пластину прибора Мультифор" или другого прибора подобного типа. В качестве электродов служат бумажные полоски, смоченные 0,1 М МаОН (катод ) и 0,5 М фосфорной кислоты с 0,1 М глутаминовой кислотой (анод 7. Разделение ведут 2 ч при напряжении 1800 В, после чего удаляют электродные полоски и на разделяющий гель накладывают гель-реплику следующего состава 5,8 Е акриламид, 0,257. метиленбисакриламид, 2 М мочевины, буфера рН 8,3, содержащего 0,0074 М трис и 0,057 М глицина, 0,17. крахмала и О=амилаэ мучного хрущака в концентрации, достаточной для разрушения всего крахмала в геле за 30 мин при оптимальных условиях, Размер геля 240 120 2 мм. Разделяющий гель и гель в репли находятся в контакте 30 мин при 20 С, послео чего гель-реплику помещают в ацетатный буфер рН 5,4, содержащий 0,1 М ИаС 1 и 0,001 М СаС 1 2, Гель инкубируют в буфере при 37 С, За степенью разрушения крахмала следят, отрезая небольшие участки с краев геля и помещая их в раствор иода. Когда эти участки начинают приоб- ретать оранжевую окраску, гель-реплику заливают раствором иода (100 мг иода и 500 мг иодистого калия на 0,5 л воды , Зоны, содержащие ингибиторы Й;амилазы насекомого, окрашиваются в синий цвет. Гель фотографируют на фотопленку в проходящем свете. Окрашенные пластины геля могут храниться в растворе иода несколько недель.

Смотреть

Заявка

3618458, 08.07.1983

ВСЕСОЮЗНЫЙ ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ НАУЧНО ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ЗАЩИТЫ РАСТЕНИЙ

КОНАРЕВ АЛЕКСАНДР ВАСИЛЬЕВИЧ

МПК / Метки

МПК: C12Q 1/40

Метки: амилаз, идентификации, ингибиторов

Опубликовано: 30.08.1985

Код ссылки

<a href="https://patents.su/2-1175967-sposob-identifikacii-ingibitorov-amilaz.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентов СССР">Способ идентификации ингибиторов -амилаз</a>

Похожие патенты