Способ определения активности -лизин -оксидазы
Похожие патенты | МПК / Метки | Текст | Заявка | Код ссылки
Текст
( 9) 1 1) ТЕТ СССРИ ОТНРЫТИЙ РЕТ ТВ юл. В 23ва, Т.Т. Верезо ружбы народов ельство СССР 1/00, 1983.ЕЛЕНИЯ АКТИВИДАЗЫ путем кульа ТгсЬодегдпа ГОСУДАРСТВЕННЫЙПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕН ОПИСАНИЕ ИЗО Н А 8 ТОРСИОМУ СВИДЕТЕЛ.НОСТИ Ь-ЛИЗИН-ф-ОКСтивирования гриба ро центрифугирования водного экстрактакультуры гриба, внесения в реакционную смесь водного экстракта культуры гриба буферной смеси, Ь-лизина,пероксидаэы, 0-дианизидин-гидрохлорида и последующего спектрофотометрирования окрашенного продукта реакции, о т л и ч а ю щ и й с я темчто, с целью повышения чувствительности способа, в качестве буфераиспользуют 0,05 И фосфатный буферрН 5,7-5,9 при концентрации Ь-лизина 0,5 мМ.3268 г хлорид 250 мкгВодныйэкстракт 0 1-0 5 мг белка.У У е35После 20 мин инкубирования в ультратермостате при 37 ОСпробы охолаждают до 4 С и добавляют 1 мл концентрированной НСЕ для прекращения реакции (НС предварительно охлаждается до 0-4 ) . Оптическую плотность окрашенных растворов опытной иконтрольной (без субстрата) проб измеряют на спектрофотометре,СФпри 540 нм против второи контрольнои 5 пробы (без пероксидазы).Для построения калибровочной кривой молярность свежеприготовленного раствора НО определяют перманганатометрией. Строят калибровочную кривую по Н,О, . Субстратами служат Ь-лизин и 0 Ь-лизин (фирма "Кеапа 1", Венгрия). Применяют 0,05 М фосфатный. Известный способ,ед Предлагаемыйспособ,ед. Названиекультур Тгдсйойегпа НеыагкшКЫа 90 12,5 ТгхсЬос 1 ег- па копщдОпй ВКМР - 1283 0 1,3 1 116Изобретение относится к биохимии,конкретно к биохимическим способамопределения активности ферментов,в частности Ь-лизин-ю-оксидазы и может быть применено в микробиологии,биохимии, медицине, ферментной промьппленности.Целью изобретения является повышение чувствительности способа.П р и м е р. Культуру Тгдспойегдпя зр. выращивают в колбе на250 мп на среде, содержащей МаИО11,47 (14 мп) пшеничные отруби 10 ги дистиллированную воду 10 мл.Культуру выращивают в течение14 дней при 28 С. Затем в колбудобавляют 100 мл стерильной НО и втечение 2 ч культуру встряхивают,отжимают через ткань и центрифугируют, Активность Ь-лизиноксидазыв водном экстракте культуры рассчитьвают по приросту,Инкубационная смесь содержит в1 млФосфатныйбуфер 50,0 мк/моль (0,05 М)Ь-Лизин 0,5 мк/моль (0,5 мМ)Пероксидаза 20 мкг0-Диани- зидин- -гидро 5 10 15 2 О 25 30 В качестве катализатора пероксидазной реакции используют пероксидазу фирмы "кеапа 1" в качестве донора протонов - 0-дианизадингридрохлорид (фирма "Мегс 1 с", ФРГ) . За единицу активности принимают количество фермента, катализирующего образованиемк/моль Н 0 за 1 мин при 37 С. Удельную активность фермента выражают числом единиц активности на 1 мг белка или на 1 мл водного экстракта культуры. Белок определяют по методу Лоури.Оптическую плотность окрашенного раствора измеряют спектрофотометрически при 540 нм, Количество образующейся культуры в 1 мин в стандартных условиях рассчитывают по калибровочному графику.При исследовании ТгсЬойегпа Ьегхапиш Клад оптическая плотность исследуемой пробы 0,110, т.е. количество Н,О которое образовано, равно 90 нмоль. Удельная активность фермента на 1 мл водного экстракта равна 90 ед.В таблице приведены сравнительные данные по определению активности Ь-лизин-(-оксидазы известным и предлагаемым способами в разных культурах рода Тгспооегпа. Предложенный способ обеспечивает повышение точности определения фермента на порядок, а также возможность определения активности у штаммов-продуцентов не только с выраженной активностью фермента, но и у тех, где эта активность ранее не выявлялась.
СмотретьЗаявка
3584374, 21.04.1983
УНИВЕРСИТЕТ ДРУЖБЫ НАРОДОВ ИМ. П. ЛУМУМБЫ
СМИРНОВА ИРИНА ПАВЛОВНА, БЕРЕЗОВ ТЕМИРБЛАТ ТЕМБОЛАТОВИЧ, СЯТКИН СЕРГЕЙ ПАВЛОВИЧ
МПК / Метки
МПК: C12Q 1/00, G01N 33/48
Метки: активности, лизин, оксидазы
Опубликовано: 23.06.1985
Код ссылки
<a href="https://patents.su/2-1163268-sposob-opredeleniya-aktivnosti-lizin-oksidazy.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентов СССР">Способ определения активности -лизин -оксидазы</a>
Способ определения активности фермента карбоангидразы
Номер патента: 207856
Опубликовано: 01.01.1968
Авторы: Сруогините, Юконите
МПК: G01N 21/80
Метки: активности, карбоангидразы, фермента
...едмет изо тения Способарбоанг определения актразы на основ мента скоро вн остиизмерен Известны способы определения активностифермента карбоангидразы на основе измерения скорости реакции нейтрализации СО 2 доопределенного значения рН раствора. Однако эти способы недостаточно точны вследствне визуального наблюдения за изменениемокраски индикатора, занимают много времени и предусматривают использование металлической ртути.Предлагаемый способ отличается тем, что 10учет скорости хода контрольной и катализируемой карбоангидразой реакции производят фотоэлектроколориметрированием,Такая методика анализа позволяет обеспечить более высокую точность, сократить 15время его проведения и исключает использование металлической ртути.Для определения...
Способ подготовки ферментных препаратов и реактивов для определения активности ферментов
Номер патента: 490807
Опубликовано: 05.11.1975
МПК: C07G 7/02
Метки: активности, подготовки, препаратов, реактивов, ферментных, ферментов
...воду и химически чистый глицерин в соотношении 1: 1,5, готовят 0,04 М раствор перекиси водорода и раствор пероксплазы нз расчета 1 г сухого хрена на 10 лл растворителя, и 0,1 М спиртовой раствор гваякола.Ферментный раствор, раствор перекиси водорода и спиртовой раствор гваякола раздельно охлаждают до минус 10 С, а затем смешивают 6 мл раствора ферментного препарата, 2 лгл спиртового раствора гваякола и 2 гял раствора перекиси водорода в термостатпруемой трехгорлой колбе со шлифамн, оснащенной термометром лля измерения м инусовых температур. При постоянном контроле в колбе поддерживают температуру - 10 С с точностью определения й 1 С.490807 где / - температура.На основе полученных данных установлено, что с понижением температуры...
Осадитель для определения активности фермента рибонуклеазы
Номер патента: 493731
Опубликовано: 30.11.1975
Авторы: Горчакова, Скридоненко
МПК: G01N 33/16
Метки: активности, осадитель, рибонуклеазы, фермента
...тканевых экстрактах, гомогенатах, культуральных жидкостях микроорганизмов, а также в сыворот ке крови.Известен осадитель для определения активности фермента рибонуклеазы в биологических объектах, содержащий 0,01 М раствор хлористого магния в 50%-ном эталоне. 10Однако известный осадитель не обеспечивает необходимой точности воспроизведения результатов анализа определения активности рибонуклеазы.С целью повышения точности определения 15 активности рибонуклеазы в состав магнийэтанолового осадителя включают лантан ацетат и ацетатный буфер рН 5,0 - 5,4 при следующем соотношении компонентов, вес, %:Лантан ацетат 0,07 - 0,2 20 Хлористый магний 0,4 в 1,0 Этанол 75,0 - 80,00,1 М ацетатный буферрН 50 - 54 ОстальноеП р и м е р, 1 мл стандартной...
Способ определения мальтазной активности ферментов
Номер патента: 572496
Опубликовано: 15.09.1977
Авторы: Бендецкий, Павлова, Яровенко
МПК: C12D 13/10
Метки: активности, мальтазной, ферментов
...Другая смесь является контрольной и содержит те же компоненты, за исключением глицерина,10 15 Ацетатньш буфер 1 и.рН 4,7 1Раствор препарата фермента 6Вода Итого Глицерин ПНФГ 0,25%КонтрольОпыт 2 10 10 0,2 мл 5%-ной соды, Оптическую плотность окраски измеряли на ФЭКМ при синем све тофильтре при длине волны 400 в 4 нм.Выход глюкозы определяли с глюкозооксидазным реактивом по модифицированному методу Далквиста. На анализ брали по 0,5 мл инкубационной смеси, В результате 30 получили данные, приведенные в табл. 1.Значения степени трансглюкозилирования Т вычислили по формулеТ=1ДЕпнф к ДЕу оп1 3ДЕпнф,оп ДЕу,кгде ЛЕпнф,н и ЛЕпнфп - прирост экстинций ПНФ за время инкубации в контроле и в опыте соответственно, ЛЕоп и ЛЕу, - пРирост экстинций проб...
Способ определения амилолитической активности ферментов
Номер патента: 612955
Опубликовано: 30.06.1978
Авторы: Евтихов, Ермошкин, Новоселова, Тунев
МПК: C12D 13/10
Метки: активности, амилолитической, ферментов
...крахмала. К 10 г крахмала (с учетом влажности) додавляют 30 мл дистиллированной воды, тщательно перемешивают и вносят в 300 мл кипящей дистиллированной воды при постоянномперемешивании. Кипятят 3 мин, затем охлаждают и переносят в мерную колбу на 500 мл,прибавляют 50 мл ацетатного буфера с рН4,7, доводят объем до метки дистиллированной водой.2. Ацетатный буферный раствор (рН 4,7).Ацетатный буферный раствор приготавливается из равных объемов 1 н. раствора уксусной кислоты (58 мл ледяной уксусной кислоты в 1 л) и 1 н, раствора уксуснокислого натрия (88 г СНзСОО 1 Ма в 1 л, рН 4,7).3. Основной раствор йода 5,5 г кристаллического йода (ГОСТ 4159 - 64) растворяют в40 мл дистиллированной воды и доводят егообъем водой до 250 мл. 4. Рабочий...
Предыдущий патент: Способ определения активности пероксидазы в биологических жидкостях
Следующий патент: Устройство для измерения скорости движения поезда
Случайный патент: Валковая мельница