Способ исследования функциональной активности сердечной мышцы

(19) (11) СПУБЛИК 51) С 01 В 33/4 ИЯ СТВУ ределяют вдобавляютрации 170 чески измещения ионофузионномв перфузатряют концетакже скори активносформуле дарственны им.Н.Н.Бур(С - С ) П ( М активнос концентр с добавл исходная ионов ка скорость протока 1 масса се ь АТФ-аэы;ция ионов калнием уабаина;концентрацияия;коронарного г ца. УДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИ ПИСАНИЕ ИЭОБРЕТ К АВТОРСКОМУ СВИД(71) Воронежский госу ймедицинский институтденко(54)(57) СПОСОБ ИССЛЕДОВАНИЯ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ СЕРДЕЧНОЙМЫШЦЫ путем определения активностинатрий-калий АТФ-азы с использованием уабаина, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью повышенияфизиологичности способа, исследование проводят на интактном перфузируемом сердце, при этом вначале опс серФа, а в перфузат хлорид натрия в концент мМ, далее ионометрияют интенсивность поглокалия в оттекающем. перастворе, затем вносятуабаин и повторно изметрацию ионов калия, а сть коронарного протока 1 ь Фермента определяют псМактивность АТФ-азы;концентрация ионов калияс добавление уабаина;исходная концентрацияионов калия;скорость коронарногопротока;масса сердца.осуществляют следующим 5 О где А С60 Изолированное сердце животного (лягушки, крысы, морской свинки, кролика и т.д.) взвешивают и затем перфузируют раствором РингераЛокка, в котором концентрация хлоИзобретение относится к области экспериментальной биологии, преимущественно молекулярной, а также клеточной и функциональной кардиологии, и может быть использовано при изучении процессов ионного тран спорта через мембраны.Наиболее близким к изобретению является способ исследования Функциональной активности сердечной мышцы путем определения активности 1 О натрий-калий АТФ-аэы с использованием уабаина. Способ заключается в том, что сердечную мышцу гомогенизируют, а затем в течение нескольких часов центрифугируют и экстрагируют мембранные фракции. Активность выделенного таким образом фермента оценивают по скорости накопления продуктов гидролиза АТФ (11,Недостатком известного способа являются невозможность определения активности Иа-К АТФ-азы на целом, неповрежденном сердце, значительная ,трудоемкость, большая длительность процесса получения и измерения актив. 5 ности Фермента, непригодность его для оценки активности фермента при паталогиях сердца.Цель изобретения - повышение физиологичности способа.Указанная цель достигается тем, что согласно способу исследования функциональной активности сердечной мышцы путем определения активности натрий-калий АТФ-азы с использованием уабаина, Исследование проводят на интактном перфуэируемом сердце, при этом вначале определяют вес сердца, а в перфузат добавляют хлорид натрия в концентрации 170-200 мМ, далее ионометрически измеряют интен О сивность поглощения ионов калия в оттекающем перфуэионном растворе, затем вносят в перфузат уабаин и повторно измеряют концентрацию ионов калия, а также скорость коро нарного протока и активность фермента определяют по формуле(С - С )А рида натрия увеличена до 170-200 мМ далее ионометрически измеряют интенсивность поглощения изолированным сердцем ионов калия в оттекающем перфуэионном растворе, после чего вносят в перфуэат 10М раствора уабаина и повторно измеряют в нем концентрацию ионов калия,а также скорость коронарного протока и активность фермента но Формуле(С, - С )ПА (1) где Аактивность АТФ-аэы,мкМ/мин г;С - концентрация ионов калияс добавлением уабаина,мкМ;С - исходная концентрацияионов калия,мкМ;П - скорость коронарного про-тока, л/мин;М - масса сердца, г.П р и м е р. Перфуэируют изолированное сердце через аорту под давлением 8-8,3 кПа раствором Рингера-Локка, в котором концентрацияхлорида натрия увеличена до 170200 мМ. Б оттекающем от сердца перфузате с помощью К+- селективногоэлектрода измеряют концентрацию ионов калия. Затем серцце,продолжают перфузировать раствором того жесостава, но имеющим ингибитор 11 а,К АТФ-азы уабаин в концентрации10 М. Снова измеряют концентрациюионоз калия в оттекающем от сердцаперфузате. Расчет активности Фермента производят по формуле (1),При использовании сердца крысымасой 0,9 г и скорости перфузии егораствором Рингера-Локка 0,012 л/минконцентрация ионов калия в оттекаюШем перфузате составляет 2810 мкМв условиях, когда уровень хлориданатрия повышен до 170 мМ. При добавлении в этот раствор уабаина вколичестве 10М концентрация ионовкалия в оттекающем перфуэатевозрастает до 3180 мкМ. Отсюда активность натрий-калий АТФ-аэы сердца крысы составляет 4,9.7 мкМ/мин г.Использование способа определения-активности натрий-калий АТф-азы,дает возможность синхронно измерятьактивность Фермента, физиологическоесостояние сердца и его метаболизм,позволяет непрерывно в течение длительного периода времени изучатьактивность Фермента, а также производить повторные измерений натрийкалий АТФ-аэы на одном и том жеобъекте, создает воэможность дляскрининга новых лекарственных препаратов с целью выявления их способности влиять на активность натрийкалий АТФ-азы в целом сердце.