Способ определения структурно-аномальных гемоглобинов

СОК)З СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСНИХРЕСПУБЛИН 3(5 М С 01 Н ЗЗ/48 ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ"Н АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ(46) 07.07,83. Бюл, Р 25 (72) Н.Х. Мехтиев, К.М. Мовсум-заде, Э.М. Расулов и Т.А. Аскерова (71) Научный центр биологических исследований АН Азербайджанской ССР (53) 612,111.11/13 (088.8) (56) 1, 1 пягцс 1 оп ЬКВ АгпрПоКюе РАС р 0 агея Гог апа 8 уЫсаЕ ейесГгойосця 1 пд оп роГуасгуйатЫе уебя. ЬКВ-Ргос 1 иЕтег АВЯ25 Вгопппа Белес)еп, 1974. ЯО, 2 16 А(54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СТРУКТУРНО-АНОМАЛЬНЫХ ГЕМОГЛОБИНОВ путемполучения гемолизата эритроцитов споследующим его изоэлектрофокусированием в полиакриламидно-амфолиновомгеле при 10 С, фиксацией гемоглобиновых Фракций денатурирующими агентами, о т л и ч а ю щ и й с я тем,что, с целью повышения точностиспособа, гемолизат разбавляют досодержания гемоглобина 1,9"2,2 г Фи изофокусируют его при напряжении300-350 В, силе тока 25-30 мА, афиксацию гемоглобиновых Фракций проводят водным раствором денатурирующих агентов,1027616 Способ осуществляют следующим образом,Иэ 0,1 мл цельной крови эритроцитыотделяют центрифугированием, дваждыПромывают раствором МГСПС (8,5 г/л),СОствавитель И,Редактор С, Юско Техред С,мигуно Корректор АПовх ва Заказ 4730/48 Тираж 873 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб д. 4/5Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул, Проектная, 4 Изобретение относится к с иохимиии молекулярной биологии, конкретнок способам выявления структурна-аномальных гемоглобинов и может бытьиспользовано в медицине, в частностигематологии. 5Известен способ Определения структурно-аномальных гемоглобинов путемполучения гемолиэата эритроцитовс последующим его изоэлектрофокусированием в полиакриламидно-амфолиновом геле при 10 СС, фиксацией гемоглобиновых фракций денатурирующимиагентами ( 1 1,Недостатками известного способаявляется невозможность идентификациинестабильных структурно-аномальныхгемоглобинов ввиду непОлного разделения гемоглобнноных фракций.Введение в гемолизат растворацианистого калйя вызывает слияниепромежуточного Ме.-гемоглобина сосновной фракцией гемоглобина, Кроме того, цианистый калий являетсясильно ядовитым реактивом.Разделение гемолизата при 1 600 Вс силой тока 50 мА вызывает разложение нестабильного структурно-аномального гемоглобина и искажает. картину спектра гемоглобиновых фракций.Использование в фиксирующем растворе метилового спирта может оказы 30ва.ть отрицательное воздействие наэкспериментатора при популяционныхисследованиях (200 анализов в день)ввиду его токсичности.Цель изобретения - повыш ние точности способа.указанная цель достигается тем,что согласно способу определенияструктурно-аномальных гемоглобиновпутем получения гемолнзата эритроцитов с последующим его изоэлектрофокусированием в полиакриламидно-ащолиновом геле при 10 д, фиксацией гемоглобинсвьх фракций денатурирующимиагентами, при котором гемолизат разбавляют до содержания га.лсглобина1,9-2,2 г Ъ и изофокусируют его принапряжении 300-350 В, силе тока 2530 мА, а фиксацию гемоглобиновыхфракций проводят водным раствором50денатурирующих агентов,гемолиэируют добавлением 1:5 объемачетыреххлористого углерода. Гемолизаты готовят разбавлением эритроцитноймассы дистиллированной водой до са,цержания гемоглобина 1,9-2,2 Ъ.Разбавленный гемолизат 25 мкл наносят на полиакриламидно-амфолиновыйгель с рН 3, 5-9,5,Разделение гемоглобиновых фракцийпроводят при 320 В, используя силутока 28 мА, анодным раствором 0,1 Мортофосфорной кислоты и катоднымо0,1 М едкого натра при 10 С,Гелевую пластину после разделенияфиксируют раствором 57,7 г трихлоруксусной кислоты и 17,25 г сульфосалициловой кислоты в 500 мл дистилли ованной воды в течение 15 мин,затем гель высушивают и покрываютл:1 ст,ассовой пластинкой для хранениП р и м е р 1. Обследуемый АлиевАхмед (48 лет) был обследован на носительство структурно-аномальногогемоглобина. У обследуемого было взято 0,1 мл крови из пальца, приготовлен гемолизат (2,0 гЪ) и проведеноизоэлектрофокусирование при 300 у,28 ва.Выявлен нестабильный. структурноаномальный гемоглобин.П р и м е р 2. Обследуемая АлиеваФарах (18 лет) - дочь Алиева Ахмедатакже была обследована на носительство структурно-аномального гемоглобина, У обследуемой было взято 0,1 млкрови из пальца, приготовлен гемолизат (,1 гЪ) и проведено изоэлектрофокусирование при 320 у, 25 ма,На изоэлектрофореграмме выявленструктурно-аномальный гемоглобин иего мет/форма в виде двух полос,П р и м е р 3, ОбследуемыйАлиев Керим (8 лет) - сын Алиева Ахмеда - обследован на носительствоструктурно-аномального гемоглобина .предлагаемым способом,При Осуществлении предлагаемогоспособа на изоэлектрофорограммевыявлен структурно-аномальный гемоглобин.Таким образом, предлагаемый способпозволит улучшить качество разделения гемоглобиновьх фракций и выявитьнестабильные формы структурно-аномальных гелоглобинов, что дает воз"мо,кность получить достоверную информацию о молекулярных нарушениях белковой части гемоглобина.Емельяненко