ZIP архив

Текст

(22) Заявлено 16,0 1) 2323121/ аявкирисоединением 23) Приоритет 3) Опубликовано 30,01.78. Бюллетень4 Государстееннын комитет Совета Министров СССР по делам изобретенийи открытий 3) УДК 615.45:612.1(45) Дата опубликован Авторыизобретения Е. П. Вязова, Н. А., А, ХачатурьянМ, Морозова,А. Ажигирова,доров, В. Б. Коена Ленина науматологии и пер Г. Я. Розенберг, А Ю, Г, Иванов, Г. С. Бойко,аявител но-исследовательскеливания крови инстит 4) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ РАСТВОРА НАТИВНОГО ГЕМОГЛОБИНА еще 35 мин, Для разделения компонентов смеси (органический растворитель, стромы, раствор гемоглобина) ее центрифугируют 20 мин при 2000 об/мин и +4 С.По окончании центрифугирования раствор гемоглобина, находящийся в верхней части центрифужного стакана, сливают, фильтруют через фильтр Миллипор (63) и диализуют против раствора Кребса.Ниже приводятся характеристики гемоглобина, полученного предлагаемым способом.При исследовании прокоагулянтной активности гемоглобина с помощью теста потребления протромбина по Квику, разница между контрольной (донорская кровь+ физиологический раствор) и опытной (донорская кровь+ +раствор Нв) пробами отсутствует, что свидетельствует о полном удалении стромальных веществ, обладающих тром бопластической активностью.Исследование кислородно-диссоциационных кривых гемоглобина (при 20 С в 0,1 М фосфатном буфере рН 7,2) дает значения: 1 оРзюО = 0,78+ 0,02 и и = 2,8+ 0,2, соответствующие характеристикам нативного гемоглобина.Содержаниеобразцах ниже Изобретение относится к области выделения белков из объектов биологического происхождения и может быть использовано для получения гемоглобина, не содержащего прокоагулянтов.Известен способ получения раствора натив- ного гемоглобина, заключающийся в том, что к эритроцитарной массе при 10 - 12 С добавляют от 4 до 12 г р-пропиолактона 1 л осадка эритроцитов, смесь выдерживают 25 мин, за тем центрифугируют и раствор очищают.Выход целевого продукта составляет 6 - 7%.Однако известный способ не обеспечивает высокой концентрации и чистоты целевого продукта. 1Целью изобретения является повышение концентрации и чистоты целевого продукта.Это достигается тем, что обработку проводят тетрахлорэтиленом при нагревании смеси от +4, +6 С до +35, +38 С в течение 2 10 - 15 мин.П р и м е р. К эритроцитной массе, отмытой 4 раза 0,9%-ным раствором хлористого натрия, добавляют при температуре +5 С охлажденный до той же температуры тетрахлорэти лен в соотношении 1:1. Смесь перемешивают при +5 С в течение 10 мин, затем температуру повышают до 37 С и продолжают гемолиз мет-гемоглобина в полученных5%,589984 Концентрация гемоглобина о 4 Осмотнческое давление мм вод. ст.5 10 15 21 216 448 776 1256 Формула изобретения 30 Составитель С. МалютинаТехред Н. Рыбкина Корректор Т, Добровольская Редактор Г. Лановая Заказ 3275/10 Изд.202 Тираж 693 Подписное НПО Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раугпская наб д. 4/5Типография, пр, Сапунова, 2 Молекулярный вес гемоглобина, определенный методом светорассеяния, равен 65000+ + 4500.Определение осмотического давления гемоглобина в различных концентрациях на мембранном осмометре при 37 С в физиологическом растворе КаС 1 дает следующие значения: Молекулярный вес, подсчитанный на основании данных по осмотическому давлению в диапазоне концентраций от 0,5% до 1,5%, равен 64000 (+ 10/о)Относительная вязкость полученного раствора гемоглобина при его концентрации, равной 10%, при 20 С составляет 1,4.Полученный предлагаемым методом гемоглобин нетоксичен при внутривенном введении мышам в дозе до 9 г/кг веса, переносим крысами при плеторическом переливании в количестве до 4 г/кг веса тела, выведение его с мочой происходит аналогично гемоглобину, очищенному методом центрифугирования.В опытах на изолированном сердце кролика с перфузией коронарных сосудов гемоглобином получен ответ на основной, принципиальный вопрос: показано, что раствор гемоглобина способен связывать, переносить и отдавать тканям кислород.Артерио-венозное различие по кислороду составляет в среднем 3,5 об, %.Раствор гемоглобина был испытан на кошках, у которых путем обменных переливаний 4замещали собственную кровь на раствор гемоглобина. Объем замещения составлял от 2до 3 по отношению к объему собственной кро 5ви, При этом у животного оставалось собственных эритроцитов от 0,2 до 1 млн., а показатель гематокрита был равен 1 - 5,Раствор гемоглобина поддерживал жизньживотного от 2 до 6 ч, при этом перенос газов осуществляется в основном за счет рас 10 творенного гемоглобина,По показателям артериального и венозногодавления минутного объема сердца и периферического сосудистого сопротивления, растворгемоглобина поддерживает в удовлетвори 15 тельном состоянии гемодинамику в течениевремени наблюдения (2 ч) .Использование предлагаемого способа получения нативного гемоглобина дает возможность получения высоких концентраций20 (30%) гемоглобина, исключить этап центрифугирования при больших ускорениях, чтозначительно упрощает технологию, сокращает время, затрачиваемое на процедуру очистки и позволяет получать практически неогра 25 ниченные количества гемоглобина. Способ получения раствора нативного гемоглобина, включающий обработку эритроцитов органическим растворителем с последующим отделением органической фазы, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения концентрации и чистоты целевого продукта, обработку проводят тетрахлорэтиленом при нагревании смеси от +4, +6 С до +35, +38 С в течение 10 - 15 мин.40 Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1, Патент Франции М 2202102, кл. А 61 К27/10, 1973.

Смотреть

Заявка

2323121, 16.02.1976

ЦЕНТРАЛЬНЫЙ ОРДЕНА ЛЕНИНА НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ГЕМАТОЛОГИИ И ПЕРЕЛИВАНИЯ КРОВИ

РОЗЕНБЕРГ ГРИГОРИЙ ЯКОВЛЕВИЧ, ХАЧАТУРЯН АЛЬФРЕД АРИСОВИЧ, ВЯЗОВА ЕЛЕНА ПЕТРОВНА, РОГАЧЕВА НАТАЛИЯ АЛЕКСЕЕВНА, ИВАНОВ ЮРИЙ ГРИГОРЬЕВИЧ, МОРОЗОВА ГАЛИНА МИХАЙЛОВНА, ШЛИМАК ВЛАДИМИР МАТВЕЕВИЧ, СЕРГЕЕВА РАИСА СЕРГЕЕВНА, ЗЕЙНАЛОВ АЗЕР МАМЕДОВИЧ, АЖИГИРОВА МАРИЯ АЛЕКСЕЕВНА, МЕЛЬНИКОВСКАЯ НИНЕЛЬ НИКОЛАЕВНА, БОЙКО ЕЛЕНА СИЛЬВЕСТРОВНА, ФЕДОРОВ НИКОЛАЙ АЛЕКСАНДРОВИЧ, КОЗИНЕР ВЛАДИМИР БОРИСОВИЧ, ЯРОЧКИН ВАЛЕРИЙ СЕРГЕЕВИЧ

МПК / Метки

МПК: A61K 35/18

Метки: гемоглобина, нативного, раствора

Опубликовано: 30.01.1978

Код ссылки

<a href="https://patents.su/2-589984-sposob-polucheniya-rastvora-nativnogo-gemoglobina.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентов СССР">Способ получения раствора нативного гемоглобина</a>

Похожие патенты