Способ исследования структуры гемоглобина

.1.егг. (54) ГЕМО а в еса. ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИИОПИСАНИЕ ИЗК АВТОРСКОМУ СВИДЕТ(71) Научно-исследовательский институт ядерной физики при Томском политехническом институте(57) Изобретение позволяет повысить точность исследования структуры гемоглобина за счет увеличения степени обогащения гемоглобина изотопом, для чего производят анемизацию животного 3-5-кратным кровопусканием в размере 3-7 Еот общего объема циркулирующей крови в зависимости от состояния животного по одному разу в сут, а инъекцию фруктозного раствора изотоп (хлорида Ге) производят один раз двое сут б-кратно в дозе 2,4 мл/кг510 15 2 О 25 30 35 45 5 О 55 Ф12Изобретение относится к экспериментальной медицине.Целью изобретения является повышение точности способа за счет увеличения степени обогащения гемоглобина изотопом.Способ осуществляют следующимобразом.Анемизацию животного производят3-5-кратным кровопусканием в размере 3-77 от общего объема циркулирующей крови в зависимости от состояния животного по одному разу всут, а инъекцию фруктозного раствора хлорида Ге производят один5 Траз в двое сут в количестве 6 инъекций.П р им е р , Берут две группы, белых лабораторных беспородных крыспо четыре животных ззесом 200-250 г.Коцтрольцую группу обогащают в соответствии со способом - г,рототипом, Перед началом эксперимента определяют коццецтрацзпо НЬ в кровипо Сали г%:14,4; 14,2; 13,2; 12,6.На первьпз, второй и третий деньэксперимента жгцзотцым вводят 3% - цыйраствор фенилгидразина по 0,3 мл,на четвертый и пятый дець - отдых,Содержание НЬ на шестой день составляет,г 7.: 9,8 10,0; 8,8", 8,2. Сшестого по двадцать девятый деньэксперимента животцызз гзводгг 0,05 МрастворРеС 1, цо Фруктозе по0,6 мл ежедцсвпо. 11;, тридцатый деньэксперимента жило гцых .забивают декапитацией,Опытную группу обогащаот в соответствии с предлагаемым способом.Концентрация НЬ и крови перед началомэксперимента составляет, г 7 12,8;16,0; 15,4; 14,0. С первого по пятыйдень эксперимент: кровопускание иэхвостовой вены по 0,5-2,0 мл за одинраз в зависимости от исходцого весаживотного, т.е. по 3-77. от общегообъема циркулирующей крови. Послетрех кровопусканий у первой крысыуровень НЬ снижается до 9,8 г %,после четырех кровопусканий у первойи третьей - 9,2 г 7. и 10,0 г 7. соответственно, после пяти кровопусканий г 7.: 8,8; 9,8; 9,6; 9,8. На шестойвосьмой, десятый, двенадцатый,четырнадцатый и шестнадцатый дниэксперимента проводят внутримышечныеинъекции Фруктозцого раствора5 ГеС 1 по 0,6 мл на каждое животное (2,4 мл/кг веса). На тридцатый 37975 2 от начала эксперимента (25 день от начала инъекции) животных забивают декапитацией.Из крови животных опытной и контрольной групп готовят образцы сухого гемоглобина следующим образом.Кровь с антикоагулянтом центрифугируют 10 мин по 3 тыс. об/мин.Суперйатант удаляют с помощью водоструйного насоса, осадок эритро" цитов промывают 0,97-ным раство ром ИаС 1, центрифугируют при 3 тыс. об/мин. Супернатант удаляют.Операцию повторяют трижды. Отмытыеэритроциты гемолизируют 3 объемамидистиллированной воды. Выдерживаютна холоде 6-8 ч. Гемолизат центрифугируют 1 ч при 18 тыс об/мин и4 С для отделения стромы, Супернатант(р-р гемоглобина) сливают и высушивают, Полученный сухой гемоглобинразвешцвазот по кюветам, снимаютМессбауэровский спектр. Обогащениеобразцозз ПЬ, получегпзьзх от животных контрольной группы, определен, "цое по величине эффекта Мессбауэра,составляет, %: 29,1, 28,1, 29,4,29,9, т.е. 29,1 + 0,9Обогащение образцов НЬ от животныхопытной группы,%: 28,9, 292, 29,4,29,0, т.е 29,1 + 0,4.Результаты испытаний,5 ЗРасход Ге в опьггць:х грппах41,04 мг ца группу; в контрольныхгруппах 164,16 мг ца группу. Обогащение образцов НЬ, определенное по величине эффекта Мессбауэра; в опытных группах 29,1+ + 0,4%; н контрольных группах 29,1+ + 0,9%. Таким образом, обогащение живот 51цых изотопом Ге в соответствии с предлагаемым способом повышает эффективность использованияизотопа по сравнеззздо с прототипом в 4 раза.Способ позволяет получать НЬ, содержащий по сравнению с природным белком в 13-18 раз больше мессбауэ 5 Зровского изотопаРе, це подвергая при этом нарушению нативную структуру белка. Повьшзецие содержа - ния Ге приводит к сокращению57времени снятия спектра с 80 часов до 15-20 мин и делает возможным изучение конформационцых перестроек в белковой молекуле методом з -резонансной спектроскопии.Составитель М.Позняк Техред М.Ходанич Корректор Е.Сирохман Редактор Н,Горват Заказ 3282/44 Тираж 778 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д.4/5,Формула изобретения Способ исследования структуры гемоглобина путем выделения гемоглобина из крови анемизированных живот 5 ных, обогащенной изотопом Ре при помощи инъекций фруктозного раство 1ра . РеС 1 с последующим воздействием на гемоглобин миллиметровых волн, о т л и ч а ю щ и й с я тем,75 4что, а целью повьппения точности способа за счет увеличения степени обогащения гемоглобина изотопом, анемизацию животных проводят 3-5-кратным кровопусканием в размере 3-7от общего объема циркулирующей крови,а инъекции фруктозного раствора изо"тона,проводят в дозе 2,4 мл/кгмассы 6-кратно с периодом в двоесут.