Способ получения экстракорпорального шунта

) С 12 И 11/00,М 1/00 ПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ ЕЛЬСТВ АВТОРСКОМУ С р 3 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ(71) Всесоюзный научно-исследовательский институт особо чистых биопрепаратов(56) 1. Нуйеп Н, "Ап ехгга-согрогеа 1 зпцпС аррагагцз Еог Ь 1 оод йеСох 1 Е 1 саС 1 оп".=Агапе 1 в-РогсЬ, 1971,ч. 21, Р 11, р. 179.2. НогчаТЬ С. ей а 1 фЬ-азрагая 1 паве 1 цЬез Ипе 11 с зсЬач 1 ог апйарр 11 сай 1 оп 1 п рЬуз 1 о 1 од 1 са 1 зйцсНез", "Л оЕ Арр 1. РЬуз 1 о 1", 1973,ч. 34, 9 2, р. 181,3. Вегпагп Р.К. ей а 1. "ТЬегареп 11 с Регзресй 1 чез оЕ ЕпгувезКеас 1 огз", "В 1 овео 1 са 1 Арр 11 саг 1 опзоЕ 1 ввоЬП 1 зе епгувез апй ргойе 1 п.Р 1 епцв Ргезз", 1977, ч. 1, Р 4,ЯО 1014883 А(54)(57) СПОСОБ ПОЛУЧБНИЯ ЭКСТРАКОРПОРйНОО ШуНтА, включаюший приготовление ферментколлагеновой суспензии, получение активного материала,дубленке глутаровым альдегидом иформирование шунта, о т л и ч а -ю ш и й с я тем, что, с цельюповышения эффективности работы шунта, активный материал получают прокачиванием ферментколлагеновой суспензии через лавсановый протез кровеносного сосуда, а шунт формируютизоляцией внешней поверхности протеза силиконом и последуюцей егоспиралиэацией.Изобретение относится к биологии и медицине, а именно к методам полу-. чения устройств для экстракорпорального воздействия на организм, может быть также использовано в области биохимии и ветеринарии. 5Известно несколько разработок экстракорпоральных шунтов ЭШ ) с иммобилизованной 1,-аспарагиназой 1 АГ). ЭШ изготовляют путем присоединения АГ к силаниэированным стеклянным пластинкам 1, к частично гидролизованным нейлоновым трубкам 21.. Общим недостатком перечисленныХ способов изготовления ЭШ является низкая стабильность иммобилизованной АГ.Наиболее близким к предлагаемому является способ получения ЭШ, при котором фермент-коллагеновую суспензию отливают в форме пластины, высушивают, дробят и сворачивают в рулон, который затем помещают в кожух из поликарбонатной пластмассы. Кровь пропускают через полученное устройство параллельно поверхности ферментколлагеновой пленки. Удельная активность фермент-коллагенового комплекса составляет 25-250 МЕ/г. Шунт обладает стабильной ферментативной активностью 275 МЕ. При испытаниях на собаках уровень аспарагина (Азп) в крови снижался до следовых коли- честв за 15-20 мин и оставался низким в течение 7 ч последующей перфузии со скоростью 35-80 мл/мин 3 1.Однако способ обладает недоста- З 5 точно ьысокой активностью шунта, наличием диффузионного торможения фер ментативной реакции, а также наличием контакта крови с неколлагеновыми поверхностями поликарбонат ной пластмассой ).Цель изобретения - повышение эффективности работы шунта.Для достижения поставленной цели в способе получения экстракорпорального шунта, включающем приготовление фермент-ксйтлагеновой суспензии, дубление глутаровым альдегидом и формирование шунта, активный материал получают прокачиванием фермент-коллагеновой суспенэии через лавсано 50 вый протез кровеносного сосуда, а шунт формируют изоляцией внешней поверхности протеза силиконом и последующей его спиралиэацией.П р и м е р. Приготовление фермент-коллагенового комплекса.. К 20 г грубо измельченного колла- гена 82 влажности добавляют воду до объема 400 мл, доводят рН до 3,0 40 молочной кислотой и гомогениэируют 60 на блендере до образования однородной массы. Полученную суспензию деаэрируют с помощью водоструйного наВНИИПИ Заказ 3132/21Филиал ППП "Патент , г.у соса, повышают рН до 4,1 добавлением1 МНаОН и вносят препарат АГ до концентрации 12 мг белка/мл. Полученной смесью пропитывают лавсановыйпротез кровеносного сосуда внутренний диаметр 0,6 см, длина 150 см)путем прокачивания с помощью перистальтического насоса и высушиваютна воздухе. Затем протез погружаютв 200 мл 1 раствора ГА (рН 7,0)на 30 с для дубления, Непрореагировавший ГА отмывают ледянойводой и снова высушивают. Затемпротез помещают в силиконовую трубку для внешней изоляции и свиваютв спираль диаметром 4,6 см. Оставшуюся после пропитки суспензиюиспользуют для определения активности АГ в комплексе. Суспензию высушивают в виде пленок, дубят и отмыва-.ют описанным вьпае способом. Активность, измеренная по количеству отщепившегося аммиака, составляет3000 МЕ/г, а для пропитанного суспензией протеза 60 МЕ/г протеза. Активность модели ЭШ составляет 390 МЕ.Полученный данным способом ЭШимеет следующие характеристики:1. При скорости прокачивания рас"твора Азп(33 юМ) в фосфатном 0,1 Мбуфере (рН 7,8 ) 45 мл/мин и комнатной температуре активность спиральной модели на 55 выше, чем у прямоточного варианта.2. 1 л раствора Азп в 0,1 М фосФорном буфере (рН 7,8) с концентрацией 100 мкмоль/л при 1 = 37 С прокачивается через ЭШ со скоростью48 мл/мин в рециклическом режи-ме, Время расщепления 95 субстратасоставляет при таких условиях50 мин, При увеличении скоростипрокачивания до 93 мл/мин времярасщепления Азп сокращается до 30 мин.3. 120 мл человеческой крови прокачивают через ЭШ со скоростью38 мл/мин при комнатной температурев рециклическом режиме в течении18 мин. Перед прокачиванием кровивнутреннюю поверхность ЭШ промывают 0,5 л 0,15 М раствора Рингерас содержанием гепарина 20 ед/мл, Зауказанный период гидролизуется 87Азп, находящегося в плазме крови,Гемолиз, тромбообразование, а также видимые микроскопические повреждения клеток крови не выявлены. Ферментативная активность модели ЭШ врезультате контакта с кровью неснижается.Таким образом способ полученияэкстракорпорального шунта позволяетполучить ЭШ, обладающий активностью390 МЕ. Проведенные на человеческой крови эксперименты демонстрируютвозможность применения ЭШ.Тираж 523 Подписноежгород,ул.Проектйая,4