Способ получения иммобилизованного осахаривающего ферментного препарата

(6) М. Кл.С 12 й 1 ЦОО С 12 й 9/24 С 13 К 1/Об РЮаРатафхаый ианитвт ВСТР в лэаи изебрвтвяий и втхрьпий.07 (088.8) Дата опубликования описания 15,04,82 Дания)Изобретение относится к способам получе-. ния нерастворимых ферментных препаратов, . в частности: препаратов, полученных на основе осахаривающих ферментов - амилоглюкозадвы и а-амилазы, которые находят применение в . 5 пищевой и смежныхс ней отраслях.Процесс превращения в нерастворимое сое. тояние (или иммобилизация) внеклеточных и внутриклеточных растворимых в воде, ферментов, т. е, фиксация каталнчески активных (на 1 а тинных) ферментов в твердых или квазитаер дых, формованных или обладающих способ постыл формоваться структурах, становится все более важным в технологическом, а также в экономическом отношении, поскольку он. 1 а может рассматриваться как средство, позволяющее повторно использовать измельченный фермент в процессах периодического действияили применять его в непрерывном лроцессе в так называемых знзимных реакторах, 20В течение последних лет значительные уж лия были направлены на развитие технологии иммобилизации в промышленности по произ. водству крахмала, что связано с производством таких продуктов, как высококонцент.рированные сиропы декстрозы и фруктозы.Недавно в пищевой и родственных ей отрасляхпромышленности возросла относительная злачимость второго иэ укаэанных двух продуктов,причем высоко концентрированные сиропыфруктозы преимущественно вытесняют сиропсахарозы,и менее сладкий высококонцентрированный сироп декстрозы, Два дополнительных типа сахарного сиропа, полученных гидро. лизом крахмал и содержащих значительноеколичество мальтозы (т.е. сиропы с высоким содержанием мальтозы и высокой степеньюконверсии) используются во все возрастающей степени особенно в кондитерской (твердые: леденцы) и консервной промышленности.Полный промыпшенный процесс превращения крахмала через стадию образования сиропа с высоким содержанием декстрозы в сироп с высоким содержанием фруктозы включаеттрн последовательные стадии, а именно про. цесс разбавления или разжижения крахмала в. декстрины, катализируемый кислотой (или бактериальной. а-амилазой,: йоследующего 54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИММОБИЛИЗОВАННОГООСАХАРИВАВЩЕГО ФЕРМЕНТНОГО ПРЕПАРАТА,8 иСоставитель О, Скородумова Техред Л.Пекарь Корректор Г, Рещетник Редактор М. Петрова Подписноекомитета СССРоктрытийкая наб., д, 4/5 Заказ 2402/ ал ППП "Патент", г. Ужгород, ул, Проектная,1Формула изобретения1. Способ получения иммобилизованного осахаривающего ферментного препарата путем связывания осахаривающего фермента с нераст 5 воримым носителем с помощью глугарового альдегида, о т л и ч а ю щ н й с я тем, что, с целью улучшения качества целевого про. дукта, в качестве носителя используют грану. лированный казеин, а связывание осуществляют при перемешивании в водной среде при дополнительном присутствии яичного альбуми. на при следующих соотношениях компонентов: фермент: носитель (0,02 - 0,2):1; фермент: аль .6 умин (0,2-1,5):1; глутаровый альдегид: фермент с альбумином (0,2 - 0,4):1 и содержа,нии воды в реакционной смеси 30-60 вес.% с последующими механическим дроблением полученного продукта и сушкой. 8 Тираж 505 ВНИИПИ Государственного по делам изобретений и 113035, Москва, Ж, Рауш2, Способ по п, 1, о т л и ч а ю щ ис я тем, что в качестве осахаривающегофермента используют амилоглюкозидазу илиа -амилазу,3. Способ по п. 1, о т л и ч а ю щ и й .с я тем, что.размер частиц носителя составляет 100 - 500 мкм.4. Способ по и. 1, о т л и ч а ю щ и й .с я тем, что глутаровый альдегид используютв виде 50%.ного водного раствора.Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1. О. О, 1.ее,4.,1. ее, 6. Т. Тзао. Сопбпцопа Ргодцсбоп о 1 61 цсозе Фгогп ОектгаЬу 61 осоату 1 азе твоЫ 1 ген оп Рогооз 81 са,921470осахаривания их до сиропа с высоким содержа.кием декстрозы и превращения последнего всироп с высоким содержанием фруктозы, причем каждый процесс катализируют специфи-ческим для него ферментом, а именно амило.глюкозидазой и глюкозоизомераэой соответственно. В то время, как в результате ряда .недавно проведенных технологических разработок стало возможным и первую, и третьюстадии указанной последовательности осущест. 10влять непрерывно, промышленное осахаривание(т, е. вторая стадия) преимущественно ещеостается процессом периодического действия,Сироп с высоким содержанйем мальтоэытакже можно получить из крахмала.Осахаривание разжиженного крахмала, врезультате которого получают сироп с высокимсодержанием мальтозы (и обычно содержащийотносительно небольшое количество глюкозы),осуществляют с помощью маль 1 огенной амилазы, предпочтительно грибковой а-амилазы.Подобно гликогенному осахариванию соответствующий мальтогенный процесс обычно осу.шествляют как периодический процесс с использованием растворимого фермента,15Хотя предпочтительность полностью непрерыв.ного процесса очевидна, совершенствованиеконструкций промышленного ферментативногореактора, основанных на использовании настадии осахаривания иммобилизованной амилоглюкозидазы, находится на начальной стадии,Известно несколько способов иммобилизации осахариваюших ферментов, например, ами.логлюкозидазы, связыванием фермента с нерастворимым органическим или неорганическимносителем, Однако только немногие из этихспособов вышли за пределы лабораторной практики.Известен, напримерспособ получения иммоби.лизованного осахаривающего ферментного препарата на основе амилоглюкозидазы путем ковалентного связывания ее с пористыми частицамистеклянных или керамических материалов с помощью глутарового альдегида. Частицы носитеоля со средним диаметром пор около 400 Апомещают в толонку и последовательно пропускают через нее раствор глутарового альдегида и раствор фермента. Получаемый продуктиспользуется в непрерывном процессе осахаривания, Колонку опытной заводской установкисзаполняют полученным измельченным прераратом фермента и заливают растворами выпускаемых промышленностью декстринов, Дости.гается степень превращения в декстрозу, которая приближается к 92%, что обьгчйо реализуется в процессах периодического осахаривания 55с растворимой амилоглюкозидаэой.Однако в отличие от периодического процесса, в котором используется свободный энзим,в случае процесса в колонке степень вазимо превращений, т. е. повторной полимериэации глюкозы в мальтозу, изомальтозу и более высокие олигомеры, катализируемой амилоглю. козидазой, довольно высока (10%). Повышен. ное взаимопреврашение, с которым сталкива.ются при использовании иммобилизованного энзимного препарата этого типа, по.видимому частично обусловлено применением пористых энзимных носителей, Очевидно пористая структура в очень значительной степени увеличивает общую площадь поверхности, обусловливаямаксимальное связыванне энзимов, и, следова.тельно, максимальную ферментативную актив. ность получаемого иммобилизованного ферментного препарата 11 .Однако сочетание высокой концентрации фермента, связанного с поверхностью пор носителя, и пониженной скорости диффузии в пределах пор неизбежно приводит к локально высоким концентрациям глюкозы, что создает благоприятные условия для ускорения ферментативных процессов с высокими Кмзначениями (т. е, нежелательных реакций взаимопреврашений, особенно тех, которые приво. дят к образованию изомальтоэы и изомальтри.озы),Целью. изобретения является улучшение качества получаемого иммобилизованного ферментного препарата, обуславливаюшее снижениеобразования продуктов побочной полимеризации при использовании полученного препаратав процессе осахаривания,При этом рабочие характеристики получаемого препарата должны быть существенно приближены к характеристикамь растворимогофермента независимо от того, используется лииммобилизованный препарат в процессе периодического действия или в процессе с непрерывной схемой,В случае иммобилизованного препаратаамилоглюкозидазы это требование ведет ктому, что непрерывный процесс осахариванияможет осуществляться при таких особо предпочтительных условиях (например при такомсоставе и скорости подачи декстрина), нрикоторых концентрация глюкозы на выходеравна 92%, причем суммарная концентрациядисахаридов (мальтозы и изомальтозы) итрисахаридов (в основном панозы и изомальтотриозы) не превосходила бы примерно 4 и1% соответственно.В случае иммобилизованной мальтогеннойа -амилазы необходимыми парамжтрами конверсии являются следующие: мальтоза примерно40 - 60%; мапьтотриоза 25 - 35% и глюкозаменее 10%,указанная цель лостигается тем, что согласно способу получения иммобилизованного5 921470 6осахариваюшего ферментного препарата путем, Кроме того, степень набухания в воде должнасвязывания фермента с нерастворимым носи- быть разумно низкой, предпочтительно нетелем с помощью глутарового альдегида в ка- должна превышать 200%. Примером продукта,честве носителя используют гранулированный который удовлетворяет указанным требованиям,казеин, процесс связывания осущетсвляют при 5 может служить гранулированный каэеин, осаж.перемешивании в водной среде при дополни. денный кислотой, Пищевые сорта продуктовтельном присутствии яичного альбумина при этого типа, предпочтительно имеющие размерследующих соотношениях компонентов: частиц 100 - 500 мкм, могут. быть, полученыфермент:носитель (0,02-0,2):1; фермент:альбу- из различных источников, например они вы.мии (0,2-1,5);1; глутаровьп альдегид:фер 1 О пускаются французской Компанией Сцерма С, А,мент с апьбумином (02;0,4):1 и содержании Сканированием в электронном микроскопеуста.воды в реакционной смеси 30 - 60 вес,% с новленочто поверхность Таких частиц имеетпоследующими механическим, дроблением полу. очень изогнутую и нерпавильную форму, нано.ченного продукта и сушкой, минающую макроскопический вид пемзы. ВероВ качестве осахаривающего фермента ис ятно такая похверностная мнкроструктура об: пользуют амилоглюкозидазу или й-амила упадает большим числом связующих участковГлутаровый альдегид обычно используютдля глутарового альдегида.в виде 50 о ного водного раствора. Для осуществления изобретения важнымПредпочтительный размер частиц к на обстоятельством является то, что альбу,инн,составляет 100 - 500 мкм. применяемый в качестве связующего белка,Получемый по изобретению продукт п практически мгновенно растворяется в воде.ставляет собои частицы носителя т е г а дпредпочтительдым сортом альбумнналированный казеин, покрытые белковым м тся обычный высушенный распылениемальбумина, проницаемым для жидкости, и впродукт.этом слое осахаривающий фермент поперечносшит с альбумнном яйца.умнно яйца. с помощью глутароп пере о определенная степень агломерации покрытыхвого альдегида.частиц, что приводит к завершению реакцииСпособ осуществляется следующим обрапоперечного сшивания прн образовании влажзом,ного, крупногранулированного и кусковогоТщательно перемешиваемую сухую смесь 30 продукта Этот продукт должен быть подверггранулированного казеина и порошка альбуми. нут в дальнейшем измельчению, например,на яйца соединяют с водной смесью, содержа- путем гранулирования с образованием измельщей осахариваюций фермент и глутаровыя ченного продукта с размером частиц в пред.альдегид, растворенные при РН 4-7, причем почтительном диапазоне. Гранулирование можетальбумин может быть произвольно растворен 35 осуществляться на колеблющемся: гранулято.с этими компонентами вместо смешения его Ре типа, который поставляется рядом Компав сухом состоянии с казенном, выдерживают ний (фирма Диаф, Копенгаген, или фирмаполученную смесь в спокойном состоянии, Маности, Ливерпуль). Гранулнрованный про.как правило, при температуре окружающей дукт пРопускают через сита, например, с раз.среды, чтобы завершить покрытие носителя 4 о мером отверстий 1-2 мм, и он может быть ос.белковым слоем и процесс сшивания попереч- вобожден от тонкого материала стандартнымиными связями белка. Смешение может осущест Пособами.,Полученньй продукт может бытьвляться или вручную, например путем тщатель- промыт и загем высушен до требуемого содер.ного перемешивания и измельчения в ступе,путем тщательного перемешивания и измель 45 Перед применением в процессе .осахариваниячения в ступе, илн механически, например в высушенный ферментный продукт обычногоризонтальной мешалке отвального типа, пос. улучшают, для чего предварительно вымачиваютт д ггтавляемон формои Люднге Машиненбау, Запад его в водном растворе. На этой стаднн,.а такженая Германия, нли в аналогичного типа выпус на начальной стадии последующего использова.каемых промышленностью мешалках, 5 О ния может происходить определенное уменьше.Содержание воды в смеси должно составлять ние активности фермента, Найдено, что включе 30 - 60 вес.%, ние дополнительной стадии поперечной сшивки ., Важное значение имеют свойства гранулиро произвольно в сочетании с процессом намачиваванного казеинового продукта, используемого иия может привести к значительному снижениюв качестве материала носителя, Так, гранулы . указанной потери активности фермента. Отсюда,казеина должны обладать значительной физичес. в соответствии с предпочтительным вариантомкой прочностью, чтобы обладать способностью воплощения изобретения, осуществляют предвапротивостоять значительным деформациям, воз. Рительную обработку ферментативного препара.никающим при намачнванин насадки колонки, та водным раствором, содержащим приемлемоесутствин 4,3 ммолей Са -ионов, определяют1 Фудельную активность растворимой а.амилазы, а также удельную активность иммобнлизован. ного фермента, выражаемые как количество фермента или ферментативного продукта, которое гидролиэует водный раствор, содержащий растворимый крахмал (марки Мерк Амилум солюбиле, ДАВ, Егд. 8, Ч 1), (6,95 г на 1000 мл) с начальной скоростью 5,26 мг крахмала в час, Для контроля за реакцией следят за образованием голубой окраски с йодом, При разрушении эмульсии крахмала эта окраска становится слабее и постепенно превращается в красновато-коричневую, Изменение цвета контролируют визуально сравнением с окрашенными стеклянными стандартами. Активность иммобилиэованного фермента прове. ряют при условиях, аналогичных тем, которые указаны дня амилоглюкоэидазы.В качестве растворимых осахаривающих ферментов используются выпускаемые промышленностью амилоглюкозидаза Ново 150 и фунгамил 1600 (Фунгамил- - патентованное, торговое название продукта), Первый, который продается в виде водного раствора, обычно превращают в высушенный в струе порошок перед его использованием. Процессу сушки может предшествовать ультрафильтрование, обычно объединяемое с процедурой промывки дляудаления низкомолекулярных примесей,При применении процессов концентрирования данной области, легко может быть получентвердый амилоглюкоэидазный продукт с активностью 5000 ед. на грамм или более высокойактивностью. Фунгамил 1600, поступающий в продажу ввиде порошка, имеет активность 1600 ед. награмм.Может быть использован как непосредственно коммерческий препарат, так и препарат,подвергнутый дополнительному концентрированию и очистке,Полное извлечение активности в иммоби.лизованном осахаривающем ферментативномпродукте зависит от конкретных параметровпроцесса иммобилизации, но составляет обычноне менее 40%.Субстратом в процессе осахаривания осуществляемом с помощью иммобилизованногоферментативного препарата в соответствиис изобретением, может служить любой олигосахарид, претерпевающий осахаривание в присутствии соответствующего растворимого фермента. Примерами предпочтительных субстратовмогут служить декстрины, получаемые кислотными/или ферментативным разжижением крахмалаи характеризуемые ЛЕ-величинами, равными5 - 40; высококонцентрированные сиропы маль 7, 92 И 70 8количество глутарового альдегида, предпочтительно от 0,5 до 5%, с последующим, как правило,удалением избытка реагента путем промывкии извлечением высушенного препарата,Дополнительно установлено, что при предварительной обработке ферментативного продуктасолью сернистой кислоты может достигатьсязначительное увеличение степени превращения(выраженной в процентах декстрозного эквивалента или величиной ДЕ) осахаренного продук-Ота. Сульфитное действие весьма вероятно свя.зано с "раскрытием" определенных сетчатыхструктур, включающих белковый ферментативно-актнвный слой, но, по-видимому, безсвязывания энзима, что тем самым облегчает 15Фдоступ более высокомолекулярных олитосахаридов к активным участкам фермента.Таким образом, предпочтительна обработкаферментативного продукта разбавленным вод.ным раствором сульфита, содержащим 0,1 -2% сульфита натрия при рН 4 - 5. Сульфитнуюобработку предпочтительно проводят при комнатной температуре и обычно прерывают через120 мин промывкой водой с последующимизвлечением высушенного продукта. Установлено, что после обработки сульфитом не про.исходит потери активности 1 фермента.Ферментные препараты, приготовленные всоответствии с описанной процедурой, могутиспользоваться в процессе осахаривания либопериодического действия, включающем отделение и повторное использование ферментативно- " и очистки, хорошо известных специалистам, вго препарата, либо непрерывного действия вферментативном реакторе,Амилоглюкозидазу получают культивирова 35нием штаммов, принадлежащих к виду Аврегд 11 цв или йеорцв, т. е, Аврегд 111 цв п 1 дег илиВаорцв де 1 епаг, Мальтогенную а -амилазу пред.почтительно получают из штаммов Аврегр 11 цвогулеа.Определение активности амилоглюкозидазы.При стандартных условиях, т, е, при рН 4,5и температуре 55,0 С, определяют удельнуюактивность растворимой амилоглюкозидазы, атакже удельную активность иммобилизованно 45го фермента, которая определяется как коли.честно фермента илн ферментативного продукткоторое гидролизует водный раствор, содержа.щий 30% (вес.об) мальтозы, с начальной скоростью 1 мкмоль мальтозы в минуту, Активность иммобилизованного фермента определяют 50в процессе периодического действия на образце,который поддерживают в суспенэированномсостоянии с помощью встряхивающего устрой.ства.Определение активности грибковой а -амилаэы.При стандартных условиях, а именно прирН 5,6 - 5,7, температуре 37,0-0,05 С и в при9 9214 тоэы (с ДБ-величннами от 35 до 60) и остаточные олигосахарнды, остающиеся в маточнойжидкости после кристаллизации декстроэгя илив рафинатах, получаемых при фракциоиированиифруктозы и глюкозы. Предпочтительны растворы 5декстрина с содержанием сухого вещества впределах от 20 до 55% (вес.об.).-Н"р и м е р 1. Относительно ниэкосортныйгранулированный казеин, осажденный солянойкислотой (9 г пищевого каэеина, выпускаемо ого фирмой Сцерма С. А Франция, и содержащего частицы размером 100 - 500 мкм, причемфракция от 300 до 500 мкм составляет при.мерно 60%) смешивают с промышленнымяичным альбумином, подвергнутым струевой 15, сушке (1,2 г). К этой смеси добавляют предварительно смешанный раствор порошка амилоглюкозидазы (6,5 мл 18,5%-ного водногораствора), содержащего в сумме 12500 ед.амилоглюкозидаэы и глутаровый альдегид 20(1,2 мл 50%-ного водного раствора). Порошокамилоглюкозидазы представляет собой ультрафильтрованный высушенный в струе продукт,приготовленный из амнлоглюкозидазы Ново(Ново индастри АЯ, Дания), Смесь тщательно 25измельчают в ступе и затем выдерживают прикомнатной температуре в течение 1 ч. Получаемые агрегаты измельчают в ступе с получениемгранулированного продукта, которому даютвозможность высохнуть при комнатной темпе. 30ратуре в течение одного дня.Активность высушенного гранулированногопродукта (11,4 г) составляет 425 ед. награмм, что ооставляет 38,8%,П р и м е р 2, Гранулированный кисло. З 5той осажденный казеин (1500 г типа М 60Сцерма С. А., содержащего частицы размером100 - 500 мкм, причем фракция от 150 до350 мкм составляет примерно 70%) смешива.ют в сухом состоянии с продажным высушен Оным в струе альбумином (120 г) в 20-лнтро.вой горизонтальной мешалке.Ультрафильтрованный концентрат амилоглюкозидазы, приготовленный из Амилоглюкозидазы Ново (650 г раствора, содержащего при 45мерно 25% сухого вещества и примерно3200 ед, растворимой амилоглюкозидазы в 1 гконцентрата), тщательно смешивают с глутаровым альдегидом (180 мл 50 о-ного водногораствора) при рН 4,9 и при температуре 18 С.Полученный раствор вливают в смеситель.Тщательное перемешивание осуществляют втечение еще полминуты илн одной минуты,а затем влажный осащВнный продукт удаляютиз смесителяВлажный продукт оставляют, в55покое примерно 45 мин.для завершения процесса образования поперечных связей, в .результате чего образуются куски агрегированныхчастиц, Гранулирование продукта осуществляют . 70 10на колеблющемся грануляторе (например типа,поставляемого фирмой Диаф А/8, Копенгаген),снабженном ситами с отверстиями 1,5 мм.Гранулированный продукт промываютобессоленной водой (10 л) в течение 10 мин,извлекают фильтрованием и затем подвергаютсушке в кипящем слое. Высушенный продукт(1600 г, 450 ед, амилоглюкозидазы на грамм)освобождают от тонких частиц просеиванием,П р и м е р 3, В 400 мл водопроводнойводы готовят раствор 105 г высушенного вструе порошка амилоглюкозидазы, полученнойпо примеру 1, и 105 г высушенного распыле.нием альбумина и оставляют его на ночь в хо.лодильнике при 6-7 С, рН раствора 5,4, Затем добавляют глутаровый альдегид (100 мл50%-ного водного раствора) и полученный раст.вор добавляют в течение 3 мин к тщательноперемешиваемой навеске гранулированногосоляной кислотои осажденного казеина (725 гтого же сорта, что и применяемый в примере1), Смешение осуществляют в промышленноймешалке типа, используемого в примере 2.Тщательное перемешивание смеси йродолжаютв течение нескольких минут, после чего ееоставляют в покое примерно 1 ч для завершения реакции образования поперечных связей.Полученные агрегаты и кусковой продуктгранулируют на колеблющемся грануляторечерез сито диаметром 2 мм,Гранулированный продукт промывают водщам раствором ацетата натрия(2 рН 4,2) и затемсушат в вакууме при 35 С.Активность высушенного гранулированногопродукта (925 г) равна 800 ед. на грамм, чтосоответствует 67,8% первоначальной активности,П р и м е р 4. Иммобилизованный амилоглюкоэидазный продукт, приготовленный попримеру 3 (20 г), вымачивают при комнатнойтемпературе в течение 1 ч в водном раствореглутарового альдегида (500 мл 1 о ного раствора, регулируемого до рН 7,0), после чего осу.ществляют извлечение высушенного продукта(20 г).Активность полученного продукта 625 ед.на грамм, т, е. навторой стадии иммобилизации относительная активность составляет 7%,а полное извлечение из растворимой амилоглюкозидазы - 53%,П р и м е р 5, Водный раствор мальтогеннгенной альфа.амилазы (2 мл 5%-ного раствораФунгамила 1600 (Ново Индастри А/8, Дания)в деиоииэированной воде при рН 6,2) смешивают с водным раствором глутарового альдегида (0,3 мл 50% ного раствора) и затембыстро добавляют к сухой смеси гранулированного кислотой осажденного казеина (4/О гтипа М 60) и промышленного яичного альбумина, высушенного распылением (0,5 г) .11 92147После тщательного измельчения в ступе полученньа продукт выдерживают 1 ч при ком.натной температуре. Куски измельчают в ступе,после чего продукт сушат при комнатной температуре в течение одного дня, 5П р и м е р 6. Колонку диаметром 15 мм,снабженную рубашкой и поддерживаемую при55 С, загружают 5,7 г иммобилизованногоамилоглюкозидазного продукта, приготовленного по примеру 1, 10В колонку подают с постоянной скоростью15 мл в час сверху вниз сырье, содержащее30% (вес. об.) промышленного кислотой (ферментом гидролизованного декстрина (СРССноу Флэйк Малтодекстрин 01915 Д,Е.20), 13имеющего следующий примерный состав, %:Глюкоза 4 - 5Дисахарнды 8 - 9Трисахариды 6 - 7Тетра-и олнгосахариды 79 - 82 2 Ок которому добавляют 0,2% (вес,%) сульфатанатрия и затем регулируют рН до 4,5.Вытекающий поток анализируют методомжидкостной хроматографии при высоком дав.ленни (МЖХВД), Полученные данные представ- Илены в табл. 1.П р и и е р 7, Вколонку диаметром25 мм, снабженную рубашкой и поддерживаемую при температуре 55 С, загружают иммобилиэованный амилоглюкозидазный продукт зр(20 г), приготовленный по примеру 2,В колонку снизу вверх подают сырье. тойже концентрации, того же состава и рН, кото.рое используется в примере 6. Скорость пода.чи постоянна и равняется 50 мл. в час, Гексо.кииазным методом определяют содержаниеглюкозы, Полученные данные указаны в табл.2,П р и м е р 8. В колонку с внутреннимдиаметром 25 мм, снабженную рубашкой и нод.держиваемую при температуре 55 С, загружают 4 В, иммобилизованный амилоглюкозидазный продукт (25 г), приготовленный по примеру 2,В колонку подают снизу вверх сырье составаиспользуемого в примере 6. Сырье (рН 4,5)содержит сухого твердого вещества 30% (вес. 4вес.) и с добавками 2 г на литр сорбата калияв качестве противостарителя. Скорость потокарегулируют таким образом, ятобы поддерживатьпримерно постоянную степень превращения,Вытекающий поток анализируют МЖХВИ;Определяют величину конверсии глюкозы взависимости от времени. Данные представленыв табл. 3.После, завершения эксперимента не отмеча.ется никаких изменений твердости и другихфизических свойств материала насадки колонП р и м е р. 9. Следуя процедуре примера 7, но заменив иммобилизованный амило 0 12глюкозилный продукт примерз 2 тем, который приготовлен ио примеру 4, получают результа- ты, представленные в табл, 4.П р н м е р 1 О, Иммобилиэованную мальтогениую альфа-амилаэу, приготовленную по методике примера 5 (4 г), загружают в колонку с рубашйой, поддерживаемую при температуре 45 С и полают сверху вниз сырье - промышленный. декстрин (СПС Сноу Флэйк Мальтолекстрин 0191.3), содержащий 30% (вес,об) твердого сухого вещества и 0,2% сульфита на 1 рия в качестве лротивостарителя, рН сырья регулируют до 4,5 и скорость потока устанавливают равной 15 мл в часВ табл, 5 указан состав вытекающего иэ колонки потока, причем дисахариды представлены главным образом мальтоэой,П р и м е р 11, А), В колонку с внутренним диаметром 15 мм, снабженную рубаш,кой и поддерживаемую при температуре 55 С,загружают 12 г иммобилнэованной амилоглюкозидазы, приготовленной по методике примера 2.В колонку подают сверху вниз декстриновое сырье (31% (весвес), в расчете на содер-жание сухого вещества), приготовленное рас.жижением крахмала с Термамилом 1. 60 (торговое название, фирмы Ново Индастри А/8,Дания), и имеющего следующий состава,%:Глюкоза 1Дисахариды 7 - 8Трисаха ряды 10-12Тетра.и олигосахариды 79 - 82Д. Е. 21В сырье в качестве противостарителя добавляют 0,2% (вес./об,) сульфита натрия, и сырьеимеет рН 4,5. Поток, регулируют таким образом, чтобы поддерживать постоянную степеньконверсии(исходя из процентного содержанияглюкозы). Вытекающий поток анализируютМЖХВД. В табл, 6 представлены полученныерезультаты,в). Декстриновый субстрат, приготовленныйцо методу, описанному в разделе (А) и име.ющий следующий состав,%:Глюкоза 1,1Дисахариды 6,8Три сахариды 11,0Тетра-и олигосахаридьь 81,0обрабатывают 0,01%.ной (из рассчета на содержание сухого. твердого вещества) мальтогеннойальфа амилазой (Фунгамил 1600, Ново-ИндастриА/8) при рН 5,0 и при 50 С в течение 2 ч,После обработки получают следующий составсубстрата,%:ГлюкозаДисахариды