Способ получения иммуностимулятора

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИММУНОСТИМУЛЯТОРА путем очистки сырья, замораживания, измельчения, экстракции 3% -ным раствором уксусной кислоты с добавлением хлористого цинка, фильтрования, обработки надосадочной жидкости ацетоном, отделения осадка, растворения и лиофилизации целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью повышения специфической активности целевого продукта, в качестве сырья используют миндалины человека, а экстракцию проводят в 20 - 25 объемах уксусной кислоты.

Изобретение относится к медицинской промышленности, в частности к выделению биологически активных веществ для повышения функции миндалин.
Цель изобретения - повышение специфической активности целевого продукта.
Способ получения биологически активного вещества из миндалин включает очистку сырья, замораживание, измельчение, экстракцию 3%-ным раствором уксусной кислоты с добавлением хлористого цинка, фильтрацию, обработку надосадочной жидкости ацетоном, отделение осадка, перерастворение его в воде и выделение целевого продукта. В качестве сырья используют миндалины человека, экстракцию проводят в 20-25 объемах уксусной кислоты.
П р и м е р 1. Миндалины после тонзиллэктомии очищают от крови, пленок и налета и замораживают при -20^оС. Собранные миндалины в количестве 0,5 кг измельчают и загружают в реактор с мешалкой, заливают 10 л 3%-ного раствора уксусной кислоты. Туда же добавляют 0,01 кг хлористого цинка и экстрагируют 48 ч, перемешивая в течение 1 ч через каждые 8 ч. По окончании экстракции субстрат сливают и центрифугируют 20 мин со скоростью 3000 об/мин, надосадочную жидкость декантируют, к ней добавляют ацетон (1 ч. элюата и 5 ч. ацетона), перемешивают и формируют осадок в течение 20 ч. Выпавший осадок высушивают, измельчают, растворяют 0,01 кг осадка в 0,5 л воды и экстрагируют 4 ч. Удаляют балластные вещества путем фильтрации. В отфильтрованный раствор добавляют уксусную кислоту до рН 4,0 и стерильно фильтруют через пластины ЕКS, разливают во флаконы так, чтобы в каждом содержалось по 10 мг вещества, и лиофилизируют.
Выход активного вещества из исходного сырья составляет 0,005 кг.
П р и м е р 2. Миндалины человека после тонзиллэктомии очищают от крови, пленок и налета и замораживают при -20^оС. Собранные миндалины в количестве 1 кг измельчают и загружают в реактор с мешалкой и заливают 25 л 3% -ного раствора уксусной кислоты. Туда же добавляют 0,025 кг хлористого цинка и экстрагируют 56 ч, перемешивая в течение 1 ч каждые 8 ч.
По окончании экстракции субстрат сливают и центрифугируют 20 мин со скоростью 3000 об/мин, надосадочную жидкость декантируют, к ней добавляют ацетон (1 ч. элюата и 5 ч. ацетона), перемешивают и формируют осадок в течение 24 ч. Выпавший осадок высушивают, измельчают, растворяют 0,02 кг осадка в 1 л воды и экстрагируют 5 ч. Удаляют балластные вещества путем фильтрации, а в фильтрат добавляют уксусную кислоту до рН 4,0.
Раствор стерильно фильтруют через пластины ЕКS, разливают во флаконы так, чтобы в каждом содержалось по 10 мг вещества, и лиофилизируют.
Выход активного вещества из исходного сырья составляет 0,005 кг. Биологическую активность вещества, выделенного из миндалин, оценивали по его влиянию на функцию лимфоидной и состояние эпителиальной тканей миндалин интактных кроликов. Функцию лимфоидной ткани миндалин оценивали в реакции бластной трансформации лимфоцитов миндалин. Реакцию бластной трансформации лимфоцитов (РБТЛ) позволяет выявить способность этих клеток отвечать трансформацией в присутствии митогена: фитогемагглютинина (ФГА), конканавалина (Кон А) и др.
Биологически активное вещество, полученное из миндалин, вводили 20 интактным кроликам-самцам по 1 мг на 1 кг массы тела в 1 мл физиологического раствора внутримышечно ежедневно в течение 5 сут. Другой группе животных (20 кроликов) в той же дозе и по аналогичной схеме вводили тималин (как контроль). Контрольной группе животных (20 кроликов) вводили по 1 мл физиологического раствора по аналогичной схеме.
На 10 сутки от начала эксперимента всех животных забивали, выделяли миндалины и оценивали в них РБТЛ на Кон А и ФГА и гистологические изменения.
РБТЛ в миндалинах контрольной и опытной групп животных (М m) приведена в таблице.
Установлено, что введение биологически активного вещества из миндалин увеличивало на 33-78% бласттрансформацию лимфоцитов миндалин по сравнению с контрольной группой животных. У кроликов, получавших тималин, не отмечено достоверных изменений изучаемых показателей.
При гистологическом исследовании миндалин животных установлено, что введение биологически активного вещества из миндалин уменьшало клеточную инфильтрацию эпителия, что приводило к нормализации его структуры. Тималин не оказывал влияния на морфологическое состояние миндалин.
Таким образом, вещество, полученное предлагаемым способом, оказывает специфическое стимулирующее влияние на функцию миндалин.
Изобретение относится к медицинской промышленности, а именно к способам получения лекарственных препаратов для повышения функции миндалин. Цель изобретения - повышение специфической активности целевого продукта. Цель достигается способом получения биологически активного вещества из миндалин, включающим очистку сырья, замораживание, измельчение, экстракцию 3%-ным раствором уксусной кислоты с добавлением хлористого цинка, фильтрование, обработку надосадочной жидкости ацетоном, отделение осадка, перерастворение его в воде и лиофилизацию целевого продукта. В качестве сырья берут миндалины человека, а экстракцию проводят в 20 - 25 объемах уксусной кислоты.