Способ получения биомассы с днк-лигазной активностью
Формула | Описание | Похожие патенты | МПК / Метки | Текст | Заявка | Код ссылки
Формула
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БИОМАССЫ С ДНК-ЛИГАЗНОЙ АКТИВНОСТЬЮ путем культивирования клеток штамма E.coli с гибридной плазмидой, содержащей ген ДНК-лигазы в условиях аэрации, отличающийся тем, что, с целью увеличения выхода ДНК-лигазы, питательная среда содержит однозамещенный фосфорнокислый калий в концентрации 3 - 4,5 г/л и двузамещенный фосфорнокислый натрий в концентрации 16 - 23 г/л при рН 6,9 - 7,1, а концентрацию растворенного кислорода при аэрации создают 20 - 40% от насыщения воздухом в начальный период культивирования и 40 - 60% в конечной стадии культивирования.
Описание
Целью изобретения является увеличение биосинтеза ДНК-лигазы за счет предотвращения эмминации гибридной плазмиды у дочерних клеток.
Приготовление посевного материала.
Исходную культуру E. coli ВКМ В-1449Д пересеивают в чашку Петри с селективным фактором (ампициллин 30 мкг/мл) и выращивают при 30оС в течение 18 ч. Культуру из чашки Петри пересеивают в пробирку с 10 мл мясо-пептонного бульона и выращивают на качалке при 30оС в течение 4 ч. Полученной культурой засеивают колбы, содержащие 350 мл среды следующего состава, г/л: Дрожжевой автолизат, мл/л 10 Глюкоза 5,0 MgCl2 5,0 KH2PO4 4,5 Na2HPO4 23,0 (NH4)2 SO4 8,0 Пептон 20,0 р-р микроэлементов, мл/л 10
рН среды 6,7-6,9. Выращивание инокулята проводят в колбах на качалке 180-200 об/мин при 30оС в течение 12 ч.
Ферментация культуры производится после добавления инокулята из расчета 20 мл инокулята на 1 л питательной среды следующего состава, г/л: Дрожжевой автолизат, мл/л 3,0 Глюкоза 1,0 MgCl2 1,0 KH2PO4 3,0 Na2HPO4 16,0 (NH4)2SO4 3,0 Пептон 10,0 р-р микроэлементов, мл/л 5,0
Ферментацию проводят при 40оС при перемешивании и аэрации, обеспечивающей концентрацию растворенного кислорода в среде рО2 30-40% в течение начальных 2 ч и рО2 50-60% до окончания ферментации, рН поддерживают в пределах 6,9-7,1 10% -ным раствором NaOH. Процесс заканчивают в конце экспоненциальной фазы роста.
Выход биомассы 4 г/л, активность ДНК-лигазы 50000 ед/г биомассы 2
105 ед/л культуральной жидкости. Заявка
3568287/13, 22.03.1983
Ежов В. А, Санцевич Н. И, Кадомцева В. М, Лузина И. Е, Виестуре З. А, Шмите И. А
МПК / Метки
МПК: C12N 9/00
Метки: активностью, биомассы, днк-лигазной
Опубликовано: 15.11.1994
Код ссылки
<a href="https://patents.su/0-1179659-sposob-polucheniya-biomassy-s-dnk-ligaznojj-aktivnostyu.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентов СССР">Способ получения биомассы с днк-лигазной активностью</a>
Способ получения выпускной формы пигмента для крашения полиолефина в массе
Номер патента: 910704
Опубликовано: 07.03.1982
Авторы: Бородина, Кравченко, Плакидин
МПК: C09B 67/20
Метки: выпускной, крашения, массе, пигмента, полиолефина, формы
...400 мл воды и 3 мл диспергатора НФ.5 Суспензию диспергируют в коллоидноймельнице в течение 16 ч без подогрева до получения основной массы частицразмером 1-3 мкм, т.е. до тех пор, пока структура пигмента при дальнейсмеситель Вернер" Пфлейдерера или термопластавтомат загружают 200 г полиэтилена марки ПВи при размешива"нии и подогреве расплавляют его, Врасплав при 120 С и постоянном перемешивании в течение 2,5-3 ч загружают модифицированную суспензию красителя, По мере загрузки из массы отгоняют воду и ведут гомогенизацию в течение 8 ч с переменным охлаждениемдо 85-90 С до равномерного распределения пигмента в полимере. Затем пигмент охлаждают, размалывают и выгружа ют, Получают 283 г 303-ного полиэтиленового концентрата (средний...
Способ выявления парвовируса свиней, рекомбинантная плазмидная днк ppv4, используемая в качестве гибридизационного зонда для выявления парвовируса свиней, и рекомбинантная плазмидная днк м13ppv, используемая в
Номер патента: 1664831
Опубликовано: 23.07.1991
Авторы: Артюшин, Забережный, Коромыслов
МПК: C12N 15/35, C12Q 1/08
Метки: ppv4, выявления, гибридизационного, днк, зонда, используемая, качестве, м13ppv, парвовируса, плазмидная, рекомбинантная, свиней
...аналогично примеру.Проводят трансформацию клеток Е.соИ )м; отбирают клоны, устойчивые к ампициллину и имеющие нарушенную активность ф -галактозидазы, выделяют плазмидную ДНК из 12 клонов и проводят ее расщепление рестриктазами РзО и Есой. Отбирают клоны, содержащие плазмидные ДНК, которые при данном анализе образуют фрагменты размерами 2,1 и 2,7 т.п.н. Данные клоны используют в качестве продуцентов ДНК рРЧ 191,Б) Выделение фрагмента ДНК парвовируса свиней из ДНК плазмиды рРЧ 191 и встраивание ее в ДНК плазмиды рВВ 322.ДН К плазмиды рРЧ 191 и РВВ 322 обрабатывают рестриктазами Рзт 1 и ЕСоВ 1, проводят фенольную экстракцию и переосаждение этанолом и лигирование, как описано в примере 1,После трансформации клеток Е,СоИ С отбирают клоны,...
Способ получения биомассы микроорганизмов типа, обладающей бактериостатической активностью
Номер патента: 1090263
Опубликовано: 30.04.1984
МПК: C12P 1/00
Метки: активностью, бактериостатической, биомассы, микроорганизмов, обладающей, типа
...содержания воды. Поэтому приходит.ся сушить не менее 400 мл культурыпутем лиофилизации.3.5. Определение бактериостатичес.кой активности, Ве 88 хагоа являетсястрого аэробным микроорганизмом, иконцентрация кислорода в опытныхтрубках для него недостаточна. Опытпроводят в колбах, размешивая, повышая этим снабжение кислородом.Готовят три серии колбочек емкостью 50 мл, содержащих каждая по 40 18 мл питательного бульона. Колбыпервой и второй серий инокулируюткаждую с 4 мп 24-часовой культуройпатогенного штамма. Используют трипатогенных штамма: Рзецдошопазаегцдхпоза АТСС 10145, ЕыЬег 1 сй 1 асо 1 х АТС 11755 и БгарЬу 1 ососсцзацгецз АТСС 12600.Образцы бактериостатического продукта готовят, центрифугируя культуру, полученную согласно примеруЗ-п,...
Способ получения человеческой м о -дисмутазы
Номер патента: 1741610
Опубликовано: 15.06.1992
Авторы: Андреас, Вальтер, Ингрид, Конрад, Кристиан, Мария, Рудольф, Эдельтрауд, Элинборг
МПК: C12N 15/52, C12N 15/81
Метки: дисмутазы, человеческой
...мИ, рН 5,5) .в) Катионообменная хроматография.Содержащий МпО-дисмутазу диали"зат со стадии "б" подают на колонкус СИ"сефарозой; уравновешенную 60 мИтрис-уксусной кислотой, рН 5,5,злюируют линейным градиентом (15объемов колонки) от 60 мИ трис-уксус,.ной кислоты до 0,12 И ацетата натрия,г) Гельпроникающая хроматография,фракции с активностью МпО-дисму 35тазы со.стадии "в" собирают и подаютна колонку, содержащуюсефакрил Б300 НК или суперозу 12, уравновешенную 0,1 И фосфатным буфером, рН=7,8. 10 . 38Элюцию проводят тем же буфером.Получают 20 мг (1,1 мг/г клетки) чИпО-дисмутазы. формула иэобретения Способ получения человеческой МпО"дисмутазы, заключающийся в том, что из плацентарной или печеночной ткани человека выделяют мРНК, получают...
Способ оценки течения хронического активного гепатита у детей
Номер патента: 1836638
Опубликовано: 23.08.1993
Авторы: Власова, Переслегина, Шабунина
МПК: G01N 33/49
Метки: активного, гепатита, детей, оценки, течения, хронического
...эритема, телеангиозктазии на кистях. Размеры печени поКурлову; 11,0 - 9,0 - 7,0 см с выступаниемкрая печени из-под края реберной дуги на5,0 см. Селезенка пальпировалась на 1,5 см35 из подреберья. В биохимическом анализекрови - активность патологического процесса И степени: АлАт - 4,6 ммоль/л х ч (принорме 0,68 ммоль/л ч), АсАт - 1,94 ммоль/лх ч (при норме 0,45 ммоль/л х ч), тимоловая40 проба - 23,2 ед. (норма 5,0 ед,), у-глобулины18,9 (норма 14 ф ). Обнаружен НВз-антиген, Глутатион-трэнсфераза желчи С 51,2мкмоль/мин г, что позволило прогнозировать благоприятное течение заболевания.45 Клинический диагноз: хронический активный гепатит, Н Вз-антигенсеропозитивный, высокая ( Н степень) активность, ПН.Через 5 мес. ребенок повторно...
Предыдущий патент: Способ закачки газа в пласт
Следующий патент: Способ получения производных 3-аминоизохинолина
Случайный патент: Элеваторное колесо