Способ получения антрациклиновых гликозидов

ОП ИСАНИЕИЗОБРЕТЕН ИЯК ПАТЕНТУ Союа СоветскихСоциалистическихРеспублик 1 ц 886748(23) Приорит Гооудеротвеииый комитет СССР оо делам изооретеиий и открытий(53) УДК 547.615. .07(088.8) 81 Дата опубликования описани 72) Автор изобретения Иностранец Марио Госап-ве,.спания) 71) Заявитель 54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТРАЦ)КЛ)НОВЫХ ГЛ)КОЗ)ДО к спос водных антраобладающих кими свойст Известен способ получения новых производных антрациклиновых гликозидов, основанный на известной реакции обоиозидо Изобретение относит получения новых про циклиновых гликозидо ценными фармакологич вами. елатирования металла бидентатными и гандами 1 ,Цель изобретения - получение новы олезных соединений, расширяющих аренал средств воздействия на живой рганизм.Поставленная цель достигается спополучения антрациклиновых глив общей формулы3 886718где один или более бидентатных ли- ства кгандов (а), (Ь) и (с) заняты хелати- деленырованными катионами металла, выбранного из группы, состоящей из Сс 1(11),Ге (11), Еп ( 1), Со (11), РЬ (11), М(11), 5А 1(111), Си(11), Нд(11) и Ге( 1 ),средство которых к лигандам молекул 4хелатированию. Константы опредля некоторых из них.Таблица 1Константа диссоциации металлического производного сдоксорубициномгликозида выражается коэффициентом ассоциации, разным 10 , К являетсяо- СОСН или -СОСНОН, заключающимся о в том, что доксорубицин подвергают взаимодействию с солью укаэанного выше катиона металла в мольном соотношении 1:(1-3), добавлением щелочи доводят значения рН системы до 6,5-7,5,. 15 до образования растворимых мономерных металлосодержащих гликозидов, от - деляют полученный раствор от твердых металлосодержащих продуктов и раствор подвергают быстрому замораживанию,Иэ указанных катионов металла предпочтительным вариантом является взаимодействие с катионами Ге(11), Ге(111), Сц(1) и Со(11).Описанные металлические хелаты мож но испол ьзо ват ь для ре гулиро вания ионов металлов особенно благодаря их, способности служить источниками следов металлов для таких целей, как регулирование роста растений. Металлические желаты Ге+ могут иметь особенное значение для, использования при лечении хлороза железа или при его недостатке в растениях. Количество хелата трехвалентного желдза, которое35 нужно использовать, предпочтител ьно должно быть достаточным, чтобы исключить хлоротические условия в течение периода от одной до двух недель.Кроме того, соединения могут также служить в качестве стабилизаторов для различных систем, например пластмасс, полученных из винилиденхлорида, в которых следы хлорида приводят к нестабильности пластика. В таких сис 45 темах металлический хелат можно предпочтительно использовать при концентрациях, достаточных для покрытия эффектов максимального количества хло-рида, которое может выделитьсяБиохимическое и фармакологическое исследование продуктов, полученных предлагаемым способом. В табл. 1 при ведены конст анты ди с социации доксорубицина и даунорубицина с различными металлами. Металлы перечислены в порядке их общего срод Ге (111) Нд (11) Сц (11) А 1 (1 1 1 ) 5 х 10 1 х 10 и(11) РЬ(11) Со(11) 2 п (1 1 ) Ге (11) Сд (11) Са (11) Мд (11) 1,3 х 10 3,5 х 10 12,7 х 10 Как видно из табл. 1, металлом с самым высоким сродством к доксорубицину является трехвалентное железо, а металлом с минимальным сродством кальций.Процент ингибирования синтеза ДНК при возрастающих концентрациях антрациклина представлен в табл, 2; Таблиц а 2 Доксорубицин, Антрациклинц. М о 0 60 6875 90 90 Результаты табл. 2 показывают, что производные трехвалентного железа обладают таким же ингибирующим воздействием на синтез ДНК, как и родительский антибиотик, а поэтому и противоопухолевая активность, определяемая ингибированием синтеза ДНК, остается такой же в металлических произ водных .886748 Таблица Выживаемость мышей, 4, после введения доз антрациклина, мг/кг Лекарство Доксорубицин 100 60 0 0 0 0 100 70 40 30 г1 Выживаемость мышей, дни, после введения доз, мг/кгЛекарст во 48 42 6 Доксорубицин 11 50 Ферридоксорубицин 48 42 35 23 11 50 В табл. 3 приведены сравнительные данные токсичности доксорубицина и ферридоксорубицина. Этот эксперимент проводили с образцами ферридоксорубицина, полученного с различными пропорциями железа 0; 50; 70-, 80; 903) превышающими 2:1, по отношению к антибиотику, и все образцы давали, аналогичные результаты. Лекарства вводили только посредством одной ферридоксорубицин 100 100 В табл. 4 приведена терапевтичес- н кая активность ферридоксорубицина при лейкемии Рмышей. В этом эксперименте использовали ферридоксорубицин, полученный с различными пропорциями металла к антибиотику, превышающими зв 2:1 и равными ему, причем со всеми Эксперименты табл. 4 показывают, что ферридоксорубицин имеет терапевтический эффект такой же, как у доксорубицина в лейкемийных мышах, но его можно испол ьзоват ь при бол ьшей дозе благодаря его меньшей токсичности. Поскольку оптимальной лечебной дозы цоксорубицина нельзя достичь у человека из-за токсичности, то ферридоквнут ри брюшной и нъе кци и группе и з десяти мышей, а число выживших определяли через восемь дней,Этот эксперимент показывает, что ферридоксорубицин гораздо менее токсичен, чем доксорубицин. При графическом представлении результатов табл, 2 рассчитано, что средняя летальная доза используемого ферридоксорубицина 47 мг/кг.из них получены аналогичные результаты. Среднее значение выживания определяли на группе из десяти мышей, зараженных 100000 лейкемическими клетками и обработанных в первый день после заражения увеличивающимися дозами, доксорубицина и ферридоксорубицина.Таблица сорубицин обладает несомненным терапевтическим преимуществом благодарясвоей малой токсичности. В табл, 5 показаны электрокардиографические изменения непосредственн после внутривенной инъекции кролику возрастающих доз доксорубицина и фер ридоксорубицина 3;1.886748 Таблица 5 е ев еее аее ЧаЭлектрокардиографические изменения после введения дозы, мг/кг1."-.: ." 1. -. Ле кар ст во Отрицательная Т широкая ОРБ Доксорубицин Выражен- Отрицатель- Отрицательная ная ная Т широ- Т-волна Т-волна кая ОРБ Отрицательная Т широкая ОРБ Аритмия Брадикардиальнаяаритмия ферридоксорубицин Без существенных измененийй Без существенных изменений Нет Нет Нет 2 в отсутствии кардиотоксичности у ферродоксорубици на.В табл. 6 приведены спектральныехарактеристики видимого и инфракрасного спектра доксорубицина и ферридокг 5 сорубицина 3:1) .Таблица 6 Лекарство Оптическое поглощение, 4 при длинах волн 1 600 480 нм нм,1730 1620 1 Б 90 1 Б 8 Б 1 Б 70 см-" см " см 1 см-" см-" 280 0 0 0,180 0,200 Доксорубицин 30 50 0 30 ферридоксорубицин 0 37 0,080 0,100 0,360 23 20 10 Продолжение табл.7 Из табл. 6 видно, что комплексы проявляют поглощение, отличающееся от 4 в поглощения свободных соединений при различных длинах волн, а также имеют другие максимумы поглощения,В табл. 7 приведено сравнение гематологической токсичности (лейкоциты штук/мм) доксорубицина и ферридоксорубицина (3:.1)Таблица тЛекарст во Из табл, 7 видно, что гематологическая токсичность, наблюдающаяся при дозе 20 мг/кг доксорубицина, не достигается при ферридоксорубицине, пока концентрации не станут больше, чем 50 мг/кг.5 Биохимические и фармакологическиеисследования, представленные в табл, 1-7 показывают, что доксорубицин и даунорубицин образуют металлические хелат. 700 3,30 10 ксорубици 00 2,400 ферридоксорбицин 10 4,700 1 4,700 40 Этот эксперимент показывает, что нет существенного изменения электро- кардиограмм после введения ферридоксорубицина несмотря на то, что они очень интенсивны после введения доксорубицина, это свидетельствует об 4 700 4,400 30 4,700 3,600 40 4,700 3 800 . 0 4,700 2,800 60 4 700 1 800ные производные со всеми металлами, приведенными в табл. 1, причем эти мет алли че с кие хел ат ные прои з водные особенно стабильны если образованы с ионом трехвалентного железа, меди и кобальта, причем металлические хелатные производные, полученные при отношении металла к антибиотику, равном 2:1 или больше, менее токсичны в мышах и кроликах и терапевтически активны в лейкемийных мышах. Несмотря на то, что большую часть экспериментов проводили с ферридоксорубицином при различных отношениях металла к антибиотику (2:1 или выше), результаты аналогичны для металлических хелатных производных обоих антибиотиковв с различными металлами при различных пропорциях.П р и м е р 1. Ферридоксорубицин 3:1 (Триферридоксорубицин).100 мкмоль доксорубицина и 300 мкмоль хлорида железа (11) смешивают в водном растворе при комнатной температуре, при непрерывном перемешивании в колбе, снабженной прибором для измерения РН; При контакте железа с антибиотиком начинает образовываться комплекс. Значение РН медленно доводят до 7,3 с помощью концентрированного раствора йаОН. Затем раствор разбавляют водой до концентрации 1 мг доксорубицина в 1 мл и добавляют трис-оксиметиламинометановый буфер при РН 7,3 до конечной концентрации 12 мм. Сразу же раствор быстро пропускают через стерильный фильтр с размером пор 0,22 мкм, выливают в небольшую колбу, замораживают путем погружения в жидкий азот и лиофилизируют. Диофилизированный порошок стерильно запаивают в ампулы, содержащие 10 мг, которые восстанавливают непосредственно перед употреблением 10 мл воды. Аналогичным образом можно провестиреакцию других антрациклиновых гликозидов с хлоридом железа (111) для получения соответствующих желатов трехвалентного железа.П р и м е р 2, ферридоксорубицин(3,5:1)Повторяют процесс аналогично примеру 1, но используют 350 мкмоль хлорида трехвалентного железа и темпеРатуру реакции около 42 С,П Р и м е р 3, Ферридоксорубицин(2,5:1), 1 а 15 Повторяют процесс аналогично примеру 1, но используют 250 мкмоль хлорида трехвалентного железа и доводят РН до 6,91 р и м е р 4. ферридоксорубицин (2:1) .Повторяют процесс аналогично примеру 1, но используют 200 мкмоль хлорида трехвалентного железа, чтобы получить металлическое производное 2:1.П р и м е Р 5 ферридоксорубицин (1: 1).Повторяют процесс аналогично примеру 1, но используют 100 м кмол ь гид-рата окиси трехвалентного железа.П р и ме р 6, Медь (11) - док-сорубицин.Повторяют процесс аналогично приме20 ру 1, но используют сульфат меди (11), вместо хлорида трехвалентного железа.П р и м е р 7. Кобальт - доксорубицин,Повторяют процесс аналогично приме 1, но используют хлористый кобальтвместо хлорида трехвглентного железа,Показательные металлосодержащие соли, пригодные для предлагаемого способа Ге 504, НдС 1, СО 504, ЕЛ 504, Й 1 С 1 д,С 1(ИО)0, С С 1, РЬ(0 СОСН ), А 1 (0,)Р (И 03)1Соединения, получаемые предлагаемымспособом, при и спол ьзо вани и для ле чения рака, вводят в онкологически эф 35фективных количествах, как правилоУв сочетании с фармацевтически допустимым носителем. Таким образом, например, триферридоксорубицин можно даватьбольным, страдавшим от неопластических заболеваний, в дозах.от 40 до40250 мг/м поверхности тела с интервалами примерно от 1 до 3 нед. Как правило, эти соединения показаны к применению во всех тех случаях рака, прикоторых применяют соответствующие ро 45дительские гликозиды, а также в такихформах рака, когда производные оказываются активными из-за их новых характери сти к проницаемости (например, ра кмозга) .508 ыход полученных соединений 98-993.Структуру металлических производных антроциклиновых гликозидов вычис" ляют по спектрофотометрическому методу, по инфракрасным, ультрафиолетовым и видимым спектрам, по способу ядерно-магнитного резонанса и потенциометрирования,/89 Тираж 400 ВНИИПИ Государственного по делам изобретений 113035, Москва, Ж, Рауаказ 10 Подпи снокомитета СССРи открытийская наб., д. 4/5 пиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул, Проектная, 4 1, Способ получения антрацикпиновых гликозидов общей формулы где один или более бидентатдов (а), (Ь) и (с) занятываннь 1 ми катионами металла,го из группы, состоящей изРе( ), 2 п(1),. Со( ), РЬ(А 1(11), Сц(11), Н 9(11) и.сродство которых к лигандам Составител ьедактоР Е. ДичинскаЯ ТехРед А, Са 12гликозида выражается коэффициентомассоциаций, равным 10 , и К,1 является - СОСН или - СОСН ОН, о тл и ч а ю щ и й с я тем, что доксорубицин подвергают взаимодействию ссолью указанного выше катиона металлав мольном соотношении 1:(1-3), добавлением щелочи доводят значения рНсистемы до 6,5-7,5 до образованияо растворимых мономерных металлосодержащих гликозидов, отделяют полученный раствор от твердых металлосодержащих продуктов и раствор подвергают быстрому замораживанию.2. Способ по и. 1, о т л и ч аю щ и й с я тем, что указанный катион металла выбирают из группы, состоящей из Ге( ), Ге(), Сц(1) иСо( ),Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1. ,1 еза г О.Ч В 1 йвапБсЬагСгЬас 6 Е. РЬагщасодупащ 1 с з 1 оп 111 сапсе оГ щеа 1 снеасез оТ йНеап гасус 1 пе д гцоз. Ащ. Азз Сап се гВезеагсЬ., аЬзй., 285, 1974.