Способ получения метаболита “а 27 106
Похожие патенты | МПК / Метки | Текст | Заявка | Код ссылки
Номер патента: 539538
Автор: Дональд
Текст
111539538 Союз Советских Социалистических Республик(32) 01.02.733) США Государстввнныи комитет Совета Министров СССР по делам изобретенияи открытий 12.76. Бюллетеньния описания 14,02..17 (088.8) ата опубликов 72) Авторы изобретени Иностранцы Дональд Рай Браннон и Дональд Рой Хо(США) Иностранная фирма Эли Лилли энд Компани1) Заявите СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯЕТАБОЛИТА А 27106 Изобретение относится к способам получения биологически активных веществ путем микробиологического синтеза.Известен способ получения биологически активных веществ, включающий культивирование микроорганизмов вида Ягер 1 огпусез сапс 1 Ыцз в водной питательной среде, содержащей источники углерода, азота и минеральных веществ, при ее аэрации.Целью изобретения является получение нового биологически активного вещества, обладающего пониженной токсичностью, эффективно действующего против кокцидий, а также повышающего усвояемость корма жвачными животными.Для этого в качестве культуры микроорганизма берут Ягер 1 огпусез сапс 1 Ыцз ХКК 1.5449, а в питательную среду вводят дополнительно глюкозу и монензин, продуцируемый микроорганизмом Ягерогпусез с 1 ппагпопепз 1 з. При этом в качестве источника монензина используют стерилизованную жидкую среду выращивания Ягер 1 оппсез с 1 ппапюпецяз. Питательную среду можно также подвергнуть контактированию либо с отделенным от клеток и лиофилизированным бульоном среды выращивания при получении культуры Ягер 1 отпусез сапйЫпз ККК 1. 5449, либо с отделенным клеточным материалом этого микроорганизма, подвергнутым очистке посредством обработки ультразвуком, центрифугирования идиализа.5 На прилагаемом чертеже показан инфракрасный спектр поглощения метаболитаЛ 27106 в хлороформе.Биологически активное вещество, получаемое предлагаемым способом в виде натриевой10 соли, обозначают как метаболит А 27106,Исходным материалом для получения вещества Л 27106 является монензин, которыйполучают пз культуральной жидкости илииз мицелия культуры Ягер 1 огпусез с 1 ппагпо 15 пепз 1 з ЛТСС 15413, Вещество Л 27106получают из монензина в присутствии глюкозы под воздействием ферментов, выделяемых новым штаммом Ягер 1 отпусез сапЙЫиз,имеющимся в коллекции постоянных20 культур в Северном отделении исследовательских и опытных работ службы сельскохозяйственных исследований Министерства сельского хозяйства США под номеромХК 1 Ц, 5449,25 Новый штамм Ягер 1 огпусез сапдЫиз ЯКИ.5449 был изолирован из образца почвы на горе Арарат в Турции. Стрептомицеты МК 1 Ц.5449 характеризуются наличием спорофор,3имеющих форму от прямолинейной до волнисчои; споры имеют гладкую поверхность и форму от овальной до слабоцилиидрической; размер спор составляет в среднем 1,165 К К 0,57 мкм, размер цепочек спор колеблется от 10 до 50 мкм. Воздушный мицелий обычно белого цвета, при 26 С наблюдается лишь вегетативный рост, при 45 С роста не происходит, а максимальный рост и споруляция имеют место при 30 - 37 С.Характеристики среды культивирования: 1 СР 1. Удовлетворительный рост; светложелтый обратимый цвет (11 С 1); отсутствие воздушного мицелия или спор; растворимый пигмент отсутствует.1 СР 2. Обильный рост; светло-желтый обратимый цвет (1013); обильный воздушный мицелий и споры; (%) белый а; растворимый пигмент отсутствует.1 СР 3. Хороший рост; светло-желтый, обратимый зеленый цвет (10 С 1); хороший воздушный мицелий и споры; (%) белый а; растворимый пигмент отсутствует.1 СР 4, Рост хороший до обильного; обратимый умеренный желтый цвет (10 Н 4); хороший до обильного мицелий и споры; (Ю) белый а; коричневый расгворимый пигмент.1 СР 5, Обильный рост; обратимый умеренный оранжево-желтый цвет (1016); обильный воздушный мицелий и споры, (У) светло-желтый 2 дЬ; слабо-коричневый растворимый пигмент.1 СР 7. Хороший рост; обратимый светложелтый, зеленый цвет (10 В 1); хороший воздушный мицелий и споры; (%) белый а; растворимый пигмент отсутствует.Глицерин-глицин. Обильный рост; средней интенсивности коричневый обратимый цвет (1114); обильное формирование спор и воздушного мицелия, (%) белый а и (У) светло-желтый 2 дЬ; слабый, светло-коричневый растворимый пигмент.Среда Эмерсона. Обильный рост; серовато- желтый обратимый цвет (12 НЗ); воздушный мицелий и споры отсутствуют; растворимый пигмент отсутствует,Среда Беннетте. Хороший рост; светло-желтый обратимый цвет (1112); скудный воздушный мицелий и споры; (%) белый а; растворимый пигмент отсутствует.Среда Чапека. Хороший рост; умеренный оранжево-желтый цвет (1117); обильный воздушный мицелий и споры; (Ю) белый а; растворимый пигмент отсутствует.Глюкоза-аспарагин, Рост удовлетворительный до хорошего; светло-желтый, обратимый 5 4зеленый цвет (10 Н 1); воздушный мицелий испоры отсутствуют; растворимый пигмент отсутствует.кальциевая соль яблочной кислоты, Обиль 5 ный рост; обратимый серовато-желтый цвет(11 Е 4),обильный воздушный мицелий и опоры; (У) светло-желтый 2 Ьа; слабо-коричневый растворимый пигмент.Питательный агар. Хороший рост; обрати 10 мый светло-желтый, зеленый цвет (10 С 1);отсутствие воздушного мицелия или спор; растворимый пигмент отсутствует.При исследовании физиологических свойствЯгер 1 огпусез сапйЖз МКК 1. 5449 в соответствии со стандартными методиками было обнаружено следующее.Действие на снятое молоко, Просветление;створаживание через 14 дней.Восстановление нитрата. Положительное.20 Образование меланина из дрожжевого экстракта бульона триптона, Незначительное.Агар-тирозин, Отсутствие.Келатины ожиженные. Отсутствие на 21день.25 Требования в отношении температуры,26 С - лишь вегетативный рост; 36 37 С -хороший вегетативный рост, хороший воздушный мицелий и споры; при 43 - 53 С рост отсутствует.З 0 Результаты испытаний на утилизацию углерода с помощью Ягерогпусез сапс 11 йцзККК 1. 5449 приведены ниже. Символы, использованные для индикации реакци роста,следующие35 + = утилизация - хороший рост+ = вероятная утилизация плохойумеренный рост;- 1 = сомнительная утилизация - слабыйрост или отсутствие его;40 - = утилизации нет - отсутствие роста.Источник углеродаРаффиноза +й-Фруктоза +1Целлобиоза +14 д Л-Арабиноза +4й-Маннитол +1Рамноза +1ЦеллюлозаДекстроза +1 до 50 Й-Ксилоза +1Инозитол +с (отсутствиеуглевода- 1 до +1Среда для выращивания Ягер 1 огпусез сапс 11- 55 дцз ККК 1. 5449 может быть любой подходящей для этого микроорганизма, Однако предпочтительными источниками углеводов припроведении ферментации в большом объемемогут быть инвертный сахар или кукурузный 60 сироп, но можно использовать глюкозу, фруктозу, мальтозу, крахмал, инозитол и подобныеим. Если предполагается использовать культуру 5. сапдЫцз ИКК 1. 5449 для получения биологически активного вещества А 27106, то 5 среда должна содержать источник глюкозы5для обеспечения эффективной конверсии, Если Я. сапйдцз ХКК 1. 5449 выращивают с целью получения свойственной ей энзимной системы для последующего применения ее для получения вещества А 27106, то наличие глюкозы во время ферментации является произвольным.Предпочтительными источниками азота служат пептоны, соевая мука, смеси аминокислот и другие подобные им вещества.В качестве минеральных солей можно ввести в состав среды обычные растворимые соли, содержащие ионы железа, натрия, калия, аммония, кальция фосфата, хлорида, карбоната и др. Среда также должна содержать необходимое количество микроэлементов.Начальное значение рН среды для культивирования можно варьировать, но желательно выбирать и поддерживать рН среды при культивировании в пределах 5,7 - 7,5.Как и другие виды Ягерогпусез, 5. сапдЫцз МКК. 5449 требует аэробных условий для выращивания. Инокулирование водной среды можно производить с помощью суспензии, содержащей споры, или вегетативным прививочным материалом, Температуру выращивания выбирают в интервале 26 - 40 С, однако максимальный рост и спорообразование происходят при 32 - 37 С. Подачу стерильного воздуха в среду культивирования для ооеспечения эффективного роста микробной культуры и получения достаточно высокого выхода вещества А 27106 осуществляют со скоростью не менее 0,1 объема воздуха в 1 мин на единицу объема среды для культивирования, но предпочтительнее, если объем воздуха составляет от 1/3 до 1/2 объема воздуха в 1 мин на объем среды для культивирования.Наличие подходящего источника глюкозы является необходимым условием для конверсии монензина или фактора А антибиотического комплекса А 3823 в биологически актинное вещество А 27106.При наличии в среде глюкозы в необходимом количестве, а монензина в количестве 0,1 - 1,0 г/л среды культивирование в основном завершается приблизительно за 36 - 72 час. Оптимальная степень конверсии достигается, когда монензин присутствует в количестве 0,5 - 0,7 г/л, а глюкоза 2 - 2,5 вес. /О на количество среды.Если содержание глюкозы в среде меньше 2%, то ее необходимо добавлять, поддерживая концентрацию на оптимальном уровне.Если для получения биологически активного вещества А 27106 используют ферментную систему 5. сапЖЫпз МКЯ 1. 5449, то необходимо, чтобы ферментный препарат имел повышенную степень очистки. Активная ферментная система 5. сапдЫцз МВЯ 1. 5449 поисутствует в отфильтрованном бульоне, полученном пои ферментации, и в клеточном материале. Например, отфильтрованный бульон можно лиофилизировать и хранить в течение не менее двух недель до повторного растворения539538 5 1 О 15 2 Д 25 39 35 40 45 5055 60 65 6буферным раствором в количестве 1/6 объема первоначального бульона. Эффективная конверсия достигается примерно через 72 час, когда берут 2,5 г такого лиофилизированного препарата и 25 мг монензина.Ферментный препарат из клеточного материала Я. сапдЫцз МКК 1. 5449, отделенного от бульона после ферментации, можно получить следующим образом,Клеточный материал можно заморозить и хранить не менее трех месяцев. После оттаивания клетки суспендируют в буферном растворе, дополнительно очищают посредством обработки ультразвуком и центрифугирования, отделенные остатки клеточного материала суспендируют в буферном растворе и диализируют. Из 200 г клеточного материала получают количество диализата, достаточное для превращения глюкозы и 25 мг монензина в биологически активное вещество А 27106.Вещество А 27106 содержится и в культуральном бульоне в мицелпи Ягер 1 огпусез сапдЫцз ККЙ 1. 5449,В соответствии с этим технические приемы для выделения его выбирают с расчетом наибольшего извлечения продукта из одного или обоих источников. Так, например, ферментационную среду фильтруют, после чего фильтрат и плотную массу мицелия, полученную после фильтрования, экстрагируют с применением подходящих растворителей для получения вещества А 27106. Продукт извлекают из растворителей с помогцью обычных приемов в данной отрасли промышленности.Однако выделение вещества А 27106 можно производить из культуральной среды и мицелия, не подвергая экстрагированию, но предпочтительно удалив воду из них. Например, среду для культивирования можно высушить лиофилизацией, после чего смешать с материалом, поступающим на переработку. Кроме того, из твердых веществ можно не полностью удалить воду и приготовить суспензию, пригодную для добавления к влажной массе затора (суслу) или к аналогичному исходному сырью.Одним из удовлетворительных способов выделения вещества А 27106 может быть следующий. Среду, в которой производилось культивирование микроорганизма, фильтруют, я плотную масс, отжатую на фильтре, экстрагируют поляпным растворителем, например метанолом, Метанольный экстракт концентрирчот, а затем добавляют к фильтрату. Объе"иненный раствор экстрагируют дважды добавлепием половинного объема хлороформа. Хлороформенные экстракты упаривают в вавакууме, образуется маслообразный продукт темно-янтарного цвета, который обесцвечивают, пропуская над активированным углем в колонке с применением хлороформа.Полученный после вымывания адсорбента экстракт снова концентрируют в вакууме, что обеспечивает получение масла от светло-желтого цвета до бесцветного. Это масло раство5 10 15 20 25 зч 35 4 О 45 50 55 60 65 7ряют в минимальном количестве хлороформа и подвергают хроматографированию в колонке, заполненной силикагелем с использованием этилацетата в качестве растворителя. Элюирование желательно производить методом тонкослойной хроматографии, Загрязнения отмывают от адсорбента этилацетатом, а отмывание адсорбента смесью этилацетата с метанолом позволяет выделить биологически активное вещество А 27106.Биологически активное вещество А 27106 (натриевая соль) представляет собой белое твердое кристаллическое вещество, плавящееся при температуре около 170 - 175 С. Оно проявляет тенденцию к легкому образованию гидрата и других сольватов, при этом его температура плавления изменяется (обычно на несколько градусов ниже указанной).Элементарный состав вещества А 27106 следующий (/О): С 58,78, Н 8,51, 0 27,85 и Ха 3,63, что соответствует эмпирической формуле С 4 Н 71016 Иа.Вещество А 27106 практически не проявляет никакого ультрафиолетового поглощения в области выше, чем 235 мкм.Инфракрасный спектр поглощения его в хлороформе показан на прилагаемом чертеже. Достижимые максимумы поглощения у спектра таковы: 3,1; 3,36; 3,69; 6,82; 7,1; 7,25; 7,9 (плато); 8,1; 8,3; 8,67; 8,8 (плато); 9,04; 9,22;9,51; 9,66; 10,03; 10,26; 10,66; 11,23; 11,47;11,83 и 12,15.Масс-спектр вещества Л 27106 показывает наличие молекулярно-ионного пика при п/е 854,44630 и характеристических пиков при гп/е 836.44129, 779.44690, 761. 44740Эти полученные данные совпадают с эмпирической формулой и значением молекулярного веса, равным 854 для натриевой соли вещества А 27106.Обычно вещество А 27106 легко растворимо з растворителях высокой степени полярности, нерастворимо в неполярных растворителях и имеет различную степень растворимости в растворителях промежуточной полярности. Например, вещество А 27106 растворимо в чизших алифатических спиртах, частично в реноле, диэтиловом эфире и ацетоне и сравнительно нерастворимо в жидких низших альманах.Электрометрическое титрование вещества 1 27106 в кислотной форме при начальном начении рН 8 показало наличие группировки, :пособной титроваться при рКа 7,2,Описанная мононатриевая соль является .стественной формой вещества А 27106. Исходя из натриевой соли, легко получают кислоу; из кислоты получают аммонийную и друие соли, образованные щелочным металлом литием, калием, рубидием, цезием). Все они )бладают биологической активностью.Точная структура вещества А 27106 неизве.тна. Известно, что пои конверсии монензина о вещества А 27106 необходимо наличие люкозы, которая расходуется даже при от 8сутспвии подвергающихся метаболизму клеток 8. сапдЫцз. Молекулярный вес веществаА 27106 соответствует молекулярному весуглюкозила монензина.Вещество А 27106 менее токсично, чем монензин. Например, при введении монензинагруппам мышей по б голов в каждой внутрибрюшинно в дозировке 50 мг/кг одна из шести погибла, при дозировке 100 мг/кг три изшести погибли. В то же время монензин прианалогичных условиях эксперимента при дозировке 10 мг/кг приводил к смерти одну изшести мышей, а при дозировке 20 мг/кг трехиз шести мышей.Пример 1, 8, сапс 1 Ыцз ХЕКА. 5449 выращивали на скошенном агаре на среде, приготовленной по Беннетту, до получения хорошовыраженных колоний.Выросшую культуру удаляли и готовили изнее суспензию на стерильной деионизированной воде (10 мл). Эту суспензию разливали вчетыре стеклянных сосуда для встряхивания,в которых содержалось 100 мл вегетативнойсреды следующего состава (г на 1,1 л): растворимые продукты, получаемые из зерна после винокурения (Надризол, КаИопа 1 0 Ь 61- 1 егз Ргос 1 цсЬ Согпрапу), 25,0; лактоза 10,0;мальтоза 10,0, 1."е 804 7 Н 20 0,01; МАМБО 7 Н 202,0; КНРО 4 2,0; СаСО, 2,0; деионизированнаявода, Инкубирование проводили при 30 С навстряхивающем аппарате вращательного действия при 250 об/мин в течение 24 час.Эту культуральную среду применяли дляинокулирования 15 стеклянных сосудов объемом 500 мл, содержащих по 100 мл стерильной ферментационной среды следующего состава (г в 1 л): мясной говяжий экстракт5,0; панкреатический гидролизат казеина 5,0;хлористый натрий 5,0; глицерин 15,0; углекислый кальций 2,0; деионизированная,вода до1 л, рН среды 7,2. Инокулированную средуинкубировали в течение 72 час,В ферментере объемом 40 л готовили 24 лпроизводственной среды следующего состава,г: средство против вспенивания в виде маслообразного полисилоксана 5,0, глицерин 375,декстроза 625, панкреатический гидролизатказеина 125, мясной экстракт 125, хлористыйнатрий 125, углекислый кальций 50; деионизированная вода.Начальное значение рН среды 7,0. Средустерилизовали в автоклаве при 120 С в течение ЗО мин под давлением 1,05 - 1,41 кг/см(15 - 20 фнтов на 1 кв. дюйм). После стерилизации рН среды 7,6.К стерильной среде добавляли 25 г очищенного монензина, растворенного в 200 мл этанола и вводили 700 мл вегетативного прививочного материала, приготовлснного, как описано.Фепментапионную среду аэрировали, пропуская степильный воздух со сковостью около 1 л (0,35 куб. фута), и перемешивали спомощью мешалки со скоростью 420 об/мин.Инкубировали при 30 С в течение приблизи5 О 55 6 о 65 9тельно 114,5 час. Процесс ферментации прослеживали с помощью тонкослойной хроматографии на силикагеле. Первоначально в ферментационной среде присутствовал лишь монензин, Постепенно появилось второе пятно, указывающее на присутствие вещества А 27106. В конце ферментации присутствовало лишь пятно, свидетельствующее о наличии вещества А 27106.П р и м ер 2. Культуру микроорганизма Ягер 1 огпусея с 1 ппап 1 опепя 1 я АТСС 15413 выращивали в 55 мл среды, помещенной в колбу объемом 250 мл в течение 47 час. Этот вегетативный прививочный материал добавляли к 220 мл среды в литровой колбе и инкубировали при встряхивании в течение 21 час. Подготовленный прививочный материал применяли для посева в ферментер емкостью 40 л, содержащий 24 л стерильной среды следующего состава, г: .глюкоза 750,0; соевая мука 625,0; соевое масло 500,0; метилолеат 500; средство против вспенивания в виде маслообразного полисилоксана 5,0; хлористый калий 2,5; двузамещенный фосфорнокислый калий 2,5; хлористый марганец, тетрагидрат 15,0; сернокислое железо, гидратированное 7,5; углекислый кальций 25,0; вода деионизированная до объема 24 л. рН среды доводили до 8,0, добавляя 15 мл 10 н. раствора гидрата окиси калия,Инокулированную среду инкубировали при 32 С и течение 234 час. Через 72 час после начала инкубирования увеличивали количество продуваемого воздуха от 0,01 до 0,023 м/мин (от 0,55 до 0,8 куб. фута в 1 мин) и скорость перемешивания от 500 до 700 об/мин. Получение фактора А антибиотика А 3823 или монензина в основном заканчивалось через 210. час.Через 234 час содержимое ферментера пастеризовали для дезактивации Я, с 1 ппагпопепя 1 я, после чего в ферментер добавляли следующие количества питательных веществ, г: декстроза 750; соевая мука 625; хлористый марганец, тетрагидрат 155; углекислый кальций 12,5; сернокислое железо, гексагидрат 7,5 хлористый калий 2,5; двузамещенный фосфорнокислый калий 2,5; метилолеат 250 мл; соевое масло 250 мл; вода деиониэированная до ооъема 24 л.Значение показателя рН доводили до 8,0 путем добавления 215 мл 5 н. раствора гидрата окисиатрия,после чего среду стерилизовали. Свел инокулировали вегетативной культурой. Ягер 1 опусея сапдЫпя МР 1 Ц. 5449. Инкубипование проводили в течение 137 час при 30 С при аэрации со скоростью 0,01 м/мин (0,35 куб. фута в 1 мин) перемешивая сначала при 120 об/мин, через 16 час при 420 об/мин; а через 40 час скорость перемешивания повышали до 500 об/мин. Декстрозу (400 г) добавляли в следчогцие периоды инкубации, час: 44, 66,5, 89, 97, 113 и 12.Углекислый кальций (175 г) добавляли к началу, ча 72-й и 99-й час инкубации. 5 1 О 15 2 О 25 31 35 40 45 10Контроль инкубации проводили, используя метод тонкослойной хроматографии. Через 137 час производство вещества А 27106 по существу заканчивалось.П р и м е р 3. Культуру микроорганизма 5. сапдн 1 пя МКЯ 1. 5449 выращивали, как описано в примере 1. Клеточный материал отделяли от ферментационной среды фильтрованием под вакуумом и разделяли на равные части по 200 г, которые сохраняли в замороженном состоянии. Две из полученных частей оттаивали при комнатной температуре и суспендировали в 0,05 М фосфатном буфере (рН 5,8) до объема 600 мл. Эту клеточную суспензию обрабатывали ультразвуком в течении 30 мин, затем центрифугировали при 10000 об/мин 30 мин и остаток из обломков клеточного материала суспендировали в 100 мл указанного буфера. Данную суспензию диализировали 18 час против указанного буфера. К 50 мл диализата добавляли 120 мг глюкозы и 25 мг монензина в 2 мл этанола. Реакционную смесь перемешивали 72 час при 30 С, затем фильтровали; фильтрат экстрагировали хлороформом (100 мл). Полученный хлороформенный экстракт концентрировали в вакууме, хроматографировали на колонке с силикагелем (10 г). Отмывание адсорбента этилацетатом указывало на наличие лишь следов фактора А антибиотика А 3823. При отмывании адсорбента смесью этилацетата с метанолом (19: 1) выделялось вещество А 27106 (17 мг).Полученный препарат А 27106 является эффективным средством для лечения и профилактики кокцидиоза домашней птицы. Количество лекарственного препарата, вводимого в корм птице, должно составлять 0,005 - 0,05% от веса корма, предпочтительнее 0,01 - 0,04%.Вещество А 27106 также улучшает утилизацию корма жвачными животными, преимущественно взрослыми, Вводить его жвачным животным можно в дозе 0,5 - 2,5 мг/кг в сутки, Наилучшие результаты получают при даче его животным в количестве 0,1 - 1,5 мг/кг в сутки.Формула изобретения 1. Способ получения метаболита А 27106, включающий культивирование микроорганизмов вида Игер 1 огпусея сапдЫия при аэрации в водной питательной среде, содержащей источники углерода, азота и минеральных веществ, отличающийся тем, что, с целью получения вещества, обладающего пониженной токсичностью, в качестве микроорганизма берут Ягер 1 оп 1 усея сапййю МКК 1. 5449, а в питательную среду дополнительно вводят глюкозу и монензин, продуцируемый Ягер 1 огпусея с 1 ппагпопепя 1 я.2. Способ по п. 1, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что в качестве источника монензина используют стерилизованную жидкую среду выращивания Ягер 1 огпусея с 1 ппавопепя 1 я.3. Способ по пп. 1 и 2, отличающийся539538 12 тем, что питательную среду подвергают контактированию с отделенными от среды предварительного,выращивания Ягер 1 огпусез сапдЫцз МЙК 1. 5449 клеточным материалом, очищенным посредством обработки ультразвуком, центрифугирования и диализа. зс ЪсИ С с С СЪ 3с, С: а и ц Ч 1 О 1 ( О 3 00 г. Составитель Л. МураяТехред Л. Гладкова Корректор Е, Хмелева едактор Е. Хорина Изд.1907 Т Государственного комитета Сопо делам изобретений и от 13035, Москва, Ж, Раушская аказ 349/бЦНИИПИ одписн Типография, пр. Сапунова,тем что питательную среду подвергают контактированию с отделенным от клеток и лиофилизированным культуральным бульоном среды предварительного выращивания Ягер 1 огпусез сапйс 1 цз ККК 1. 5449.4. Способ по пп. 1 и 2, о тл и ч а ю щ и й с я рахн 575ета Министров ССрытийнаб., д. 4/5
СмотретьЗаявка
2002131, 01.02.1974
ДОНАЛЬД РЭЙ БРАННОН, ДОНАЛЬД РОЙ ХОРТОН
МПК / Метки
МПК: C12D 13/00
Метки: метаболита
Опубликовано: 15.12.1976
Код ссылки
<a href="https://patents.su/6-539538-sposob-polucheniya-metabolita-a-27-106.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентов СССР">Способ получения метаболита “а 27 106</a>
Предыдущий патент: Стабилизированная композиция на основе синтетического полимера
Следующий патент: Состав для эмульгирования нефтепродуктов
Случайный патент: Устройство для регулирования натяжения полосы на моталке листопрокатного стана