Способ концентрирования антител

локти Советских Социалистических Республик(61) Дополнительное к авт. свид-ву - (22) Заявлено 21 07 72 (21) 1813458/28-1 З с присоединением заявки Хе(51) М, Кл.12 к 7/00 1 оеудорстееннн 1 й ноьетет Совете 1 йиннстрое СССР оо денни изобретений н отнрьтнй(71) Заявитель Институт вирусологии нм. Д, И, Ивановского(54) С 110 СОБ КОНЦЕНТРИРОВАНИЯ АНТИТЕЛ Изобретение относится к медицине, аименно к вопросам, связанным с изготовлением диагностических сывороток для серологических реакций. Как известно, для проведения серологических реакций в настоящеевремя вместо иммунньтх сывороток пользуются ас "иточ иммунизированных животных.Применение асцита как источника антителпозволчет щнре использовать для иммунизащи мелких лабораторных животных, 1 аПри приготовлении иммунных асцитныхжидкостей титр антител может быть невы.ьсок, В этом случае необходимо осуществить концентрацию антител.Известны способы концентрирования антител, предусматривающие фракцнонировацие исходного материала, например, с помощью ионообмениой хроматографии,С целью упроцтения способа предложенофракционярованне осуществлять при посте 20пенном оттаивании замороженной жидкости,Предлагаемый способ заключается вследующем.Иммунную асцитную жидкость замораоживают при -5-70 С, а затем при 14- Яб 2,42 С оттаивают, отбирая при этом 2070% общего объема материала, содержащего концентрат антител,Зтот способ основан на следукяцихэкспериментах,Их проводят с иммунной асцитной жидкостью (ИАЖ), которая содержит антителакак высоких, так и низких титров,ИАЖ разливают в цилиндрические флаконы емкостью ,50,100, 150, 500, и1000 мл и замораживают при минус5,10-12, ЗОь.Э 5 и 70 С. Оттаиваютосодержимое флаконов при 14-42 С. Помере оттаивания собирают фракции числомот 10 до ЗО. В каждой фракции определяют содержание белка и антител.Исходную ИАЖ и каждую фракцию исследуют на содержание антител в реакцитЕсвязывания комплемента (РСЖ), реакцииторможения гемагглютинацин (РТГА) иреакции нейтрализации.П р и м е р 1. Замораживание 11%Кв объеме 500 мл ведут при чттырх т еепературных режимах; - 5,10, - ;30 и - , 0 С,18 РЯ 59 Сопоставление оптической плотности фракций и акивности в серологическчх реакциях 2560 1280 1280 1280 60 640 с 20 320 320 32040 40 40 40 80 6 О 20 32060 19 20 21 160 320 160 23 40 80 40 10 40 На фиг, 1 представлены полученные данные О содержании белка.Наивысшее содержание белка наблюдается в первых десяти фракциях после замераживания при -д, -10 и -ОО . ПослеГфг Огозамораживания при 70 С содержание бел ка в 1-20 фракциях более равномерное.В результате сопоставления результатов опыта установлено, что слишком быстроеОоттаивание (42 С) или очень медленное (14 С не обеспечивает желаемого эффекта разаеления ИАЖ, Оптимальным режимОм замОражиВания является минусо О 10-12 С, а оттаивания - 18-20 С, При сэтом в центре флакона образуется ядро из кристаллов ВОды, От кОторогО к периферии флакона располагается белковыи раствор с увеличением в этом направлении его концентрации, Во время замораживания ИАЖ нельзя перемеливать или Встря.-".гчать, так как можно ларуаи и,:троп с с ра с ело ения.П р и м е р 2, Исследуют 1%Ь к вирусу венесуэльского эицефлломи элита лошадей. Общий объем И,л,Ж 150 мл, Количество фракпий 30, объем каждой из них 5,0 мл.В опыте определяют титр комллемвнтосВязываюших антител, антигемагглютини нов, а также измеряют поглощение улътр - фиолетового излучения с длиной волк,.1 около 280 ммк белками, находящимися ь каждой отдельной фракции.Данные представлены в таблице. Иэ них видно, что наивысшие титры антител и наибольшая концентрация белка обнаружены в первых 13 фракциях, При этом наивысшие титры наблюдают в первых 10 фракциях, а затем - постепенное сии жение концентрации антител.с 0,650 1,4 ОО 1,360 1,350 1,230 1,320 1,300 1,230 0,790 0,550 0,335 0,282 0,157 0,1 34 0,149 0,124 ОД 20 0,115 О 106 0,097 с"с 09 с 0,090 0,093 0,053 0,130 9,098 0,044 0,020 0,016 0,0124 йй 855В примерах 3,4 и 5 изучали ИАЖ кВосточному энцефвломиэлиту лощадей,вирусу Семлики и Чикунгунья, Гри этомзамораживали по 100 мл, а при оттаивании собирали фракции по 10 мл. Голученные результаты представлены соответственно на фиг, 2,3 и 4,Во всех случаях фракция 1 представляла собой исходную ИАЖ,Из графиков видно, что во фракции 2 в(по сравнению с фракцией 1) имеет местоскачкообразное нарастание титра антители концентрации белка. В нескольких по,следу 1 ощих фракциях (3-5) содержаниеантител и белка также значительна. Во кфракциях 6, 7 имеет место постепенноепонижение титра антител и количествабелка, а в последней фракции антител почти не содержится.Аналогичная картина наблюдалась и при 21исследовании фракций на наличие глобулвнов с помощью электрофорезв в агаре фир".ч Дифко.Злектрофорегрвмма фракций ИИК к вимрусу ЗЭЛ представлена на фиг. 5, 25В первых фракциях отмечается большоесодержание вльучгнв и-глобулина, азатем от фракция к фракции их количествоуменьшается,В последней фракции содержится неболь- ф шое количество вльбумина,-глобулинотсутствует,Данные подтверждают, что наипысп аяконце,.трация антител имеет место в первых оттвивших порциях, что составляетоколо 20% общего объема, последние порции (около 30) практически не содержитантител. Таким образом, согласно предлагаемому способу, концентрацию антителведут путем фракционирования исходногоматериала, которое осуществляют при поотепенном оттаивании замороженной асцит"ной жидкости,В зависимости от того; какую степеиьконцентрации антител требуется получить,по мере оттаивания собирают 20-70 Вобщего обьема, в остальное выбрасывают.Этот способ не требует сложного обо:рудования и легко осуществим квк в лабораториях, так и в производственныхусловиях.Формула изобретенияСпособ концентрирования антител путеь. фракционироввния исходного материала, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что,с целью упрощения способа, фрвкционироввние осуществляют при постепенном оттаивании замороженной вспятной жидкости,:кай, .г;,-л 5, 1- аи Попписиоеета Министро