Способ изоэлектрического фокусирования амфолитов

(5 ПИСАНИЕ ИЗОБРЕТ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ ИОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ К АВТОРСКОМУ СВ(71) Институт химии АН ЭССР(54) СПОСОБ ИЗОЭЛЕКТРИЧЕСКОГО ФОКУСИРОВАНИЯ АМФОЛИТОВ(57) Изобретение относится к способу изоэлектрического фокусированияамфолитов и может быть использованов хромагографической технике для разделения белковых смесей. Изобретениепозволяет увеличить разделяющую способность с одновременным обессоливанием (разделение амфолитов на фракции, отличающиеся по рН на 1-2).Эффект достигается использованием вкачестве твердой фазы катионитов вводородной форме и анионнтов в гидроксильной форме и десорбцией амфолитов с катионитов раствором щелочии с анионитов раствором кислоты,Изобретение относится к биохимии,а именно к способам разделения белковых смесей, и может найти применение в производстве узких фракций ам 5фолитов носителей, аминокислот и дляразделения петидов и белков по их,изоэлектрическим точкам.Целью изобретения является увеличение разделяющей способности и упрощение технологии разделения.На чертеже изображены диаграммыоптического поглощения и рН фракций,П р и м е р 1. В колонку объемом10 мл с катионообменной смолой Агарозой 4 В, содержащей 10 мкмоль/мл ВОвгрупп в протонированной форме, вносят 50 мл раствора, содержащего 0,1 амфолитов-носителей (для изоэлектрического фокусирования в диапазонерН 4-7), представляющих собой смесьполиаминополикарбоновых кислот с изоэлектрическими точками, лежащими вдиапазоне рН 3,5-10,0, 0,5 мг яичного белка и затем вытесняют фракции 256 мМ раствором БНАМОН.П р и м е р 2. В 17-миллиметровуюколонку с катионообменной смолой ЯРСефадекс Св протонированной форме, емкость по Иа ионам 2,5 ммоль/г 30сухой смолы (полисахарид с сульфопропильными фрагментами), вносят 5 млраствора, содержащего 5 амфолитовносителей диапазона рН 4-9 и 1 ЯаС 1.Вытесняют 10 мМ раствором КОН и вдиапазоне рН 4-9 собирают 10 фракцийпо 7 мл каждая. Фракции свободны отсолей, имеют электропроводность ниже1000 Оми при изоэлектрическом фокусировании создают градиенты рН в диа пазоне 1-2 единиц рН,П р и м е р 3. В 9-миллиметровуюколонку с анионообменной смолой Сепарон НЕМАЯ в ОН -форме, емкость по С 1ионам 300 мкмоль/мл (сферический по 4лигликольмеТакрилатный гель с четвертичными аммониевыми группами) вносят5 мл раствора, содержащего 0,5 ммольлизина, серина и глутаминовой кислоты. Вытеснение проводят 100 мМ НС 1,собирая фракции по 1 мл. Лизин присутствует во фракциях 1-4, серин во фракциях 4-9 и глутаминовая кислотаво фракциях 9-13.П р и м е р 4, На колонку, содержащую 9 мл анионообменной смолы Сепарон НЕМАС 1, находящейся в ОН -форме,наносят 5 мл раствора, содержащегопо 0,5 ммоль глутаминовой кислоты,серина и гидрохлорида лизина. Проводят втеснение 0,1 М раствором НС 1,при этом лизин находится в эффлюентес 6,0 до 12,7 мл, серии с 10,6 до24,8 мл, глутаминовая кислота с 24,1до 29,8 мл,П р и м е р 5 (сравнительный).Опыт осуществляют аналогично описанному в примере 4, но нанесенную пробу далее элюируют раствором глутаминовой кислоты и лизина (по 0,75 мМкаждый). Лизин находится с 5 по 60 млэффлюента, серии с 15 по 28 мп и глутаминовая кислота с 26 по 60 мл,Из результатов видно, что по известному способу лишь первая частьлизина может быть получена в чистомвиде, все остальные компоненты постоянно присутствуют в смеси.П р и м е р 6 (сравнительный).Опыт осуществляют аналогично описанному в примере 4, но в качестве сорбента используют анионит в СНзСОО -форме. Зффлюент содержит кроме смесиамфолитов (лизина, глутаминовой кислоты и серина) и ионы элюента.Формула изобретенияСпособ изоэлектрического фокусирования амфолитов путем сорбции на ионообменных смолах в колонке с последующей десорбцией и отбором фракций амфолитов, о т л и ч а ю щ и й - с я тем, что, с целью увеличения, разделяющей способности и одновременного обессоливания, в качестве ионообменных смол используют катиониты в водородной форме или аниониты в гидроксильной форме и десорбцию амфолитов осуществляют водным раствором кислоты при использовании в качестве сорбента анионита или основания - при использовании катионита.1388792 Составитель В.Мкртычанедактор Т.Парфенова Техред М.Ходанич Корректор О.Кунд Заказ 1575 Подписи роектная, 4 Производственно-полиграфическое предприятие, г, Ужгород,Тир ВНИИПИ Госуд по делам и 035, Москва, рственного комитета СССРобретений и открытийЖ, Раушская наб., д, 4/