Способ фракционирования гуминовой кислоты

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК 5 0 01 Й 33/24 ПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕ ГОСУДАРСТ 8 ЕННЫЙ НОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ(56) 1.Авторское свидетельство СС9 813249, кл.С 01 И 31/08, 1979.2.ьиГФ К.Ь.,Ропег А,М. Се 1сЬговайосгар 1 у оГ Ьцщдс ас 14.,.5 оБс 1., 22, В 2, 1971, р,237-249.(54) (57) СПОСОБ ФРАКЦИОНИРОВАНИЯ ГУМИНОВОЙ КИСЛОТЫ, включающий выделение гуминовой кислоты из почв, обработку, :элюэнтом - трис(гидрокси)метиламинометаном и фракционирование на декстрановом геле, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения качества фракционирования, в качестве элюэнта используют 0,050-0,055 М раствор трис(гидрокси)метиламинометан-НС 1 буфера, содержащего 0,8-1,2 Е додецилсульфата натрия.1 1126877Изобретение относится к сельскомухозяйству и почвоведению в частности к разделу химии почв по выделениюи определению состава и свойств специфических продуктов почвообразования 5гуминовых соединений, а именно фрак .ционированию гуминовых соединений помолекулярной массе.Известен способ Фракционированиягуминовых кислот, включающий выделе Оние гуминовой кислоты из почвы, обработку элюэнтом трис(гидрокси)метил"аминометаном и хроматографированиемна декстрановом геле, при которомв качестве элюэнта используется водный раствор мочевины в концентрации6-7 М при рН 9,0 1 Д .Недостатки данного способа следующие:действие мочевины как денатурирующего агента на гуминовую кислоту необеспечивает полную диссоциацию агрегатов молекул гуминовых кислот, пред-ставляющих собой надмолекулярныеструктуры, что приводит к преобладанию высокомолекулярной фракции приФрдкционировайии;использование 6-7 М растворов мочелипы из-за их высокой вязкости вынуждает применять низкие скорости филь- ЗОтрации, что увеличивает время анализа.Известен также способ фракционирования гуминовой кислоты, включающийвыделение гуминовой кислоты из почв,.обработку элюэнтом (трис-НС буФер)и фэдкционирование на декстрановомгеле 2,Однако из-эа адсорбции образцана матрице геля и образования в раст-оворе ассоциатов молекул гуминовыхкислот эа счет нековалентных связейэтот способ не позволяет достаточнонадежно и качественно Фракционироватьгумусовые кислоты.Цель изобретения - повьппение качества Фракционирования гуминовыхкислот.Поставленная цель достигается тем,что в качестве элюэнта используют0,05-0,055 М раствор трис(гидрокси)метиламинометан-НС 1 буфера, содержащего 0,8-1,2% додецилсульфата натрия. Сущность изобретения состоитфв том, что гуминовая кислота растворя ется в трис-НС буфере с рН 9,0, содержащем додецилсульфат натрия, и Фракционируется на колонке, заполненной декстрановым гелем в потоке этогоже растворителя,Гуминовые кислотыпод действием детергента додецилсульфата натрия ( ДСН) денатурируют и диссоциируют на субъединицы. Обработкагуминовых кислот ионным детергентомФДСН исключает сорбционное взаимодействие гуминовых кислот с матрицейгеля. В этом плане действие ДСН аналогично действию неионного детергента мочевины, В отличие от мочевиныДСН, в состав молекулы которого входяталифатические додецильные группы исульфокислотные группы, обеспечиваетболее полную диссоциацию ассоциатовгуминовых кислот за счет разрывавсех нековалентных связей, что прояв.ляется в большем процентном содержании относительно низкомолекулярнойфракции при гельхроматографии в присутствии ДСНКроме того, согласнотеории гельхроматографии, скоростьфильтрации, при которой проводятФракционирование, необходимо понижатьпо мере увеличения вязкости используемого элюэнта, что увеличиваетвремя анализа.На фиг, 1-Э представлены способыФракционирования гуминовой кислотыразными элюэнтами;.на фиг.1 - элюэнт0,414 М трис-НС буфер с рН 9,0; нафиг.2 - элюэнт 0,05 М,трис-НС буфер,концентрация ДСН 0,8 ; на фиг.З -элюэнт 0,05 М трис-НС 1 буфер с рН 9,0,концентрация ДСН 1,2 ,Л р и м е р 1. Гельфильтрацияпроводится при следующих условиях. Исходный препарат гуминовой кис" лоты растворяют элюэнта, содержащим 0,414 М трис-НС 1, рН 9,0 мл раствора гуминовых кислот с концентрацией вещества 1 мг/мл, наносят на колонку с гелем марки Сефадекс ГОО и проводят элюирование буфером того же состава.(Колонка 60 х 0,9 см, тип К, фирмы "Фармация", Швеция, заполненная декстрановым гелем марки Сефадекс Гдля гельфильтрации, с интервалом фракционирования 1500004000 молекулярных единиц.Анализ элюируемого раствора проводится с помощьюпроточного спектрофотометра Увикорд Сфирма "ЛКБ -приборы", Швеция) придлине волны регистрации 280 нм, коллектора фракции ультрорак 11 ( фирмарН буфера буфера 0,030 0,040 9,0 4,3 9,0 6,2 9,0 0,050 0;055 9,0 9,0 9,0 9,0 3 11268Концентрация ДСН 0,83. Скорость -г элюирования составляет 4 мл/ч. Результат опыта приведен на фигНа фиг.2 показаны результаты гель- хроматографии, полученные согласнопредложенному способу.П р и м е р 2. Условия проведения анализа аналогичны описанным в примере 1,Отличие данного опыта состоит в том, что концентрация ДСН элюэнта 10 в образце составляет 1,23, .Результаты хроматографии представлены на фнг.3.Следовательно, концентрация ДСН .менее 0,87. не обеспечивает достаточной диссоциации ассоциатов молекул гуминовых кислот.П р и м е р 3. Обоснования концентрации трис-НС 1 буфера.Выбранная молярная концентрация буфера обусловлена достаточной буферщ ной емкостью раствора; что иллюстрирует.данные, приведенные в таблице.рНраствора гуминовой кислоты . втрис-НС 1 буфере.При растворении гуминовой кислоты в растворе буфера с низкой молекулярМолярная концентрация 77 4ной концентрацией происходит подкисление среды; Раствор буфера с молярной концентрацией 0,050-0,055 М обеспечивает выбранную реакцию среды,Таким образом, как видно из срав- нения результатов, положительный эффект от использвания изобретения за-ключается. в том, что предложенный способ повьппает качество фракционирования за счет увеличения степени диссоциации гуминовых .кислот,что под-. тверждаетая появлением низкомолекулярной фракции гуминовых кислот.и снижением в 8-9 раз содержания фракции со средней молекулярной массой, которая представлена в основном в виде ассо" циатов типа димеров.Предложенный способ позволяет выделить индивидуальные фракции орга-, нического вещества почвы, что дает .возможность на качественно новом уровне определять его роль и влия,ние на почвенное плодородие, генезис . и эволюцию почв, на развитие микро" организмов. рН раствора гуминовойкислоты в буфере1126877 Я, ппеоцеская птвносеь оставитель ехред С,Лег Заказ 8685/ Тираж 822рственного кобретений и от,Ж,Раушска Филиал ППП "Патент",г.ужго д,ул,Проектная,4 Редактор С,Тимохин ВНИИПИ Госудпо делам из113035,Москв Малининаа Корректор Л,Пилипен Подписноитета СССРрытийнабд.4/5