Способ определения направленности течения циррозов печени

ОП ИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ Совэ СоветскииСоциалистическихРеспублик К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(22) Заявлено 220880 (21) 3212275/28-13 с присоединением заявки М -Государственный комитет СССР по делам изобретений и открытий(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ НАПРАВЛЕННОСТИ ТЕЧЕНИЯ ЦИРРОЗОВ.ПЕЧЕНИ Изобретение относится к медициньа именно к гепатологии.Известен способ определения направленности течения циррозов печени путем определения фермента в сыворотке крови спектрофотометрически 1.Однако известный способ являетсядлительным и трудоемким.Цель изобретения - ускорение анализа,Поставленная цель достигаетсятем, что при осуществлении способаопределения направленности теченияциррозов печени путем определенияфермента в сыворотке крови спектрофотометрически, определяют активность кислой ДЙК-азы и при сниженииее активности относительно нормыопределяют тяжелое течение заболевания.Способ осуществляется следующимобразом.В микропробирку вносят 20 мклсыворотки крови, 20 мкл ацетатногобуфера рН 5,. 0,120 мл раствора ДНК( 1 мг на 1 мл ацетатного буфера),Смесь инкубируют 3 ч при 37 оС вприсутствии 20 мкл 1,6 М раствораКСЙ, После инкубации добавляют160 мкл 0,5 н. раствора НСЙ 04 . Содержимое отстаивают 25 мин в холоде,а затем центрифугируют при 4000 об/мин20 мин. Оптическую плотность измеряют при длине волны 260 нм на спектрофотометре против контрольного раствора, состоящего иэ 160 мкл ацетатногобуфера и 160 мкл 0,5 н. раствораНС 10,. Активность фермента выражают 1 О в микромолях аденозинмонофосфата,освобожденного в результате гидролиза ДНК за 1 ч инкубации, на 100 млсыворотки крови. Величина ферментативной активности кислой ДНК-азыниже 70 мкМ АМФ/ч свидетельствуето тяжелом течении цирроза печени.С целью установления прогностического значения кислой ДНК-азы активность фермента была определена всыворотке крови 24 больных с клиническими признаками цирроза печени.Диагноз цирроза ставился на основании тщательно собранного анамнеза,наличия в прошлом перенесенного вирусного гепатита и комплекса клинико лабораторных и инструментальных методов исследования. Все больные поступали в клинику в период обостренияпатологического. процесса. Активность кислой ДНК-аэы определялась ЗО при поступлении больного в стационар65 и 3-4 раза в динамике заболевания. В табл. 1 представлены данные, свидетельствующие о величине активности кислой ДНК-аэы в периоде обострения паталогического процесса.Как следует из полученных результатов, ныявляются существенные четкие различия в величинах активности кислой ДНК-азы у больных циррозом печени. Дальнейшее наблюдение эа больными позволило выявить аналогичную разницу. Как выяснилось, у больных, н сыворотке которых величина активности кислой ДНК-азы колебалась от полного отсутствия в сыворотке до 70 мкМ АМФ/ч, в среднем 31,7 + +6,8 мкМ АМФ/ч, цирроз был выраженно актинный с декомпенсированной печеночно-клеточной недостаточностью. Течение цирроза было неблагоприятным и у 4 больных он закончился летальным исходом.Основные клинико-лабораторные показатели, используемые для оценки тяжести цирроза печени, представлены в табл. 2. Сравнительный анализ представленных параметров у больных двух групп показал, что такие клинические симптомы и лабораторные показатели, как слабость, похудание, повышение температуры, изменения со стороны крови, СОЭ, увеличение печени, селезенки, наличие отеков и асцита не могут н полной мере служить показателями тяжести цирроза, ибо они зависят от психоневрологического статуса больного, наличия сопутствующих заболеваний и др. Количественное определение билирубина в сыворотке крови, особенно его связанной фракции, широко используется в гепатологической практике для оценки желчевыделительной функции печени и степени печеночно-клеточной недостаточности. Однако изменение били- рубина в сыворотке не отражает белково-синтетическую фракцию печени. Между тем, именно при циррозах происходят значительные нарушения синтеза белка гепатоцитами. Кроме того, при циррозах нередко наблюдается синдром холестаза с характерными клинико-биохимическими проявлениями. При этом повышение билирубина в сыворотке крови может быть не адекватно общему состоянию больного к другим биохимическим показателям. Кроме того, в 15 случаев цирроз может протекать без желтухи. В связи с этим, определение билирубина в сыворотке крови для оценки тяжести цирроза печени используется лишь в комплексе с другими клинико-лабораторными показателями, В настоящее время для определения тяжести цирроза печени рекомендуется комплексное определение в сыворотке крови актив 5 1 О 5 20 25 ЗО 35 40 45 55 60 ности аланинаминотрансфераэы, уровнюальбуминон и гамма"глобулинов. Этоположение было подтверждено результатами, представленными в табл. 2.Исследонания показали, что активностьаланийаминотрансфераэы достоверноразличается между сравниваемыми группами. Однако разница не столь значительна (в 1,5 раза), а степень достоверности Р = 0,028.Несмотря на резко выраженные изменения в соотношении белков сыворотки (уменьшение альбуминов и увеличение глобулинон) достоверных различий в содержании их между группами выявлено не было,Изменения активности органоспециФических ферментов печени, уроканиназы и Фруктоэо-фосфвтальдолазыпри циррозах незначительны и малоотличаются у больных обеих групп.ЭЭти ферментные тесты более информативны для оценки тяжести вирусногогепатита.Активность кислой ДНК-азы с большой достоверностью различается убольных обеих групп (Р = 0,001).Причем эти различия в большей степени выражены, чем для аланинаминотрансферазы. Разница в 9 раэ дляДНК-азы против 1,8 раза для аланинаминотрансферазы, При ухудшении состояния больного активность фермента, как правило, снижалась, Снижениеактивности кислой ДНК-аэы предшество.валс появлению клинических признаков, свидетельстнующих об ухудшениин состоянии больного, и изменениюдругих биохимических показателей.П р и м е р . Больная М. 57 лет,Поступила в клинику с жалобами наслабость, головокружения, отсутствиеаппетита, боли в праном подреберье,желтушность кожи и склер. При поступлении состояние больной тяжелое, Больная интенсивно желтая, печень пальпируется неотчетливо у края ребернойдуги. Билирубин общий н сыворотке261,6 мкМ/л, связанный 241,1 мкМ/л.Актинность аланинаминотрансферазыв пределах нормы, уроканиназа в сыворотке отсутствует, актинностьФруктоэо-фосфальдолаэы 1,2 ед.Количество альбумина снижено до323,0 г/л гамма-глобулинов увеличено до 345 г/л, СОЭ - 43 мм/ч, нФормуле крови изменений нет. Активность кислой ДНК-азы при поступлении 70 мкМ АМФ/ч.Через неделю состояние больнойне изменилось, но в самочувствиинаступило некоторое улучшение: появился аппетит, улучшился сон. Количество билирубина в сывороткеоставалось высоким 300 мкМ/л общий;260,7 мкМ/л связанный, Активностьаланинаминотрансферазы увеличилась незначительно - до 1,16 мкМ пир, а976959 Таблица 1 Величина активности кислой ДНК-аэы в сыворотке крови больных при благоприятном и неблагоприятном прогнозе цирроза печени Цирроз с благоприятнымпрогнозом,Цирроз с не- благоприятным прогнозом,мкИ АМФ/ч Больной Больной мкМ ЛМФ/ч 33,3 56,6 О,О 70,0 6,6 33,3 70,0 20,0 30,0 10 10 33,3 13,3 14,2 12 281, Оф 5,9 31,7+6,8 изменений в содержании белков сыворотки и .активности органоспецифических ферментов не произошло. В то же время активность кислой ДНК-аэы снизилась до 30 мкМ АМФ/ч.Еще через неделю развилась резкая печеночно-клеточная недостаточность. Больная впала в коматозное состояние. Активность кислой ДНК-аэы на протяжении коьы:19.01.78 г, - отсутствует22.01.12-00 - 30 мкМ/АИФ/ч22.01.16-00 - отсутствует22,01.22-00 - отсутствуетАктивность аланинаминотрансферазы, уроканинаэы и фруктоэо-фосфатальдолазы в пределах нормы, 23.01 в 1-05 больная погибла. Диагноз: цирроз печени смешанногс типа, выраженно активный с декомленсированной печеночно-клеточной недостаточностью, осложненной субмассивным некрозом печени. Предлегаемый способ оценки тяжести цирроза печени позволяет многократно обследователь больного сиспользованием небольшого количества 1 О крови для.анализа (0,04 мл) и избегнуть проведения биопсии, показаннойне всем больным, является нетрудоемким и быстро выполнимым (в течение5-6 ч ). Данный способ оценки тяжес ти цирроза является высокочувствительным, в 100 случаев дает правильныерезультаты,216,7 175,0 276,6 181,6 5.86, б 266,6 325,0 226,6 356,6 408,3 186,7 176,6 .976959 Цирроз умеренно активный с субкомпенсированнойпеченочноклеточной недостаточностью ШЮ Ф Выраже абос Резковыражена дани 7 бол У 5 больны У 4 больных боль Печ наболь 4 см Увели у все ных д Не увеличен Селезе 4 больных У Асцит ьны+12,1 г 28+9,9 г Клиническиесимптомы,лабораторныепоказатели Субфебрильная темпера тура Билирубин общий (до 17,1 мкМ/ Билирубинпрямой (до 11,9 мкМ/л Ала ни нами нотрансфераза (до 0,7 мкМ пир.а) р.уктозс 1-фосфаальдолазадо 1 усл.ед УроканиназаT - Гло були ны30-50 г/л о - Глобулины90 г/л Т -Глобул110 г/л Цирроз выраженно активный с декомпенсированнойпеченочноклеточной недостаточностью Увеличенау 10 больны Увеличенау 2 больных 30,5+38,6 94,1+25,6 1,88+0,24 У 10 отс.,у 2 до0,035 мкМ 8+6,2 г/л Таблица 2 0,015 мкМурок.а+3600 в мм 13,0+0,4 г/Ъ 11,8+1,3 г/Ъ7500+870 в мм5 Гемоглобин 8981+860 в мм Лейкоциты Кислая ДНКаза (124,4+ 31,7+6,8 +3,5 мкМ ЛМФ/ч) 281+5,9 0,001 Формула изобретения Составитель Н. ХрусталеваРедактор Л, Пчелинская Техред Т.Фанта Корректор Н. Король Заказ 9048/5 Тираж 714ВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, П, Раушская наб., д. 4/5 ПОдписное Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 Способ определения направленности течения циррозов печени путем определения Фермента в сыворотке крови спектрофотометрически, о т л и ч а - ю щ и й с я тем, что, с целью ускорения анализа, определяют активность кислой ДНК-азы и при снижении ее активности относительно нормы определяют тяжелое. течение заболеванйя.Источники информации,25 принятые во внимание при экспертизе1, Лвторское свидетельство СССР,Р 845336, кл. А 61 В 10/00, 1977