Способ диагностики инфаркта миокарда

ОП ИСАНИЕИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Союз СоеетскнкСоциапнстнческикРеспублик и 976958(3 ) РРС 01/168765 (33) ГДРОпубликовано 30,11,82. Бюллетень 44 ф(М Кп 3 А 61 В 10/00 Государственный комитет СССР о делам изобретений и открытийДата опубликования описания 30.11.82 ИностранцыЭрнст-Георг Краузе, Хорст Вилль, Манфред.,Бами Альберт Волленберген(72) Авторы изобретения Иностранное предприятиек ФЕБ Арцнаймиттельверк Дрезден ""(54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ИНФАРКТА МИОКАРДА Изобретение относится к медицине, а именно к диагностике инфаркта миокарда.Известен способ диагностики инфаркта миокарда путем определения активности Фермента в сыворотке крови ( 1 (.Однако известный способ является трудоемким, так как в сыворотке находится лишь незначительное количество фосфорилазы при большом избытке других протеинов, что мешает реакции определения.Цель изобретения - упрощение способа.Поставленная цель достигается тем, что в сыворотке крови определяют активность фосфорилазы Э, при этом сыворотку крови концентрируют путем мембранного фильтрования или с помощью обработки нерастворимым крахмалом, для чего пробу наносят на колонку с крахмалом, при 4 оС предварительно набухшим в растворе, содержащем .Фтористый натрий, Ь-глицерофосфат натрия и меркаптоэтанол при рН 6,1, после чего элюируют Фосфорилазу раствором, содержащим Ъ -глицерофосфат натрия, этилендиаминтетрауксусную кислоту и меркаптоэтанол, при РН 6,8 и с 30 о,полученную фракцию инкубируют 60 минпри 37 С с раствором, содержащимгликоген, глюкозо-Фосфат и аденозиниминфосфат в соотношении 5:3:2,полученную смесь обрабатывают трихлоруксусной кислотой, образовавшиГ.- ся осадок отделяют, а в надосадочйойжидкости определяют Фосфорилазу Вэлектрофоретическим методом и приналичии этого фермента диагносцируют инфаркт миокарда.П р и м е р 1 . Берут следующиесредства для определения фосфорилазы,15 Раствор 1. 0,1 М фторида натрия0,01 М натрия-,9-глицерофосфата,рН 6,10,015 М меркаптоэтанола .20 Раствор П . 0,04 М натрия-Я-глицерофосфата, рН 6,80,001 М этилендиаминтетрауксусной кислоты0,015 М меркаптоэта"атсвор 6 0,04 М глицилглицина,рН 6,80,01 М меркаптоэтанола0,008 М этилендиамин тетрауксусной кислоты,976958 Формула изобретения Составитель С. МалютинаРедактор Л. Пчелинская Техред Т.Фанта Корректор Н, Король Заказ 9048/5 Тираж 714 ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Подписное Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. ПроекТная, 4 Раствор Ч . 3, 3 гликогенаРаствор У . 0,083 М глюкозо-фосфата0,005 М аденозиниминофосфата,Сыворотку предварительно концентрируют посредством мембранной фильтрации в отношении от 2:1 до 3:1 илиобрабатывают нерастворимым крахмалом,3-4 мл сыворотки наносят на столбиккрахмала,(2 х 1 см), который уравновешивают раствором 1. После этогоего трижды промывают раствором 1 по3 мл и элюируют 2 мл растворапри 30 С фосфорилазу. 1 -ч. концентрированной сыворотки промывают 1 ч,растнора )( . К 5 ч. этой смеси илиэлюата столбика крахмала добавляют3 ч. раствора Я и 2 ч. раствора 9После 60 мин инкубации при 37 Спроводят денатурацию трихлоуксуснойкислоты и проводят анализ продуктареакции на фосфат по известному способу. П р и м е р 2, Способ осуществляют по примеру 1, но определениеактивности фермента проводят в присутствии специфических веществ, подавляющих изофосфорилазы. Из разност.определений по примеру 1 может бытьрассчитана доля активности мускульной фосфорилазы, специфичной длясердца.Средство для разделения изофосфорилазы и определения активности фермента имеет следующий состав,Раствор 1. 0,042 М трис(оксиметил)- аминометана0,001 М этилендиаминтетрауксусной кислоты0,049 М борной кислоты, рН 8 2, 40Растнор . 0,03 М глюкозо-фосфата0,002 М аденозиниминофосфата0,002 М натрий-(-глицерофосфата, рН 6,80,002 М этилендиаминтетрауксусной кислоты0,001 М меркаптоэтанола 500,1 М фторида натрия,Раствор Н 0,01 М йода0,014 М йодида калия,Аликноты, содержащие Фосфорилазыв элюате с крахмальной колонки (приЭ мер 1), разбавляют н отношении 2;1 посредством 1,2 М сахарозы и разделяют электрофоретически на изофосфорилазы. Отдельный гель (5 акриламина, 0,2 М,Н -метилбисакриламида) содержит 0,1 гликогена и буферируется раствором 1, который одновременно является электронным буфером.После инкубации геля, несущего фермент, в растворебоковые цепи, имеющие вид амилазы й возникающие у гликогена, заполимеризонавшегося в геле, проявляются раствором(становятся видимыми).Предлагаемый способ позволяет быстро определить активность фосфорилазы В, наличие которой обеспечивает диагностику инфаркта миокарда. Способ диагностики инфаркта миокарда путем определения активности фермента в сыворотке крови, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью упрощения способа, в сыворотке крови определяют активность фосфорилазы В , при этом сыворотку крони Концентрируют путем мембранного фильтрования или с помощью обработки нерастворимым крахмалом, для этого пробу наносят на колонку с крахмалом, при 4 С предварительно набухшим в растворе, содержащем фтористый натрий,-глицерофосфат натрия и меркаптоэтанол при рН 6,1, после чего элюируют фосфорилазу раствором, содержащим-глицерофосфат натрия, этилендиаминтетрауксусную кислоту и меркаптоэтанол при рН 6,8 и30 С, полученную фракцию инкубируют 60 мин при 37 С с раствором, содержащим гликоген, глюкозо-фосфат и адено-, зиниминофосфат в соотношении 5:3:2, полученную смесь обрабатывают трихлоруксусной кислотой, образовавшийся осадок отделяют, а н надосадочной жидкости определяют Фосфорилазу В электрофоретическим методом и при наличии этого фермента диагностируют инфаркт миокарда. Источники информации,принятые во внимание при экспертизе 1. Асатиани В.С. Ферментные методы анализа. 1969, с. 623-642.