Способ стабилизации глюкоамилазы

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ Свез Сфаетскнк СоциалистическихРеспублик и 1872550 К АВТОРОЮМУ(22) Заявлено 1001 ВО (21) 2868406/28-13с присоединением заявки Нов(23) Прморитет -Опубликовано 15.10,81,Бюллетень Й 938Дата опубликования описания 1510,81 5)М лз С 12 й 9/96 Государственный комнтет СССР по дедам язобретеянй я отврытий(088.8) И.М. Грачева, В.В. Яровенко, Р.Л, Фил . поваи М.Н. СилеваксМосковский ордена Трудового Красного Знаменитехнологический институт пищевой промаиленности(54 ) СПОСОБ СТАБИЛИЗАЦИИ ГЛЮКОАМИЛАЗЫ Изобретение относится к микробно логической промышленности, а также к крахмало-паточной, спиртовой, хлебопекарной, где ферментные препараты глюкоамилазы широко применяются.Известен способ стабилизации 1- амилазы различными солями кальция, которые вводятся в препараты -амилазы во время или после очистки Фермента 13 . Наиболее близким к предлагаемому по технической сущности и достигаемому эффекту является способ стабилизации амилолитического фермента, заключающийся во введении в культуральную жидкость комплексного стабилизатора с последующей ее очисткой, где в качестве комплексного стабилизатора используют водорастворимую кальциевую соль и органический агент - алифатический гликоль, имеющий следующую Формулу: НОСН СН ОНили пропандиол, а в некоторых случаях неионогенное моющее средство (2 .Недостатком известного способа стабилизации водных растворов фермента является невысокая остаточная активность фермента при длительномхранении (так через четыре недели впробеостаточная активность составляет 51), а таКже высокое процентное содержание органического стабилизатора (10) в ферментном растворе.Цель изобретения - удлинение сроков сохранения глюкоамилаэной активности при комнатной температуре истерильности ферментного препарата,Поставленная цель достигается тем,что в соответствии со способом стабилизации глюкоамилаэы, заключающимся во введении в культуральную жид кость комплексного стабилизатора споследующей ее очисткой, в культуральную жидкость в качестве комплексного стабилизатора вводят формалинв количестве 0,1-0,3 совместно с 20 низином в количестве 1,4-1,6.П р и м е .р , Проводят стабилизацию глюкоамилаэной активности культуральной жидкости. Культуральнуюжидкость получают глубинным культи внрованием дрожжеподобного микроор.ганизма. Епдоаусо реть ьр.20-9 насреде следующего состава, Ъ:Кукурузный экстракт3Кукурузный крахмал 1 30, Олеиновая кислота 0,2Культуральную жидкость отделяют от биомассы на сепараторе АСГ-ЗМ.Полученный ферментный раствор отбирают в колбы с притертой пробкой( М ш 50 мл ) и туда же добавляют 1 стабилизаторы различной концентрации. В качестве стабилизаторов используют формалин, низин, а также комплексный стабилизатор - формалин + низин.Опыты проводят при комнатнойтемпературе, Через определенные про межутки времени (О, 5, 14, 24, 32, 68 сут) в пробах определяют глюкоамилазную активность глюкооксидазным методом, содержание белковых веществ- методом Лоури, а также наличие бак териального заражения.Полученные данные приведены в табл. 1.Наибольшим стабилизирующим эффектом обладает комплексный стабилиза тор, состоящий из формалина (0,2) и низина (1,5), обнаруживающий синергическое действие. На 32-ые сутки хранения потери глюкоамилаэной активности составляет всего 8 посравнению с контролем. В контроле за это же время хранения глюкоамилазная активность снижается на 56 (с13,3 ед/мл до 5,8 ед/мл). Изменение концентрации комплексного стабилизатора от 0,2 до 1,5 на 32-ые сутки ЗО хранения сопровождается сохранением ферментативной активности в образцах (7, 8, 9) на уровне 9,4-12,3 ед/кл. Дальнейшее увеличение дозировки стабилизатора до 2,0 (проба 10) приво дит к уменьшению глюкоамилазной активности, которая составляет 9,0 ед/мл.При обработке культуральной жидкости формалином увеличение его дозировки от 0,2 до 1,5 сопровожда(1 ется на 32-ые сутки хранения уменьшением глюкоамилазной активности .в образцах (1, 2, 3) с 9,37 ед/мл до 6,25 ед/мл, в то время как содержание белка находится на уровне 4,95,95 мг/мп.Следовательно, оптимальное количество формалина в растворе - 0,2,при этом активность фермента уменьшается по сравнению с контролем(13,3 ед/мл) на 30,Наименьший стабилизирующий эффектпроявляется при добавлении в культуральную жидкость одного низина, вэтом случае падение активности на32-ые сутки хранения составляет48-60,Удельная активность при обработке комплексным стабилизатором меньшепо сравнению с активностью при обработке формалином в связи с болеевысоким содержанием белка, что можнообъяснить белковой природой низина,представляющего собой полипептид.На 32-ые сутки хранения в образцах с формалином (1, 2, 3) и комплексным стабилизатором (7, 8, 9,10)бактериальное заражение не обнаруживается, тогда как в контроле и в образцах с одним низином (4, 5, 6)бактериальное заражение отмечаетсяуже на 5-ые сутки хранения. На 52-ыесутки стабилизации культуральной жидкости все образцы подвергают бактериальному заражению за исключением пробы Р 3, содержащей 1,5 формалина,однако в этой пробе на 32-ые суткихранения сохраняется только 47глюкоамилазной активности.В табл. 2 приведены данные, характеризующие остаточную глюкоамилазную активность, выраженную в процентах к исходной пробе. Образцы, приведенные в этой таблице, содержатоптимальное количество стабилизатора.Результаты свидетельствуют, чтопри добавлении в культуральную жидкость Епдооусоря 5 зр, 20-9 комплексного стабилизатора, состоящего изформалина в количестве 0,2%и низинав количестве 1,5, удается в течение32 сут сохранить на 92 глюкоамилазную активность и предотвратить бактериальное заражение.Реализация изобретения позволяетудлинить сроки сохранения глюкоамилазной активности при комнатной температуре и стерильности ферментногопрепарата,Ч Ю Ю ГЧ с ГЧ ОЪ тЧ %с. О сс од 6о хх хЯ Фц хп 5 э 1 Х 1 1 Цс.9 1 ч ДЕ о о ф о% 4 сРЪ РЪ РЪ РЪ ф РЪ О х п 5 О,РЪ О1 ЙХс Х 1 аФФ ЦОФОО, оенхО ХОЦн 1 Гч о в Гч1 с фсЮ с. с- О11 О Л ГЧс с %4 %" Ю 1 1 1 Хх Ю ГЧ х Ц х ч х о Ь 4 с 1 4 1ОиО 1 хх 1 ФП 3 бах Ф 1 Фч йФ Я А 1 ХПЙ ЧсР1 1:Х 11 Ф ха ое Я Й 1 ХЦ и 1 О АДЕ Ь Ю Л ГЧ с ГЧ ОЪ ГЪ СГ с-О Гс сГ ГЧ ООЪ О ГЪфс с с с с с(Ч еН е 1 е-Г О - - Н О Л Г Л 1 Ч Гс ГЧ ОЪ ОЪ с. с с с О Л Ю О ф ОЪ ЮМ а с3 ОсР ГЧ О 1 СОс со о Ю О 3 О 1 ОЪ ту ср В с с с Ч 3 В О ф ОКоличестОстаточн ая глюкоамилаз н ая активность,к исходной, при длительности хранения, сут во стаби 14 32 68 24 ли- за- тора,.Контроль Формула изобретения Способ стабилизации глюкоамилазы, заключающийся во введении в культуральную жидкость комплексного стабилизатора с последующей ее очисткой, о т л и ч а ю щ и й а я тем, что, с целью удлинения сроков сохранения глюкоамилазной активности при комнатной температуре и стерильности ферментного препарата, в культуральСоставитель Е. ВоробьеваРедактор С, Тимохина Техред Ж.Кастелевич Корректор С. Щомак Заказ 8950/41 Тираж 531 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д, 4/5филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 формалин НизинФормалин+Низин ную жидкость в качестве комплексного стабилизатора вводят формалин вколичестве 0,1-0,3 совместно с низином в количестве 1,4-1,6. Источники информации,принятые во внимание при экспертизе 1. Патент США У 3524798,кл. С 12 О опублик. 1971. 2. Патент США М 3819528,кл. С 12 О опублик. 1976 (прототип).