Способ количественного определения1, 2, 5-триметил-4 пропионилокси-4-фе-нил-пиперидина гидрохлорида

Союэ Советскик Социалистических РеспубликОПИСАНИЕИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(22) Заявлено 030779 (2) 2789759/23-04 Ф)М 1 Л3 с присоединением заявки ЙУ С 01 й 21/64 Государственный комитет СССР но делам изобретений и открытий(23) Приоритет Опубликовано ЗОЛ 581, Бюллетень М 9 20Дата опубликования описания ЗОР 5814) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИ 1,2,5-ТРИМЕТИЛ-ПРОПИОНИЛ-ОКСИФЕНИЛПИПЕРИДИНА ГИДРОХЛОРИДА 5 а и и из Изобретение относится к аналитической химии, а именно к способамколичественного определения 1,2,5-,-триметил-пропионил-окси-фенилпиперидина гидрохлорида (промедола).Известен способ определения 1,2,5-триметил-пропионил-окси-фенилпиперидина гидрохлорида путем обработки анализируемой пробы растворомперманганата калия в серной кислотес последующим добавлением воды допоявления флуоресценции 1.Недостаток способа - низкаяизбирательность определения,Наиболее близким к предлагаемомуизобретению по технической сущностии достигаемому результату являетсяспособ количественного определения1,2,5-триметил-пройионил-окси-фенилпиперидина гидрохлорида, заключающийся в титровании анализируемойпробы раствором хлорной кислоты в прсутствии кристаллического фиолетового 2 .Недостаток способа состоит в нкой чуствительности 4 мкг/мл),Цель изобретения - повышение чувствительности определения,Поставленная цель достигаетсятем, что в способе количественного определения 1,2,5-триметил-пропионил-окси-фенилпиперидина гидрохлорида, обрабатывают анализируемуюпробу раствором формальдегида в серной кислоте с последующим добавлениемк полученному раствору воды и флуориметрировании полученного раствора.Чувствительность реакции0,08 мкг/мл, что позволяет проводитьопределение препарата в лекарственныхформах и биологических жидкостях.Линейная зависимость между концентрацией промедола и интенсивностью флуоресценции прослеживается.от 0,08 до80 мкг на 1 мл. Максимум спектравозбуждения при 398 нм и 434 нм.П р и м е р 1. Определение промедола в 2-ном растворе,1 мл 2 раствора препарат з ампули переносят в колбу на 50 мл. Доводят дистиллированной водой до метки,перемешивают. К 1 мл полученного раствора осторожно приливают 9 мл 1 раствора формальдегида в концентрированнойсерной кислоте, тщательно перемешивают переворачиванием. К 1 мл данногораствора прибавляют 9 мл дистиллированной воды и замеряют интенсивностьфлуоресценции. Содержание промедоларассчитывается по калибровочному гра4 834467 Промедол Метрологические характеристики В 2 раство По калибровочно граФику, мкг/мл 0,021 Х = 0,0192 0,01, 019210 р 000847 ,0192+0, 00084 7 3,5 0,018 3,7 Таблица Навескатаблетокпромедола, г айдено промедола Метрологическиехарактеристики По калибровочному графику,мкг/мл з расчетаа однуаблетку,г 0,10 0,024,0225- 0,02325 фику, который строят следующим образом. К 1 мл стандартного водного раствора промедола с содержанием 500 мкг/млприливают 9 мл 1 раствора формальдегида в концентрированной сернойкислоте, тщательно перемешивают. Затем отмеривают 0,6, 0,7, 0,8, 0,9 и1,0 мл полученного раствора и добавП р и м е р 2. Определение промедола в таблетках 0,025 г.0,1 г (точная навеска) мелкоиэмельченных таблеток переносят в мерную колбу на 50 мл, прибавляют 30 мл дистиллированной воды и энергично встряхивают до полного растворения, Затем, доливают дистиллированной водой до метки и снова тщательно перемешивают, К 1 мл данного раствора прибавляют 9 мл 1-ного раствораформальдегида в концентрированной серной кислоте, перемешивают, К 1 мл полученного раствора прибавляют 9 млдистиллированнойводы и замеряют иншяют дистиллированную воду до 10 мл,Полученные растворы флуориметрируютпараллельно с растворами исследуемыхобразцов. По результатам этих измерений строят калибровочный график.Результаты флуориметрическогоопределения 2-ного раствора промедола представлены в табл. 1,Таблица 1 тенсивность флуоресценции. Содержание промедола определяют по стандартному раствору, для приготовлениякоторого к 1 мл стандартного водногораствора с содержанием препарата1000 мкг/мл прибавляют 9 мл 1-ногораствора формальдегида в концентрированной серной кислоте, перемеши вают. К 0,5 мл данного раствораприбавляют 9,5 мл дистиллированнойводы и флуориметрируют одновременнос растворами исследуемых образцов.Результаты Флуориметрического 0 определения промедола в таблеткахпо 0,025 г представлены в табл. 2,834467 Продолжение табл. 2 0,0230 0,0230 0,0230 0,0230 0,0225 0,0230 0,0235 0,0250 0,099 0,102 0,096 О,1 ОО 4,6 Ь =+ 0,00198 4,6 4,6 4,6 Ео +20001493 0,098 4,5 0,102 4,6 0,101 4,7 0,104 5,0 риметра. Флуориметрируют одновременно со стандартными образцами. Количество промедола в исследуемом образ це определяется по калибровочномуграфику для построения которого к1 мл стандартного водного растворапрепарата с концентрацией 1000 мкг/млприбавляют 9 мл 1-ного раствора З 5 формальдегида в концентрированнойсерной кислоте. К 0,1, 0,5 и 1,0 млданного раствора приливают соответственно 9,9, 9,5 и 9,0 мл дистиллиро,ванной воды. Стандартные образцы 4 О .флуориметрируют одновременно с исследуемыми растворами. Данные по определению промедолав сыворотке крови приведены в табл Таблица 3 П г 5,9, - 35,8 Ь =+3,7 7,7,5,Ьо,9+2, 6 Истйнно определ чины: А= 35 39,5 29,5 значениемой вели,5+2,33,5 42,35,П р и м е р 3. Определение промедола в сыворотке крови.5 мл исследуемой оксалатной крови помещают в центрифужную пробирку и центрифугируют в течение 30 мин при 8 тыс.об/мин. К 2 мл центрифугата в делительной воронке прибавляют 10 мл хлороформа и перемешивают в течение 20 мин.,Хлороформный слой отделяют в чашку для выпаривания.Экстрагирование повторяют. Хлороформ выпаривают на водяной бане при температуре не выше 90 ОС. К сухому остатку приливают 1 мл 1 раствора формальдегида в концентрированной серной кислоте, тщательно перемешивают, добавляют 9 мл дистиллированной воды и переносят в кювету флуоИстинное значение определяемой величины:А. = 0,02325+834467 10 Метрологическиехарактеристики 8,2 Х = 41,2 7,6 38,0 40,0 Ь = +1,797 8,0 8,4 42,0 Е =+1,284095 8,4 42,0 8,2 41,0 45,0 40,0 9,0 Истинное значениеопределяемой величины:А = 41,2+284 8,0 41,0 8,2 0,0 0,1 0 ена 5 ьной интент соотношеислоты и 0,001 0,005 П р и м е р 4. Определение промедола в моче.К 2 мл мочи в делительной воронке прибавляют 10 мл хлороформа и перемешивают в течение 10 мин. Экстрагирование повторяют. Хлороформный слой отделяют в Фарфоровую чашку для выпаривания. Выпаривают на водяной бане при 90 цС. К сухому остатку приливают 1 мл 1-ного раствора формальдегида в концентрированной серной кислоте,. тщательно перемешивают, добавляют 9 мл дистиллированной воды, Полученный раствор переносят в кювету флуориметра и флуориметрируют одновременно Количество промедола в мо По калибровоч- В 1 мл мочному графику, мкг/млмкг/мл 8,4 42,0Определение производилось на отечественном электронном флуориметре ЭФ-ЗМА с фильтрами Ви В. Спектры измерялись на флуоресцентном спектрофотометре "Хитачи" модель МРГА производства Японии.Концентрация раствора формальдегида в концентрированной серной кислоте, используемого для обработки анализируемой пробы, составляет от 0,001 до 0,3 г/мл. Оптимальными концентрациями являются от 0,01 до 0,1 г/мл. Фактически для определения,промедола использовалась концентрация формальдегида в концентрированной серной кислоте 0,01 г/мл.Зависимость интенсивности флуоресценции от коэффициента формальдегида в серной кислоте привед а в табл. 5 со стандартными образцами, Количество промедола в исследуемой пробе определяют по калибровочному графику, для построения которого к 1 мп стандартного водного раствора препарата с концентрацией 1000 мкг/мл прибавляют 9 мл 1-ного раствора формальдегида в концентрированной серной кислоте. К 0,1, 0,5 и 1,0 мл данного раствора приливают 9,9, 9,5 и 9,0 мл дистиллированной воды. Стандартные образцы флуориметрируют одновременно с исследуемыми растворами.Данные по определению промедола в моче отражены в табл. 4,Таблица 4 О При изучении оптимальных проведения флуоресцентной ре промепола с формальдегидом в кислоте выявлено влияние со ния объемов водной фазы (ста водный раствор промедола) и концентрированной серной кис Формальдегидом на интенсивно ресценции (табл. 6). Оптимал являются соотношения объемов О (раствор формальдегида в кон рованной серной кислоте: вод вор промедола),Зависимость относител сивности флуоресценции о 5 ния объемов фаз серной кусловий акциисерной отношендартный фазылоты ссть Флуоьными3:1центриный раст10 834467 Таблица 7 Таблица б 99:1 49:1 19:1 80 90 О 100 96 19 г 1 9:1 100 100 9:1 82 4:1 100 5 ф 1 15 31 78 100 4:1 2:1 58 98 Зф 1 45 2,5:1 20 Формула изобретения 63 2:1 58 1,511 25 Составитель Л. СоломенцеваТехред Н. Келушак Корректор О. Билак Редактор Е. Кинив 4 Заказ 4056/64 Тираж 907 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д, 4/5Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 водного раствора промедола приведенав табл. бСоотношение объемов ОтносительнаяПри исследовании оптимальных соотношений объема смеси промедола с Форм-у альдегидом в кислоте, приливаемого объема дистиллированной воды и получении Флуоресцирующего раствора выявлено, что оптимальными являются соотношения объемов не больше, чем 49:1 и не меньше, чем 9:1.В табл. 7 приведена зависимость относительной интенсивности Флуоресценции от разбавления водой анализируемой пробы,1Соотношение объемов Относительная (вода : кислота) интенсивностьфлуоресценции,% Способ количественного определения 1,2,5-триметил-пропионил-окси-фенилпиперидина гидрохлорида,о т л и ч а ю щ и й с я тем, что,с целью повышения чувствительностиопределения, анализируемую пробуобрабатывают раствором формальдегида в серной кислоте с последующимдобавлением к полученному растворуводы и флуориметрировании полученного раствора.Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1. Инструктивно-методические указания. Вып. 1. М., 1976, с. 45.2. Государственная фармакологияСССР. 10-е изд. М., 1968, с. 563