Способ получения гидрофильного анионообменного сорбента для разделения биополимеров

(УОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ ВИДЕТЕЛЬСТВ АВТОРСКО 9АН Эстонии и есс), Иржи Инджих Чоупек А.Конгас (ЯО)ы Тессек Лтд., Прага,и-ехсЬапде бег 1 чаФеэ тодгар Ьу, 1979, ч. 180,00(71) Институт химииЛТД Прага(56) Каталог фирмЧССР, 1988.О,Мйаав ет ао 1 Ярпегоп, 1. Спгоглр.77 в 3,Изобретение относйтся к новым анионообменникам для высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ), в частности к буферирующим гидрофильнцм анионообменникам, содержащим в качестве анионообменной группы различные алифатические аминогруппц, и может быть использовано для разделения белков и других биополимеров методами хроматогрофокусирования и ионообменной хроматографии.Целью изобретения является получение сорбента с повышенной разделяющей способностью по белкам в области рН 4-10.Для достижения цели в способе получения гидрофильного анионообменного сорбента для разделения биополимеров путем обработки макропористого сополимера 2- гидроксизтилметакрилата и этилендиметакрилата, содержащего эпоксидные группы, амином в качестве амина используют поли(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГИДРОФИЛЪНОГО АНИОНООБМЕННОГО СОРБЕНТА ДЛЯ РАЗДЕЛЕНИЯ БИОПОЛИМЕРОВ (57) Использование: жидкостная хроматография, разделение белков и других биополимеров, Сущность изобретения: получения гидрофильного анионообменного сорбента обработкой макропористого сопалимера 2- гидроксиэтилметакрилата и этилендиметилакрилата. Сополимер содержит эпоксидные группы, Обработку ведут полиэтиленполиамином. с числом аминогрупп 3 - 7 до достижения обменной емкости сорбента 0,25-5,0 мг-экв/г, 1 табл. 4 ил. этиленполиамин (ПЭПА) с числом аминогрупп, равным 3-7, а обработку осуществляют до достижения обменной емкости сорбента 0,25-5,0 мг-экв/г.Ниже приводятся примеры конкретного осуществления способа,П р и м е р 1, 10 г сополимера 2-гидроксиэтилметакрилата с этилендиметакрилатом, содержащего 1,04 м экв/г эпоксидных групп (Сепарон ХЕМА 1000 Е), суспендируют тщательно в 50 мл тетраэтиленпентамина (ТЭПА) и оставляют на 120 ч при 5 С, Смесь фильтруют через стеклянный фильтр и промывают водой, Затем продукт суспензируют в 100 мл 0,1 М растворе НОО и перемешивают во встряхивателе в течение 2 часов при 60 С для гидролиза возможных остаточных эпоксидных групп. Готовый анионообменник отфильтровывают на стеклянном фильтре и промцвают водой, 2 М йаС,водой, 0,5 М НС, 2 М ИэС 1, водой, 0,2 М чаОН, водой и этанолом, Затем высушивают при комнатной температуре, Ионообменная емкость 2,37 м экв/г.Кривая титрования приведена на фиг.1.П р и м е р 2. 10 г сополимера Сепарон ХЕМА 1000 Е, содержащего 1,04 м экв/г эпоксидных групп, перемешивают тщательно с 50 мл 27 ь-ным ТЭПА в воде и продолжают перемешивание во встряхивателе при 70 С в течение 3 ч. Анионообменник гидролизуют и промывают аналогично примеру 1, Ионообменная емкость 1,27 мэкв/г.П р и м е р ы 3, 4, Сорбент получают аналогично описанному в примере 1, но с использованием иных аминов; пентаэтиленгексамина(ПЭ ГА) и гексаэтиленгептаминг (ГЭГА),П р и м е р 5 - 7. Сорбент получают аналогично описанному в примере 2, но с использованием технического ПЭПА, триэтилентетрамина (ТЭТА),В таблице приведены сравнительные характеристики предлагаемых анионообменников и известного прототипа.Далее изобретение иллюстрируется примерами использования предлагаемых анионообменников.П р и м е р 8. Использование предлагаемого анионообменника для разделения смеси белков методом хроматофокусирования,Стеклянную хроматографическую колонку размерами 3 150 мм, заполняют анионообменником, приготовленным по примеру 2, фракция 20 мкм. Колонку соединяют с системой ЕРЫ при помощи тефлоновых и титановых соединений. Пользуются УФ-детектором при 280 нм, Анализируют образец белков экстракта Васоз Ьгенз (1 мг в 0,2 мл стартовом буфере). Анализ проводят при следующих условиях: стартовый буфер 50 мМ Тй 3/НС 1, рН 9,2, элюент РВ 96" (Фармация, Швеция). разбавленный водой до 1;10 и доведенный до рН 7,4 при помощи НО, скорость элюции 1 мл/мин, давление 30 атм.Хроматограмма приведена на фиг.2, П р и м е р 9, Использование предлагаемого анионообменника для разделения смеси белков методом ионообменной хроматографии,Хроматографическая система, колонка и образец по примеру 8. Условия анализа: стартовый буфер А = 50 мМ имидазол/НС 1, рН 7,3, буфер Б = 0,5 М йаС в буфере А, скорость элюции 1 мл/мин, давление 30 атм,Хроматограммэ приведена нэ фиг,З..Способ получения гидрофильного анионообменного сорбента для разделения биополимеров путем обработки макропористого сополимера 2-гидроксиэтилметакрилата и этилендиметилакрилата, содержащего эпоксидные группы, амином, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью получения сорбентов с повышенной разделяющей способностью по белкам в области рН 4 - 10, в качестве амина используют полиэтиленполиамин с числом аминогрупп, равным 3 - 7, и обработку осуществляют до достижения обменной емкости сорбента 0,25-5,0 мг-экв/г. П р и м е р 10, Использование предлагаемого анионообменника для разделениясмеси белков методом ионообменной хроматографии,5 Хроматографическая система и колонкапо примеру 8, Анализируют образец белковэкстракта дрожжей (2 мг в 0,2 мл стартовомбуфере), Условия анализа: стартовый буферА = 50 мМ СНзСООН/ИаОН, рН 4,8, буфер10 Б=1 М МаС в буфере А, скорость элюции 0,5мл/мин, давление 12 атм.Хроматограммэ приведена на фиг.4.Как Следует из данных таблицы и фиг,1,предлагаемые анионообменники имеют ли 15 нейную кривую титрования в области рН4-10, т,е, они имеют буферирующую способность в этой рН области, в то время каксорбент по известному способу имеют буферирующую способность только в области р Н20 8 - 11.Ввиду того, что изоэлектрические точки большинства белков и других биополимеров находятся в также в области рН4-10, могут предлагаемые новые анионообменники найти широкое применениедля аналитического и препаративного разделения этих биполимеров методом хроматофокусирования. Использование жеизвестного сорбента в хроматофокусирова 30 нии ограничено, так как редко существуютсмеси белков и других биополимеров, изоэлектрические точки которых находятсятолько в области рН 8-11.Что касается обычной ионообменной35 хроматографии, то новая анионообменнаягруппа по сравнению с прототипом позволяет дать другую селективность и также использовать неожиданные для методаионообменной хроматографии буферные40 растворы и области рН (пример 10, фиг,4).Таким образом новый анионообменник расширяет круг аналогичных материалов дляионообменной хроматографии.1816767 5 О 8 реия,апцн,Составитель В. Мкртычанедэктор Г, Бельская Техред М. Моргентал Корректор С, Лисин оизводстве о-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул,Гагарина, 101 Заказ 1707 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб 45