Штамм бактерий bacillus меgатеriuм для получения препарата, улучшающего фосфорное питание растений

института ВН 11 Игенетика, коллекцион ный номер ВК 1 Р 1-3-4440,Штамм имеет следующую характерис-.тику.Морфологические и культуральныепризнаки,Цитология: грамположительные палочки 1,5-1,7 х 3-5 мкм, одиночные илипопарно сцепленные, реже цепочки из3-4 клеток (24-часовая культурана мясосусло-агаре): эксцентральнорасположенная опора (четырехсуточная культура на мясосусло-агаре).Мясосусло-агар. Колонии на мясосусло-агаре на 2/3 сут. роста гладкие,бело-креовье, вьпуклые, жирноблестягие, края ровные, профиль выпуклый, косиетенця маслянистая, диаметр колоний 3-8 мм. При вьращивании 20на этой среде колонии штамма приобретают кремово-коричневый цвет на 810-е сутки, Рост по штриху на мясосусло-агаре ровьп, хороший, В жидкойсреде (7 - суточная культура в мясопептонном бульоне) образуется рыхлый осадок, после взбалтывания которого наблюдается равномерное помутнение среды.Мясожелтоньй агар. На 2-3-м суткироста колонии гладкие, блестящие, белые, выпуклые. Края колоний ровные,профиль слегка выпуклый, консистенциявязко-маслянистая, диаметр колоний3-6 мм. Ранномерно эмульгируется в35воде,Глюкозоаспарагиновый агар. Составсреды, г/л: глюкоза 10; аспарагин1,0; К, ВО 4 0,2; МВНО,7 Н О 0,2;агар-агар 20,1); вода водопроводнаядо 1,0 л. Колонии штамма на 4-5 - есутки роста округлые, размер 2-5 мм,блестяе, белого цвета, поверхностьгпадкая, профиль слегка выпуклый, краяколонии ровные, консистенция тестообраэная, Равномерно эмульгируетсяв воде. рН оптимум роста заявляемого штамма 6,60-6,75.физиологические и биохимическиепризнаки,Аэроб. Обладает каталазной активностью. Использует углерод глюкозы,мальтозы, сахароэы, маннита, сорбитаи рафинозы с образованием кислот.При использовании лактоэы рН средыне меняется. Гидролизует крахмал,Разжижает желатину. Пентониэируетлакмусовое молоко, Развивается намясопелтонном бульоне в присутствии 2,5- и 6,5/-ного хлористого натрия,Не растет на безазотистой среде Эшби,Не образует ацетилметилкарбинола, сероводорода. Не восстанавливает нитраты.В лабораторных условиях развивается в диапазоне температур 18-43 С.оОптимум 26-29 С.Маркерные признаки штамма,Проведены исследования и определены спектры естественной устойчивостиштамма к некоторым антибиотикам пометоду ВгонГе 1.Результаты исследований приведены в табл.1.Условия хранения штамма.Штамм хранится и поддерживаетсяметодом периодических пересевов (нереже 1 раза в полгода) на мясосуслоагаре. Последний состоит из смеси равных объемов мясопептонного бульонаи 4-5 11 сусла с 2/ агар- агара.Средустерилизуют при 3/4 ати 20 мин,Признаки штамма устойчивы, Штаммнепатогенен для теплокровных животных.П р и м е р 1. Использованиештамма для получения препарата, улучшающего фосфорное питание растений.Готовят посевной материал, длячего выращивают штамм на скошенноммясосусло-агаре в течение 24 ч.Затем 1 мл водной суспензии микробной культуры засевают колбы сглюкозоаспарагиновой средой, содержащей осажденный фосфат железа,Состав среды, г/л: глюкоза 10;аспарагин 1,0; КВО, 0,2; МАЗО хх 7 Н О 0,2,Перед стерилизаций, среду разливают по 100 мл в конические колбыобъемом 250 ип, Стерилизация: 0,5 атм,20 мин, Для получения осажденногофосфата железа навески солей;3040 мгИаРО2 Н О и 2164 кг РеС 1 6 Н Орастворяют в 25 мп стерильной дистиллированной воды, стерилизуют в фильтре Зейтца и после этого сливают водну колбу. Образовавшийся высокодисперсньй препарат фосфата железа вносят по 5 ил на1) мл стерильной глюкоэоаспарагиновой среды.Готовая глюкозоаспарагиновая среда содержит 496 мг фосфора в 1000 мп;рН 6,9.Условия культивирования: глубинное выращивание Вас.шеРасегнпч АР на качалке (220 об/мин) н течение10-25 сут при 24-26 С.164 52666разцах почвы 14,6 мг/100 г, или 43,3/ от сумин минеральньгх фосфатов.Данные по урожаи редиса и морковив вегетациоццом опыте с. предлагаемым штаммом Вас.чеяасег 1 цтч АРприведены в табл.4. качестве восстановителя.Исходный титр культуры, рдстворяи(ей фосфат железа 1,6410 клеток/мл6Количество фосЛрд, переведенного штаммом из фосфдтд жечезд вы ц(слякт пл разности между его сдержанием в опытном и контрольном (стерильном) вариантах.1 езультати исследований приведены в табл,2,Данные табл.2 показывают возможность трансфоралии РО предцдгаемнм штаммом Вас.гчеддге 1 гч ЛРитруднорас гворимьм фс фатов же:(еза, свойственных дерново-подзолстим почвам.Ироведени сравцител; цые исс.гедования пл раствсрецик фосфатов железа в глксозс дспдрдгицовлг среде различными микрллрганизг(дми, в ьгс;(ецКак видно из табл,З, прецлагасмьйштамм пл признакам утилизации с 1 п сфд 35 40 45 50 опытах на ряде овогцьх кульгур.П р и м е р 2. Возможность улучшения фосфорного питания растений и повышения урожая путем испо ьзования счлссчатрастворяю(е культуры Вдс.гчердсег 1 сч АРпроверя 1 т в вегетдционном опыте ца ряде овощных культур, так как известно, что фосфорное питание овощных ускоряет развитие растений, образование органов плодоношения, сокращает период созревания.гредпосевнук бдктеризацик семян редиса сорта ультра и моркови сорта Нантская проводят цегсредст ццо во время посева их в били тр . Агрохимическая характеристика почвы биометра: рН ,. 7,05; содержание азота: обг(его О,ОЯИ, аммиачного 12,6 и цитратцлл 7,1 и /кг; а.с.в, Р О 17, кг/100 г почвы, Удобрения в почву це вносят. Нд рузкд микробной культуры сстаница для редиса10 , для моркови -10 клеглк/себмя. Сод ржанцс. фосфатов же 1 е. д в об 55 Содержание Г О. в фугате культурдльцой идклсти лпределянт колори - метрически с использованием молибденовой сици и двухлористого олова в ними из озерннх сдпропелей.Получецнь(е данные приведены втабл.З. тов из труднорастворимых сс;единений железа превосходит другие известные микроорганизмы,Примеры использовдцця гостученнойглубинной культуры в вегетацпоццых 10 15 20 25 30 Как показиваит даццие тябгг,4, бактеризация обеспечивает г(лступность Р О для растений (моркови и редиса) и говынает урожайность этих культур,П р и м е р 3. Семена огурцов сортов )елрусские и Млцст(рские перед посевом замдчг(вд(от в суспензии клеток Вдс, гчебдгег.сгч ЛР(смыв с косяка трехе)тлчцлц культури дате Висл вд кт в бч л"ет(з . Пл ва билметра имеет сгсц;эщуд д ров хиИческуи характеристику: РН кд 5,55; содержание азота; лб(;ргл 0,16аммидчногс 1 15.0 ц нитрдтного 8,3 мг/кг; дв, Р,О,. 1(:,9 мг/ /100 г почвы, УГ(обрегц ц г;лч у бцометра не внося. Слцерж; цие фосфатов жслеза в образцах почв 16,0 мг/10 г, чт сстдвляет 46 6 Я от суммы мгердльньгх фс сфдтлц,,Пдцные о вияни прс; цсевц гл здмачивация семян огурц в в с пензии Вдс.чс Васег 1 гч ЛРцд урожай в вегетдционцом опыте приве;(с .ь в табл. 5) . Ддццые табл.5 покдэьвдьт увс.гцчецие урожаиности огурцов цридктеризации семян ца 13-21 И.П р и и е р 4, В лрсизводс гвеццых условиях определено влнягцсе предп- севнои оработки семян кормовой свеклы сорта Эккендорсзскдг жидкой культурой Вас, е 8 ас егог АР. Почва торфяно-болотная. Агрлхигические и- каздтели опытного учдсткд: РН )сс 5,47; содержание азота: лбщег л 2,0 Х, аммиачного 30 и нитрдтцлго 334 мг/ /1000 г;а.с.в. Р О 5. 11)О мг/100 г почвы. Содержание труднорастворимых фосфатов железа в пробах псчвн 21,7 мг/100 г,что составляет 57,81 от суммы минерал.цьх фосфатов.Результаты производственных испытаний приведены в табл.6. Таким образом, использование вггдмма Васх 11 из (чеяасег 1 сгч ЛРпо сравнении с известными дает сл )уюг(е греимугества; возможнось трансформации РО из труднордствлрггмьос Фосфатов железа, свойственных дерцо1645266 Антибиотики Устойчивость нтаммапри концентрацииантибиотика, /мл 1 О СтрептомицинсульфатАмпициллин, натриевая сольПолимиксин В сульфаттетрациклин хлорид 114,8 15 283,3Высокая чувствительность приконцентрации до 5,0/мл Таблица 2 Показатели Время культивирования,сут 10 15 25 СодержаниеР О мобилиэо цнной птаммом,мг/100 ипТитры куль 13, 7+2, 27 21,83, 18 44,62, 12 т уры,клеток/млрН 7,14 10 2,85,10 4,45 4,20 6,84 10 4,43Продолжение табл. 3 Таблица 3 Г40 икрооргани ямы 1 Вас.везеп- геггсцз Вас. вер 1 ег 1 цшВас. веяасег 1 цщВас, ведагеггщч АР14, 2 АР1 Ьф 1 АР44,6 Асгпспгусез 6,4 Рзецдогоп:.ззРР,РзецйовопаззРР Зв 6 502,8 4 В во-подзолистым почвам; возможность растворять РеРО в течение продолжительного времени, что позволяет поднять временнуи границу растворения этого соединения биологическим путем и обеспечения доступности Р О овощным культурам в ранние стадии онтогенеза.Бактериальньп препарат на основе штамма бактерий Вас.ле 8 агег 1 цв АРулучнает ЬосАорное питание растений, повьппает усвояемость АосАора, фиксированного почвой, и повьппает урожайность овощных культур: формула и э обретения Итамм бактерий Вас 111 цз не Рагег 1 цв ВКИИ Вдля получения препарата, улучпаищего фосфорное пита ние растений. Таблица 1 Естественная устойчивость втамма Вас 111 цз ге 8 асег 1 цв АРк антибиотикам1645266 10Т а бл и ц а 4 Средний вес одногокорнеплода, г Вариант 7, от контр оля Редис сорта Ультра0,88 100 63,7 16,4 63,7 3,18 Контр ол ьБактериза 3,51 19,6 1,19 225 142,9 7, 14 Морковь сорта Нантская0,80 100 320,5 16,0 14,4 КонтрольБактериза 407,6 20,0 19,4 1,25 0,95 133 Таблица 5 Вариант Огурцы 14 100 80,511,37 2174 100 15,9 Бактериза 86 5+., 73 2508 113 9 7 4+1 58 3800 121 17,5 Таблица 6Г Вариант Урожайц/га Прибавка ц/га Х 440 774 334+76 Составитель С,ТюринРедактор Л.Веселовская Техред Л.Сердюкова Корректор т Палий Заказ 1320 Тираж 301 Подпис ноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г.Ужгород, ул. Гагарина,10 цияВас. герагегцч цияВас. гераСегдщч ция,Вас. ге 8 асег 1 ач КонтрольБактеризацияВас. г 1 еВагег 113 г 3 Среднийурожай,г/м СодержаниеРО,мг/100 гпочвы