Способ изготовления диагностического средства для определения лактатдегидрогеназы в биологических жидкостях

СОЮЗ СОВЕТО 4 9 (П 49012 А РЕСПУБ 4 С 32 С О 1 Я 33 4 ОМИТЕТ СССР И ОТНРЫТЮ ГОСУДЮфСТВЕННпп ил ц ашещщ ОПИСАН ПАТЕНТУ(54) СПОСОБ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ДИАГНЧЕСКОГО СРЕДСТВА ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЛАК"ТАТДЕГИДРОГЕНАЗЫ В БИОЛОГИЧЕСКИХ ЗИДКОСТЯХ(57) Изобретение относится к медицине, точнее к способам получения средства для обнаружения повышенной концентрации лактатдегндрогеназы. Цель изобретения - повышение диагностической точности средства, Для этого готовят водный р-р из следующих компонентов, мг: п-нитроблаунитроэолийхлорид (0,490), гидрохлорид триэтаноламина 49,00, ацетат натрия 18,500, ИАО(аденозин 5-тригидродифосфатс 5 -(5 -эфир с гидроокисью 3-)аминокарбонил (-1-р-рибофураноэил-пири- дина, внутренняя соль) 2, фенацинметасульфат 0,049, вода очищенная 1948,961. Добавляя 3 н.НС 1 устанавливают рН р-ра равной 3, смесь нано-сят на гигиенический тампон, находя-щнйся в оболочке иэ сополимера винкпхлорида и поливинкпиденхпорида. 2 з.п. ф-лы, 2 табл,20 2,000 0,049 1948,961 2019000 30 створ приме За кислоБелки олянои4,9 нимере 1.диагноПриродный добавлением 3 н,станавливают РНкак описано в пнное таким образотво дает та м Драл Синтетический лиакрилоа Ри П ое средс ельный э ои ж Най Полиа Синтетический ло Изобретение относится к медицине,в частности к способам получениясредства для обнаружения повышеннойконцентрации лактатдегидрогеназы.Цель изобретения - йовышение диагностической точности средства,П р и м е р 1. Готовят водный раствор из укаэанных ниже компонентов.Указанные количества наносят соответственно на тампон,Состав раствора следующий, мг:п-Нитробляунитрозолийхпорид 0,490Гидрохпорид триэтаноламина 49,000Натрий ацетат 18,500ЯАО(аденоэин5 -тригидродифосфат) 5-(5-эфир с гидрокисью 3-)аминокарбонил(-1-р 0-рибофуранозиппиридина, внутренняя соль)ФенацинметасульфатВода очищенная Соответствует 2,00 мл.Добавлением 3 н,соляной кислоты устанавливают РНи затем в количестве 2,00 мп смесь наносят на обычный гигиенический тампон, котоРый на ходится в упаковочной коробочке с внутренним покрытием из химически инерционной пленки, состоящей из сополимера винилхлорида и поливинилиденхпорида, Эта оболочка в свою оче редь находится в алюминиевой трубочке. Всю систему высушивают при замораживании. Непосредственно после этогоалюминиевую трубочку закрывают в вакууме резиновой пробкой. Алюминиевуютрубочку открывают лишь непосредственно перед применением содержащегося в ней диагностического средства,которое вынимают,Пример 2,иэ компонен 50 Готовят водный ратов, укаэанных в Диагностическое средство предназначено для распознавания патологических состояний организма путем выявления с его помощью повышенных концентраций лактатдегидрогеназы во внеклеточных жидкостях. Так могут быть установлены раковые заболевания женских органов, а также могут быть определены инфекции, взыванные бактериями, паразитами, грибами. При серий" ных исследованиях с гистологически определенными карциномами в генитальной области на стадиях 1 и Ч только 107 диагнозов оказались неправильными,Средство в виде тампона, применяе" мое для исследования внутри тела, например во влагалище, не вызывает раздражения слизистой оболочки, прн этом перехода красителя на слизистую и другие ткани не происходит и не вызывает побочных реакций внутри и на теле исследуемого пациента.В отсутствии носителя полярными группами окрашивания смеси не происходит. Исследованию могут подвергаться: влагалищный секрет, сыворотка крови, желудочный и кишечный сок, желчь, выделения бронхов, простаты, уретры.В качестве субстрата в средстве предпочтителен лактат натрия, но может использоваться лактат калия или кальция,В качестве буферной системы используют триэтаноламингидрохлорид илиэквивалентную смесь триэтаноламинан соляной кислоты.В качестве красителя используютсоли тетразолия, бензидиновые красители, индофенолы,Соединением, передающим водород,могут быть фенозинметасульфат,диафоразен, менадион, мелдола-блау.Опытные данные об испытаниях различных носителей приведены в табл. 1.Таблица 112 1 1 Полиноэик Целлапоза,модифицированнаяПолиакрил,модифицированныйПолиэфир Регенерат5 Дунова Синтетический 10 Синтетичес- кий Диод ен шерсти - кератин: 49,000 18,500 2,000 0,049 1948,961 Носитель 5-8 Белок (шерсть) Темносиняя 3 14490Продолжение табл. 1 Носители имели следующие химическиестроения. 15Персть: полипептид иэ различныхаминокислотГлавная составная часть Н Н1МН - С - СО - МН - С - СО -В 1 2 75Полиакрилонитрил - полимерное волокноследующей структуры:- СН - СН- СН - СН - СН -2 22СХ СМ30 Полиамид 6,6 (найлон): поликонденсат со структурой амида кислоты (белковая связь) из гексаметилендиамина и адапиновой кислоты следующей 35 структуры:1-нн-(сн,)-мн- с - сн,) - с -26 20 О Регенерат целлюлозы. Различие в вискозных волокнах лежит лишь в гистологическом строении волокон, Функциональными группами являются гидвоксильные, ацетальные, альдегидные и кар боксильные группы.Полиакрилонитрил (дунова): различие для обычных полиакриловых волокон (дралона) лежит в строении волокна. функциональными группами являются та кие группы, как в случае полиакрилонитрила. Полиэфиры - поликонденсатныеволокна с сложноэфирными группами дикарбоновых кислот и двувалентныхспиртов, и соответствуют, например,следлощей структуре:-О-СН;И, - О-СИ0 0Используемые волокнистые носителиэкстрагировали в течение 1 О мин прио35 С метиленхлоридом.Из экстрагированных волокон приблизительно одинаковые количества помещали в реакционный сосуд и смешивали с 1 мл индикаторного раствораследующего состава, мг:и-Нитроблаутетразолийхлорид 0,490ГидрохлоридтриэтаноламинаАцетат натрияИАО(аденозин 5дигидрофосфат)5- (5 -эфир с 3-)аминокарбонил(1-ррибофуранознл-пиридинийгидроксидом,внутренняя соль)ФенацинметасульфатВода очищенная 2019,000Соответствует 2,00 мл.Раствор, добавлением 3 н, соляной кислоты, устанавливают на значении рН 4,4-4,6. Пробы носителей, приготовленные с полученным индикаторным раствором, вымораживали в течение 2 ч в морозильном шкафу и затем высушивали вымораживанием в течение 17 ч. Затем в заключение в результате добавления соответственно 1 мп 1 М раствора аскорбата натрия проводили реакцию, протекающую как при применении средства в соответствии с изобретением в случае положительного диагноза (образование красителя).Результаты приведены в табл. 2.Таблица 2(дралон) увеличивается. Слегка синий Прозрачная 4 Полиамид Ь,Ь(найлон)В табл. 2 в графе "смачивание"указаны цифровые значения, которыедают ступень смачиваемости носителяиндикаторным раствором при визуальнойоценке. Шкала оценки принята от 1(очень хорошо) до 5 (недостаточно). Для определения "прочности окраски" или степени фиксирования образующегося на волокне красителя (диформазана) на соответствующем носите ле испытывали окрашенные пробы следующим образом:а) пробы промывали в моющей ван" не при соотношении 1:40, т.е. 1 го носителя в 40 мп жидкости, при 20 С 35 в течение 5 мин, После этого визуально оценивали соответствующее помутнение или окрашивание воды;б) пробы были промыты метиленхлоридом или хлороформом, окрашиваниерастворителя также оценивали визуально.Результаты, полученные в пунктах а и б, даны дополнительно в табл.3.Таблица 345 Носитель Вода 50 Белок (шерсть)Прозрач- Слегка синийная 2 2 Проэрач- Слегка синийная 3 1-2 Продолжение табл.2Г 1 Прознач- Слегка синий ная 1 1-2 Проэрач. Слегка синийная 3 3-4 При применении хлороформа в качестве растворителя в основном получают такие же результаты, как в случае метиленхлорида.Как видно из табл. 3, краситель диформаэан глубоко фиксируется на волокнах. В то время, как при обработке водой смывается лишь незафиксированный диформазан, метиленхпоридом или хлороформом он частично растворяется. В результате этого следует также подкрашивание органического растворителя,В табл, 3 в графах "вода" и "метиленхлорид" указаны цифровые значения, которые соответствуют количеству незафиксированного красителя (в случае воды смываемого с волокна красителя, в случае органического растворителя красителя, перешедшего в раствор). С увеличением числовых значений количество смываемого или растворенного красителя Во всех случаях испытаний прочности окраски носитель имел темно- синее окрашнпацце, т.е. краситель144901 2 был резвычайно прочно зафиксирован на носителеКак видно из результатов опытов, все исследованные носители пригодны для применения средства в соответствии с изобретением. 20 Составитель А. АгуреевТехред Л.Олийнык Корректор Л, Пилипенко Редактор А. Долинич Заказ 6856/58 Тираж 520 ПодписноеВНЩПИ Государственного комитета по Изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 формула изобретения0 1. Сппособ изготовления диагностичес. кого средства для определения лактатдегидрогенаэы в биологических жидкостях, включающий растворение окислительно-восстановительного красите 15 ,ля, буферной системы, никотинамидаденин-динуклеотида, соединения передающего водород, и лактата, коррекцию рН полученной смеси, нанесения этой смеси на носитель, связывающий окислительно-восстановительный краситель, о т л и ч а ю щ и Я с я тем, что, с целью повышения диагностической точйости средства, используют носитель, имеющий полярные группы, а рН смеси корректируют в диапазоне 3,0-4,9.2. Способ по и. 1, о т л и ч аю щ и й с я тем, что в качестве носителя используют целлвлозные волокна.3. Способ по пп. 1 и 2, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что буферную систему используют в виде триэтаноламингидрохлорида или в форме нестехиометрической смеси иэ триэтаноламина и хлористого водорода.