Способ приготовления плотной питательной среды для выращивания микроорганизмов

(5 р С 12 Б 1/00 И ИЯ ПЛОТЫРАЩИГОСУДАРСТ 8 ЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ ОПИСАНИЕ ИЭК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛ(71) Институт микробиологии АН Си Ордена Ленина институт элементоорганических соединенийим, А.Н.Несмеянова(56) 1. Авторское свидетельство ССВ 659619, кл. С 12 Н 1/20, 1977.2. Авторское свидетельство СССРВ 514893, кл. С 12 М 1/00,. 1975. 54) (57) СПОСОБ ПРИГОТООЙ ПИТАТЕЛЬНОЙ СРЕДЫ ДЛЯ ВАНИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ, предусматривающий внесение в жидкий питательный субстрат, содержащий источники углерода, азота, фосфора, минеральные соли и микроэлементы, в качестве уплотнителя поливиниловогоспирта с последующей стерилизациейполученной среды, о т л и ч а ющ и й с я тем, что, с целью улучшения роста микроорганизмов за счетповышения степени доступности водыв питательной среде и удешевленияпроцесса, после стерилизации полученную питательную среду замораживают при температуре от (-5) до (-196)Св течение 0,5-24 ч,. а перед выращиванием микроорганизмов проводятее. оттаивание, при этом поливиниловый спирт используют в количестве 4-153.Изобретение относится к обшей,технической и медицинской микробиологии, касается получения плотныхпитательных сред для выращиваниямикроорганизмов различных систематических и физиологических групп и можетбыть использовано как в практикенаучно-исследовательских микробиологических лабораторий, так и в производственных условиях.Цель изобретения - улучшениероста микроорганизмов за счет повышения степени доступности воды в пи.тательной.среде.В качестве уплотнителя средыиспользуют гидрогель поливинилового спирта, образующийся путемзамораживания исходного растворапри температуре (-5) " (-196) С вотечение 0,5-24 ч и последующего от.таивания при соотношении компонентов в исходном растворе,7:ПитательныйФсубстрат(источникиуглербда,азота,минеральные соли,микроэлементы) 0,5-6Поливиниловыйспирт (ПВС) 4-15Вода ОстальноеПри замораживании водных растворов ПВС происходит процесс криоструктурирования с образованием трехмерного каркаса гидрогеля, рольсшивок в котором выполняют участкис повышенной концентрацией водородных связей. Замораживание необходимо для ускорения процесса гелеобразования, поскольку водные растворы ПВС самопроизвольно при обычных условиях желируют крайне медленно (до 1 мес,) .Выбор параметров криоструктурирования при получениипредлагаемыхплотных питательных сред обусловленследующим,Концентрация ПВС ниже 47 приводитк образованию гелей с низкими физико-механическими характеристикамии синерезису влаги, а .концентрация.выше 153 нецелесообразна из-за большого расхода ПВС и высокой вязкостиисходных растворов, затрудняющейоперации перемешивания и разливажидкой питательной среды.5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Концентрация питательных субстратов - органических и минеральных веществ, находится в пределах, используемых для приготовления плотных питательных сред, на которых культивируются микроорганизмы.При температуре криоструктурироования вьше -5 С часто наблюдаются эф. фекты переохлаждения растворов, а это не приводит к гелеобразованию," использование температур ниже -196 С (жидкий азот) нецелесообразно по экономическим соображениям.Время криоструктурирования определяется как концентрацией компонентов исходного раствора, так и тем. пературой замораживания.Для формирования плотных питательнык сред согласно предлагаемому способу требуются промежутки времени от 0,5 до 24 ч. Плотные питательные среды для выращивания микроорганизмов готовят и используют следующим образом.Растворяют в воде питательнрй субстрат и уплотнитель (нетоксичный ПВС), полученный раствор (если необходимо) фильтруют через пористый фильтр и стерилизуют актоклавированием в стандартных условиях, затем разливают в посуду для культивйрования микроорганизмов (чашки Петри, пробирки, колбы, микроскопические камеры и др,) н замораживают в течение определенного времени. После оттаивания (обычно при комнатной температуре) полученные плотные питательные среды засевают известным способом (шпателем, иглой, пипеткой, в потоке зараженного воэдуха н др.) и инкубируют требуемое время в условиях, необходимых для культивирования конкретных микроорганизмов,Рост микроорганизмов различных систематических групп на плотных питательных средах, приготовленных согласно предлагаемому способу, дан в табл. 1, тот же показатель в сравнении с баэовьм (агаровые среды) и известным (пленки ПВС) способами приведен в табл. 2.Таким образом, предлагаемый способ по сравнению с известным позволяет улучшить рост микроорганизмов на плотной питательной среде (табл. 2) и расширить спектр применения среды (воэможность выращивания термофильтных микроорганизмов).1213069 Таблица Пита- тельХарактер роста и морфоло.гия колоний Температура инкубацнипосевов,Микроорганизмы ТемпеКонратуразамоцентрацияПВС в наясреда по сравнению с агаризованнымисредами Р аживания растворе, Х сред, оСВас 111 цв ро 1 ушуха Идентичны 28 4,0 -5 2410,0 -10 18 А 28 28 А 12,0 -15 18 28 А БйгерСовусев вйгерйошуслп 8 0 -20 3 28 10 0 -15 18 А Комплекс аэробныхпочвенных микроорганизмов 28 Б,В 10,0 - 15 18 Комплекс анаэробныхмикроорганизмов иэила 70 Аврегр.11 цв п 18 ег 28 А,Г 10,0 -15 18 П Р и м е ч а н и е. СРеда А 1 Х: МН 4 С 1 0,033, ИяС 1 2 НО 0,0330 161 СаС 1 6 НфО 0 033 КН Р 04 О 033,КС 1 0,033, пептон 0,5, микроэлементы - по Пфеннигу (11). РН 7,2, Среда БСреда А с добавлением восста.новителя (Ма 8 9 Н О 0,057) и резазурина (010017).Среда В: Среда Пфеннига (11) для сульфатвосстанавливаюших бактерий. Среда Г Сусло йо известному способу Я . Таблица 2 ТемпеВремязамора- живаПита- Культура микроорганизмов ратуразамотельныйсубстрат Название Таксономическая группа ражива- ния, ния, чС на крио- на плен.геле ПВС ке ПВС Спорообразую- Идентичен Нет росщая Гр(+)-бакта терия 24 Вас 11 цв ро 1 утпуха А 10 18 Концентрацияя ,ПВС в исходном растворе,Х Время струк- турирования,ч 15,0 -196 0,5 Васд 11 цв сегецв Характер роста и морфология колоний по сравнению с агариэованными средами.1Продолжение табл.2 1 Характер роста и морфология колоний по сравнению с агариэованными средами Культура микроорганизмов ВремяэаморазиваПитаТемпетельныйсубстрат Название Таксономическая группа ния,чна крио- на пленгеле ПВС ке ПВС Еди ничные ко0,5 А,Д Вас 111 цв Спорообразуюсегецвщая Гр(+)-бак- терия лонииР-формы 18 А,Д Нет рос.та НСгерову- Актнномицетсев втерй овус п 3.-15 18 Б,В Комплекс анаэробных микроорга"- низмов из ила Единичные колонии 10 А,Г Авреге 111 цв Плесневый Идентичен Слабый аНег гриб рост-20 ЯассЬагавусевсегечДрожжи Количествоколоний веае Концентрация ПВС в исходномрастворе, Х. ратура эамо- разиваиия,С А,Д Комплекс почвенных аэробныхмикроорганизмов ЕвсЬегхсМа Гр(-)-энтеросо 13.бактерия БЬ 18 е 11 а Гр(-) -энтероК 1 ехпег 1 бактерия идентично,размеруменьшен1213069 Продолжение табл.26 Культура микроорганизмов ВремязаморазиваТемпеТаксономическая группа Название ния,чна крио- на пле геле ПВС ке ПВС Вась 11 цз ро 1 ушуха 2 10 Нет роста Средаполужидкая,колон ут елеобраэование не происходит 5 12 и м е ч а н и е, Среда Д: мясо -пептонный бульон по известному с собу 1 . Среда Е: состав питательного субстрата 1 и минеральных солей как для среды Хоттинира. 3Составитель В. ГолимбеРедактор Н. Яцола Техред Т.Тулик Корректор Т. Ко 7 Тираж 4901 И Государственного комитета СССРелам изобретений и открытийМосква Ж, Раушская наб., д. 4 Подпнс иал П 11 П "Патент", г. Ужгоро ул. Проек КонцентрацияПВС висходномраст- .воре,ратура замо- разивания,С аз 752/3ВНИИпо113035,Питательнъзйсубстрат Характер роста и морфология колоний по сравнению с агаризованными средами Уменьшенныеразмерколонии