Способ определения активности гемосенситинов

СОЮЗ СОВЕТСНИХцалдпеииипРЕСПУБЛИК 0% 011 ЗШ А 61 В 10/00 Г .Вл ИЗОБРЕТЕН ПИС ТВУ АВТОРСН ательи инфе шевско оцитарцина" ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИй ьв ЮицПвъс,ные диагностикумы", М., "Мед 1976, 14-74,(54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ ГЕМОСЕНСИТИНОВ одинаковой специфичности, включающий измерение антителосвя-.эывающей или антигенсвязывающей активности сенситина, сенсибилизацию эритроцитов и расчет начальной скорости сенсибилиэации, о т л и ч а ю щ и й" с я тем, что, с целью повышения точности способа, сенсибилизацию эритроцитов осуществляют равноэффективными по связыванию дозами сенситина.Изобретение относится к биологиии медицине, а именно к приготовлениюиммунодиагностических препаратов,Известен способ определения активности гемосенситинов одинаковой5специфичности, по величине оптимальной гемосенситивности дозы препарата,или по величине максимального литрареакции пассивной гемаглотинации-РПГА 11,10Однако, известный способ недостаточно точен, поскольку препаратысенситина обладают неодинаковойспособностью связывать гамеглютинирующий элемент (антитело или антиген) .Известен также способ определенияактивности гемосенситинов одинаковойспецифичности, включающий измеренияантителосвязывающей активности сенситина, сенстабилизацию эритроцитови расчет печальной скорости сенсибилизации 2,Однако этот способ также недостаточно точен, поскольку по оценке 25сказывается неодинаковая способностьразличных препаратов сенситина однойспецифичности связывать гемсанлютипирующий агент, которая не имеет отношения к собственно гемсенситивнойактивности.Целью изобретения является повышение точности способа";Указанная цель достигается тем, что согласно способу определения активности гемосенситинов одинаковой специфичности, включающему измерение антителосвязывающей или антигенсвязы,вающей активности сенситина, сенсибилизацию эритроцитов и расчет начальной 40 скорости сенсибилизации,сенсибилизацию эритроцитов осуществляют равноэффективными по связыванию дозами сенситинав Способ осуществляется следующим 45 образом.Любым количественным методом (например, при помощи реакций нейтрализации или торможения пассивной гемагглютинации) измеряют антитело связывающую активность антигена - сенситина или антигенсвязывающую активность антител-сенситина. Сравниваемые препараты сенситина разводят до равноэффективной по связыванию антител (или антигена) концентрации. После этого эритроциты сенсибилизируют кажцый из сравниваемых препаратов, взятым в равноэффективной по связыванию гемагглютинирующего агента концентрации, в течение различного времени при прочих (температура, рН среды и т.п.) одинаковых условиях, Сенснбилизированные эритроциты отмывают при центрифугировании забуференным (рН 7,0-7,2) 0,857-ным раствором хлористого натрия (при необходимости - со стабилизатором) и определяют уровень их сенсибилизации - титр РПГА при использовании одного и того же препарата гемагглютинирующего агента, Затем, исходя из характера зависимо сти титра РПГА от длительности сенсибилизации, рассчитывают значения начальной скорости сенсибилизации по ранее разработанному методу. Более активным гемосенситином является тот препарат, у которого значение начальной скорости сенсибилизации выше.П р и м е р 1. Сравнивали гемосенситивную активность двух серий антигенных препаратов, выделенных из БепСегьСЫз. Их оптимальные гемосенситивные дозы, определенные по известному способу, оказывались одинаковыми - 8 мкг/л, а максимальный титр РПГА существенно не различался - для первого препарата он был равен ,1;51200, для второго - 1:64000. Определение коэффициента относительной гемосенситивной активности также дало весьма близкие значения для препаратов двух серий - 2,9-2,0, Определение известным способом значений начальной скорости сенсибилизации препаратами, взятыми в эквивалентных по выходу дозах (выход 1-го и 2-го препаратов из сухой микробной массы соответственно равен 11,9 и 9, 1 Е), показало практически одинаковую активность (значения скорости равны соответствен но 1120 и 1200). Таким образом, все известные способы не позволили выбрать, лучший из двух препарат гемосенситина.По предлагаемому способу осуществили необходимые операции в такой последовательности.Вначале определяют дозы сравниваемых препаратов, вызывающие торможение пассивной гемагглютинации в 2 раза, Они оказались равными 0,013 т 0,016 мгк/л для первого и второго препаратов соответственно. Эритроциты нагружают антигенами в равноз 1128914 эффективных по связыванию антител дозах (0,92 и 0,64 мкг/л соответственно). Измеряют титр РПГА при разной длительности нагрузки - при этомполучили следующие результаты(табл. 1).Таблица 1 Длительностьнагрузки, мин 2-й 1-й 4000 10 4800 32000 4000 38400 4800 44800 11200 30 44800 11200 44800 16000 44800 16000 44800 19200 60 64000 16000 64000 22400 22400 44800 51200 Не измеряли 120 64000 51200 51200 64000 25600 180 64000 22400 64000 22400 64000 25600 Начальная скоростьсенсибилизации 8120 487 НЕ доверительныйинтервал 6400-11100 430-550 Р0,001 Различие значенийначальной скоростисенсибилизации Титр РПГА с "антигеном серии 38400 320001128 Затем расчитывают значения началь- ной скорости сенсибилизации следующим образом: корреляционный и регрессионный анализ связи между обратными значенйями титра РПГА (1/У) и экспо зиции (1/Х) позволил определить значения коэффициента регрессии 1/У по 1/Х, Они равны 0,002058 (для.первого препарата) и 0,0001232 (для второго препарата). Отсюда значения начальной скорости сенсибилизации (величина, обратная значению коэффициента регрессии) оказались равными 486 и 6126 соответственно. Таким образом, предлагаемый способ выявил сущест венные преимущества антигена второй серии погемосенситивным свойствам.Приготовление эритроцитарньм диагностикумов в полупроизводственномобъекте из антигенньм препаратов 20 двух серий дало следующие результаты. Максимальный титр РПГА с диагностикумами составили 1:44800-1 ф 51200 (для первого антигена) и 1:64000- -1:76800 (для второго антигена). 2 Таблица 2 Сравниваемые препараты Способ оценки 10 100 1:51200-1:102400 1: 44800-1: 102400 0,8 0,7 560 580 640 1840 Известный - по величинеогтимальный сентивнойдозы, мкг/мл Известный - по величинемаксимального титраРПГА Известный - по коэффициенту относительнойгемосенситивнойактивности . Известный - по величиненачальной скоростисенсибилизации дляэквивалентных по выходуконцентраций Предлагаемый - по величиненачальной скорости сенси-билиэации равноэффективными 1по антителесвяэыванию здозами 914 6Длительность нагрузки, необходимойдля достижения такой чувствительности, составил 2-3 ч (для первогоантигена) и только 10-30 мин (длявторого антигена). Характеристикачувствительности диагностикумов изантигенов двух серий продемонстрировала, таким образом, лучшие гемосенситивные свойства второго препарата, что проявилось в некоторомповышении чувствительности РПГА изначительном (в 4-18 раз) сокращениидлительности сенсибилизации эритроцитов,Данный пример показывает, чтопредлагаемый способ позволит датьболее точную количественную оценкугемосенситивной активности антигеновпо сравнению с известными.П р и м е р 2. Аналогичнымобразом (известным и предлагаемым)сравнивали гемосенситивную активность двух серий антигенов Е. Со 1 д011184, Результаты приведены втабл. 2,Заказ 9268/4 Тираж 687 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Филиал ППП "Патент", г, Ужгород, ул. Проектная, 4 7 112891Видно, что при использовании всех известных способов различия между двумя сериями антигена обнаружены не были, Предлагаемый способ показал почти трехкратное преимущество,йервого антигена по гемосенситивной активности.Приготовление полупроизводственньм серий эритроцитарных диагностикумов иэ антигенов двух серий в дозе 1 О 200 мкг/мл показало, что чувствительность диагностикума из сенситина первой серии составила 1:102400, а иэ второго - 1:51200. Необходимая длительность сенсибилизации при 5 использовании первого антигена соста 4 8вила 30 мин, а второго - 2-3 ч. Этиданные подтверждают лучшую гемосенситивную активность первого антигена,что было выявлено только с помощьюпредлагаемого способа. Таким образом, предлагаемый способ, в отличие от известных, дает воэможность более точной оценки активности гемосенситинов, независимо от различного сочетания характеристик активности, измеренных по известным способам, что важно для правильного выбора сенситина, ипользуемого при изготовлении эритроцитарных диагностикумов.