Способ получения белкового гидролизата эритроцитарной массы

СОЮЗ СОВЕТСНИХСОЦИАЛИСТИЧЕСНИХРЕСПУБЛИН 09) 011 ф ФГ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ;К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ(56) 1. Авторское свидетельство СССРпо заявке 9 3509959/28-13,кл, А 23 Л 1/10, 1982.2. Авторское свидетельство СССРВ 860765, кл. А 61 К 37/02, 1979.(54)(57) 1. СНОСОВ ПОЛУЧЕНИЯ БЕЛКОВОГО ГИДРОЛИЗАТА ЭРИТРОЦИТАРНОЙ МАССЫ, предусматривающий разрушениеэритроцитов в воде прй соотношенииэритроцитарная масса ; вода, равном Всю А 23 3 1/10 А 61 К 37/02 1:1, гомогенизацию с последующим ферментативным гидролизом, о т л и ч аю щ и й с я тем, что, с целью сокращения длительности процесса, его упрощения, а также увеличения содержания незаменимых аминокислот в гидролизате, разрушение эритроцитов проводят путем кипячения эритроцитарной массы, а после гомогенизации готовят 9-15 Х-ную взвесь эритроцитарной массы в воде и стерилизуют ее, затем осуществляют ферментативный гидролиз путем выращивания мутантного штамма Вас 1 йиз зиЬС 1 Яз ВНИИгенетнка.2. Способ по п. 1, о т л и ч а ющ и й с я тем, что стерилизацию проводят в режиме автоклавирования при 0,6-0,8 атм в течение 20-30 мин.3. Способ по п. 1, о т л и ч а ющ и й с я тем, что ферментативный гидролиз осуществляют при рН 8,0 - 8,5 и температуре 37 С в течение 65 - 72 ч.1 11172Изобретение относится к микробиологической промышленности, в частности к промьппленному получению белковых гидролизатов из различных отходов, содержащих белковое сырье, 5Ценным .белковым сырьем являетсякомпонент крови - эритроцитарная масса (осадок абортной и плацентарнойсывороток), Белковые гидролизатыэритроцитарной массы находят широкое 1 Оприменение для приготовления основы,питательных сред, используемых прикультивировании микроорганизмов (вместо дорогостоящих компонентов) и дляполучения отдельных аминокислот. 15Известен способ получения белкового гидролизата путем Ферментативногогидролиза очищенного белка из эритроцитарной массы в ,убойного скота спомощью препарата протеаз из Асг,дпошусея ГгасНе 10, иммобилизованномна силикатных носителях С 13.Однако этот способ не обеспечива"ет получения гидролизата с достаточным содержанием незаменимых аминокислот.Наиболее близким к изобретениюпо технической сущности и достигаемому эффекту является способ получениягидролизата эритроцитарной массы, ЗОпредусматривающий разрушение эритроцитов в воде при соотношении эритроцитарная масса:вода, равном 1: 1, гомогенизацию с последующим ферментативным гидролизом. Способ заключает- З 5ся в том, что разрушают эритроцитыпутем гемолиза эритроцитарной массыводой в соотношении 1; 1, выделяютбелок - обрабатывают ацетоном и соляной кислотой в соотношении эритроцитарная масса:ацетон:соляная кислота 1:8:0,008, проводят гомогениэацию при помощи мешалки, осажда"ют белок при помощи вакуум-Фильтрации, отмывают осажденный белок ацето"45ном в соотношении белок:ацетон 1:10,сушат в термостате в течение1 ч при 40 С, проводят гидролиз белка - приготавливают 27-ный растворбенка, проводят ферментативный гидролиз культурой Асгдпошусея ггай 1 епри рН 8,0, температуре 37 С, продолжительности 72 ч 23,32щивания Асг, Егад 1 е, что усложняетпроцесс, длительным выращиванием гидролизующей культуры Асг. Ггай 1 е -5-7 сут, повышенным расходом реактивов, недостаточным содержанием незаменимых аминокислот в гидролизате.Цель изобретения - упрощение исокращение длительности процесса получения белкового гидролизата эритроцитарной массы, а также увеличениесодержания незаменимых аминокислотв гидролизатеПоставленная цель достигается тем,что согласно способу получения белкового гидролизата эритроцитарноймассы, предусматривающему разрушение,эритроцитов в воде при соотношенииэритроцитарная масса: вода, равном1:1, гомогенизацию с последующимферментативным гидролизом, разрушениеэритроцитов проводят путем кипяченияэритроцитарной массы, а после гомогенизации готовят 9 - 157-ную взвесьэритроцитарной массы в воде и стерилизуют ее, затем осуществляют ферментатигный гидролиз путем выращиваниямутантного штамма Вас 111 ця я Ьг 111 яВНИИгенетика.При этом стерилизацию проводят врежиме автоклавирования при 0,6 -0,8 атм в течение 20-30 мин,Кроме того, Ферментативный гидролиз осуществляют при рН 8,0 - 8,5 итемпературе 37 С в течение 65-72 ч,Штамм Вас 11 ця яцЬЫ 1 я ВНИИгенетикаявляется мутантом, полученнымв результате генетико-селекционныхметодов работы из исходного штаммаВас. яцЬг 11 я В. Штамм Вас. яцЪгх 11 я ВНИИгенетикахранится в Центральном музее культур промышленныхмикроорганизмов ВНИИгенетика под номером ЦМПИ В,Культурально-морфологические свойства штамма Вас 11 ця яцЬл 1 я ВНИИгенетика.Морфология.Штамм Вас. яцЬг 111 я ВНИИгенетика представляет собой грамположительнуюпалочку, подвижную, со жгутиками,размером; длина 2 - 2,5 ц, ширина0,6 - 0,8 Образует споры; длина1 - 1,5 р, ширина 0,6 - 0 9 р, Однако известный способ характери 55 зуется многостадийной предварительной очисткой эритроцитарной массы, необходимостью дополнительного приготовления питательной среды для выраКультуральные и Физиологические признаки,Мясо-пептонный агар (МПА). При инкубации в течение 48 ч (при температуре 35-40 фС) образует колонии диамет 1111723ром 2,5 - 3 мм круглой Формы со слегка волнистым краем, желтовато-белогоцвета. Поверхность гладкая, матовая.Посев штрихом на мясо-пептонномагаре. При инкубации в течение 24 ч 5при 35-40 С рост хороший, край волнистый, поверхность гладкая, матовая,просвечивается на свет, цвет светложелтый.Посев уколом. Факультативный анаэроб. Рост на поверхности и по длине укола.Мясо-пептонный бульон. При инкубации в течение 24 ч при 35-40 о С безвстряхивания наблюдается помутнениесреды, на поверхности образуется пленка, при встряхивании на качалке -сильное помутнение среды. При стоянииобразуется осадок.Агаризованная среда Хоттингера, 20При инкубации в течение 24 ч при 3540 С образует колонии диаметром 3 ммкруглой Формы со слегка волнистымкраем, желтовато-белого цвета, Поверхность гладкая, матовая.Агаризованная синтетическая средаСпицайзена. При инкубации в течение48 ч при 35-40 С образует колониидиаметром 1,5-2 мм круглой формы, серого цвета. Поверхность морщинистая, 30матовая.На ломтиках картофеля, После инкубации в течение 24 ч при 35-40Срост обильный, цвет культуры серовато-белый. Пигмента при росте на картофеле не образует,Биохимические свойства.Желатину разжижает хорошо, послойно, Молоко пептонизирует и подщелачи 40 вает. Клетчатку не разрушает и не усваивает. Нитраты не восстанавливает, Крахмал гидролизует. Усваивает мальтозу, галактозу, сахарозу, глюкозу, фруктозу, глицерин, лактозу, арабинозу, маннит, рибозу. Не усваивает рам 45 нозу, сорбозу, маннозу. Готовят посевной материал гидролизуюшего агента - штамма Вас 111 цз яцЬ 111 з ВНИИгенетика- путем выращивания в МПБ в течение 18 ч. Взвесь эритроцитарной массы засевают 4 об,7 полученного посевного материала штамма Вас 11 цз зцЬг.111 з ВНИИгенетика.Ферментативный гидролиз осуществляют в колбах емкостью 250 мл в усло-. виях перемешивания при 37-40 С, рН 8-8,5 в течение 65-72 ч.П р и м е р 1, 10 л эритроцитарной массы заливают равным объемом воды. Смесь кипятят в течение 30 мин, Сгустки гомогенизируют при помощи мешалки в течение 10 мин. Из гомогената готовят 157-ную взвесь ритроци тарной массы в воде и стерилизуют в режиме автоклавирования при 0,8 атм 30 мин, Стерильную взвесь засевают гидролизующим агентом - 18-часовой культурой штамма Вас 111 цз зцЬ 11 з ВНИИгенетика- в количестве 4 об,Е, Гидролиз проводят в колбах емкостью 250 мл при 37 С, рН 8-8, 5 в течение 72 чпри постоянном перемешивании, В результате получен гидролизат с глубиной гидролиза 563, имеющий характеристики, приведенные в таблице,П р и м е р 2, Приготовление гомогената эритроцитарной массы то яе, что и в примере 1. Отличие состоит в процентном содержании взвеси эритроцитарной массы и режиме ее стерилизации, Из гомогената готовят 97.-кую взвесь эритроцитарной массы в воде. Взвесь стерилизуют в режиме автоклавирования при 0,6 атм в течение 20 мин, Приготовление посевного материала гидролизующего агента - штамма ВасзцЬд 1 дз ВНИИгенетикаи условия Ферментативного гидролиза те же, что и в примере 1. Отличие состоит в продолжительности ферментативного гццролиза, который проводят в течение 65 ч. В результате получен гидролизат с глубиной гидролиза 523.Способ осуществляют следующим образом.50Эритроцитарную массу (осадок абортной и плацентарной сывороток) разводят водой в соотношении 1:1, кипятят в течение 30 мин, сгустки гомогенизируют при помощи мешалки, Из гомогената готовят 9 - 153-ную взвесь эритро 55 цитарной массы в воде, затем стерилизуют ее в режиме автоклавирования при 0,6-0,8 атм в течение 20-30 мин. Предлагаемый способ по сравнению с известным имеет следующие преимущества: гидролиз эритроцитарной массы проводят путем культивирования мутантного штамма Вас 111 цз вцЪ 1 дз ВНИИгенетика, применяя 18-часовую культуру (по сравнению с 5-7 суточной культурой АсС. Егаде), при этом для выращивания штамма Вас. зцЬ 111 з ВНИИгенетикане требуется дополнительных затрат на приготовление пита,5 из Фен ил аланииМетионин,б 4 2 Треонин 2,87 О,иптофан 6,4,2 ани ь 47 ргин Аспарагиноваякислота аминова Следь кисло 14,Глицин 28 тидин тельной среды, гидролиз осуществляют непосредственно после стадии разрушения эритроцитов, минуя сложный процесс вьщеления белка, как это осущЕствлялось по известному способу. 5Предлагаемый способ позволяет не только удешевить, но и упростить процесс. Как следует иэ таблицы, при довольно высокой степени глубины гидрОлиэа, (до 56%) значительно увели Глубина гидролиза, ЕНезаменимые аминокислоты,мг Х Заменимые аминокислотмг Х чивается выход свободных незаменимыхаминокислот. Таким образом, предлагаемый способ позволяет улучшить питательную ценность гидролизата эритроцитарной массы, что является его основным качественным показателем и определяет его применение как основы для приготовления питательных сред,8Продолжение таблицы 1111723 Б 5,2 ПролинСерииЦистинТирозин 0,54 2,1 0,63 Следы 48,1 Заказ 6364/2 Тираж 588 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий