Штамм aspergillus insuетus-г-116-продуцент декстраназы

ОПИСАНИЕИЗОБРЕТЕНИЯ щ 896069К АВТОРСКОМУ СВИ ВТИЛЬСТВУ Союз Советских Социалистических Республик(22) Заявлено 110480 (21) 2940485/28-13с присоединением заявки Нов(23) Приоритет -Опубликовано 070132. Бюллетень М 1Дата опубликования описания 020182 Р 1 М Кз С 12 И 15/00 Государственный комитет СССР но делам изобретений и открытий(72) Авторы изобретениюА.Г, Лобанок, О,Н, Зинченко и В. 1 Звявител Институт микробиологии АН Белорус(экзоктивИзобретение относится к микробиологической промышленности и касается штамма микроорганизма - продуцента фермента декстраназы, используемого в пищевой промышленности, на стадии фильтрации и очистки сахарных сиропов, а также в медицине для профилактики и лечения кариеса зубов.Известны различные микроорганизмы, 1 О способные синтезировать декстраназу из штаммов различных грибов и бактерийвИзвестен, например, штамм Рец 1 с 3. - Ы 1 шп йцлпсцбозцв ГЕРМ-Р 129-продуцент5 декстраназы,.Фермент получают на жидкой питательной среде, при значении рН 6,5-7, регулируемом добавлением кислоты для усиления процесса ферментации и повышения выхода декстраназь(.).Наиболее близким к предлагаемому по технической сущности и достигаемому положительному эффекту является штамм гриба Рец 1 с 1661 шп р 1 зсагдцв 25 БИМ Г. Уровень внеклеточной эндодекстраназной активности этого. штамма на среде Чапека-Докса с 1 декстрана и 0,5 кукурузного экстракта достигает 290 ед/л на 5-е сутки 3 О культивирования. Осахаривающая декстраназная) внеклеточная а ность составляет при этом 32 ед/мл (2 .Недостатком известных штаммов является низкий уровень внеклеточной декстраназной активности,Цель изобретения - получение штам ма гриба с высоким уровнем внеклеточной декстраназной активности. Предлагаемый штамм Азрегд 1 ЕСцз 1 пзце 1 цз Гявляется активным односпоровым вариантом исходного музейного штамма Азрегд 1 СЮцз 1 пзцеСцз 99 ХФВНИИ. Штамм получен путем много" кратного рассева исходной культуры на среды со специфическим индуктором (нативным бактериальным декстраном) с последующим отбором активных вариантов. Декстраназная активность предлагаемого штамма в 2 раза превышает активность исходного. Штамм хранится в музее культур Института микробиологии АН Белорусской ССР при +4-+5 оС на картофельно-декстрозном агаре (шифр штамма-Г) и в музее культур Промышленных микроорга низмов института ВНИИГенетика (коллекционный номер ЦМПМ Г).Штамм Аярегд 1 ЯЯцв 1 пяце 1 ця Гобладает внеклеточной экходекстраназной активностью до 80 ед/мл,знзодекстраназная активность культурной жидкости достигает 700 ед/л.Штамм гриба Аярегд 1 И цв пяцеСця Гхарактеризуется следующими культурально морфологическими и биохимическими признаками.Морфологические признаки. На среде Чапека-Докса вегетативный мицелий септированный, разветвленный, толщина гиф 3-4 мкм. Конидиеносцы несептированные, неветвящиеся, прямостоящие. Конидиальная головка образована вершинным вздутием конидиеносца 7-96-7 мкм, одним слоем стеригм 12,5- 15,0 ьмкм и цепочками конидий КЬнидии гладкие, шаровидные, диаметром 4,5-6,0 мкм.Культуральные признаки. На среде Чапека-Докса с сахарозой на 4-е сутки при 28 С колония круглая, выпуклая с ровными краями, 2 см в диаметре, с густым коротким опушением, Центр колонии слегка приподнятый, обратная сторона колонии кремового цвета.На среде Чапека-Докса с декстраном 4-х суточная колония круглая, выпуклая, в центре приподнятая, имеет р 3 см, края ровные, воздушный мицелий белый, пушистый. В центре колонии зона спороношения коричневого цве-та, ф 1,3 см. Вокруг колонии зона просветления шириной 5-6 мм.На картофельно-декстрозном агаре колония очень выпуклая с ровными краями. На 4-е сутки имеет диаметр око" ло 2 см, густой, короткий, белый воздушный мицелий. В центре колонии мицелий серо-зеленый. На 6-е сутки диаметр колонии достигает 4 см. Мицелий приобретает серо-зеленую окраску, в центре - серо-коричневую, видны споры. По краю колонии кромка белого воздушного мицелия.Биохимические признаки. Аярегд 11- 1 ця 1 пяце 1 ця Гособенно активно сбраживает глюкозу, сахарову, ксилозу,сербит и дульцит,менее активно - галактозу,лактозу,маннит.Слабо ассимилирует глицерин и арабинозу.Молоко пептонизирует очень медленно, желатину разжижает воронкообразно, интенсивно гидролизует крахмал, использует аммонийную, нитратную и белковую,формы азота. Нитраты восстанавливает.ц)тамм гриба Аярегд 1 Иця 1 пвце 1 ця Г-Ж 6 выращивают глубинным способом на среде с нативным декстраном.Внеклеточную энзодекстраназную активность определяют вискозиметрически по разжижающей способности фермента с использованием в качестве субстрата 0,8-ного раствора нативного бактериального декстрана, Для этого к 7,5 мл 0,8-ного раствора декстрана в 0,1 М Ма-ацетатном буфере (рН 5,0)где где А - активность ед/мл;С - концентрация редуцирующих веществ в реакционной смеси,мкг/мл;Н - разведение культуральной жидкости;10 - время гидролиза, мин;180 - моль глюкозы.П р и м е р 1. Выращивание штамма АярегдЮ ця юяце 1 ця Гпроводят на питательной среде, содержащей,г нативный декстран 1,01 ИаИО 0,3, КНРО 0,1) КС 8 0,05," МЧБО 4, 0,0 З; Ре 804 110 ф кукурузный экстракт 0,5, Культивирование ведут в колбах на 100 мл с 25 мл среды на качалке (200 об/мин) При 28-29 фС в течение 5 сут.Посевным материалом служит 2-недельная культура, выращенная на картофельно-декстрозном агаре. Смыв с поверхности агара (пробирка на 25 мл дистилированной воды) в количестве 4 от объема среды вносят в колбы. Максимальный уровень активности культуральной жидкости наблюдается на 5-е сутки культивирования. К этому времени энзодекстраназная активность достигает 700 ед/л, а экзодекстранаэная - 80 ед/мл.Отличающей особенностью предлагаемого штамма АярещдИцв 1 пвцейцвГь является способность к активному росту и синтезу декстранаэы насинтетической среде без добавления 35 40 45 50 55 60 65 добавляют 0,5 мл культуральной жидкости (после соответствующего разведения). Через определенные интервалы времени измеряют время истечения реакционной смеси на вискозиметре ВПЖс диаметром капилляра 0,62 мм, термостатированном при 37 фС. Активность рассчитывают по формулеС 1 А - активность ед/л; С- концентрация субстрата; и - относительная вязкость; 1 - время реакции, с. Внеклеточную экэодекстраназную активность выражают в глюкозных единицах. Единица активности соответствует количеству освободившихся при действии фермента на субстрат вос станавливающих групп прй 37 аС эа 1 мин, эквивалентному одному микро- молю глюкозы. Для этого к 0,75 мл 0,15-ного раствора декстрана в ., 0,1 М Юа-ацетатном буфере (рН 5,0) добавляют 0,25 мм культуральной жидкости (после соответствующего разве дения) . Гидролиз проводят в течение10 мин при 37 фС.Образовавшиеся редуцирующие сахара определяют методом Самоги-Нельсона, Активность рассчитывают по формуле 30 СфйР896069 Составитель И, ПриваловаРедактор М. Келемеш Техред Т. Маточка Корректор Е. Рошкоеютаветтеюаве таттаатаваава тютюее е еет(Заказ 11631/10 Тираа 504 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и Открютий113035, Москва, Ж-ЗЬ, Раушская наЬ., д. 4/Ьею ее е еефилиал Ппп патентф, г. Уагород, ул. Проектная, 4 кукурузного экстракта или других факторов роста. При этом не наблюдается существенных отличий в уровне декстранаэной активности культуральной андкости, полученной на среде с кукурузнрм экстрактом и синтетической среде. Итамм Азрегд 1 Ииз 1 пзиецз Гт 116 по сравнению с известным обладает в 2,5 раза более высоким уровнем декстраназной активностк культуральной 1 ф аидкости. Формула изобретенияШтамм АврегдШ цз 1 пзцеШз Гт 116(Коллекция культур промышленных микроорганизмов института ВНИИгенетикаколлекционный номер ЦМПМ Р), продуцент декстраназы.Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1. Заявка Японии В 52 т 31429,кл. С 12 Р 13/10, опублик. 1977.2 ф Авторское свидетельство СССРВ 747889, кц. С 12 Р 13/10,