Способ замораживания спермы птиц

-исследовательский институт пти Украинский н 7 Заявитель 54) СПОСОБ ЗАМОРАЖИВАНИЯ СПЕРМЫ П ологической полноцен ей способности заморо ы по всем заморажив ности и оплодотворяю женно-оттаянной сперемым гранулам. Прак овременно раскащтьфторопластовую ораживаемой сперть замораживаемой ределах допустимой ически невозможно одн пипетко пластину а охлажденнуюесь объем зам мы, поэтому только часпермы оказывается в продо кого раз бав ной т кам введеНизкая с необ а 1Изобретение относится к искусственному осеменению сельскохозяйственных животных, в частности к способам замораживания спермь, птиц.Известен способ замораживания спермы птиц, включающий разбавление спермы, хранение ее в анаэробных условиях, замораживание в парах жидкого азота и последующую оксигенацию при оттаивании 11.1 ОИзвестен также способ замораживания спермы птиц, заключающийся в том, что сперму разбавляют при комнатной температуре, добавляют в разбавленную сперму этиленгликоль, затем ставят в холодильник при 2 - 4 С на эквилибрацию, которая продолжается 50 - 70 мин. Подготовленную к замораживанию сперму накалывают на поверхность фторопластовой пластины, предварительно охлажденной до -60 - -75 С. При этом капель.20 ки спермы, замерзая, образуют гранупы объемом 0,10 - 0,15 мл. Выдерживают пластину с гранулами в парах жидкого азота 55 - 65 с, затем опускают в жидкий азот для быстрого (250 - 350 град в мнн) охлаждения до -196 С 2).Однако замораживание . спермы известным способом не обеспечивает должное сохранение лжительности ее выдержки в парах жид азота (55 - 65 с). Подготовка спермы мораживанию не совершенна, так как ление спермы проводится при комнатемпературе, когда спермии чувствительтемпературному и осмотическому шои в два приема (разбавление, затем ние криопротектора), что трудоемко,производительность труда, связанная ходимостью сбора после замораживаранул в посуду для их хранения, труд. ркировка спермы от отдельных произ912165 1 О 15 20 25 30 35 40 45 50 55 3водителей, а также сушествует воэможность микробной загрязненности необлицованных гранул в процессе замораживания и хранения,Целью изобретения является повышение активности и оплодотворяющей способности сне рмиев.Поставленная цель достигается тем, что сперму после эквилибрации помешают в тонкостенные металлические кюветы в количестве 0,1 - 2,0 мл в каждую, а замораживание осуществляют со скоростью 40 - 60 град в мин до -98 - -127 С, затем со скоростью 8 - 15 град в мин до -196 С,П р и м е р. Свежеполученную от гусаков сперму охлаждают до 0 С в течение 3 - 10 мин, разбавляют охлажденной до этой же температуры защитной средой, содержащей 15% этиленгликоля, и эквилибрируют в течение 30 - 90 мин. После эквилибрации сперму переносят в тонкостенные металлические кюветы, например, из алюминия в количестве не более 2,0 мл в каждую. Высота столбика спермы в кювете при этом не более 2,2 мм. При увеличении объема спермы, замораживаемой в одной кювете, т.е, при высоте столбика спермы более 2,2 мм, результаты ее низкотемпературной консервации ухудшаются. Толщина стенок кювет 0,2 мм, внутренний диаметр кюветы 25 мм.Кюветы со спермой помещают на метал. лическую пластину, которую затем выдерживают в парах жидкого азота так, чтобы скорость снижения температуры спермы составляла 40 - 60 град в мин при охлаждении до -98 - -127 С, а затем 8 - 15 град в мин при охлаждении до .196 С. Скорость замораживания контролируют с помощью любого предназначенного для этих целей прибора. например.КГПс подсоединенной к нему в качестве датчика термопарой, опущенной в одну. из кювет. Удобнее же использовать сушествующие программные устройства для замораживания спермы.После достижения температуры жидкого азота (.196 С) замороженную сперму в кюветах переносят на хранение в сосуд Пьюара. Хранят замороженную сперму в течение длительного времени. В случае возникновения потребности в ней, извлекают необходимое кол чество кювет и оттаивают в воде, подогретой до 80 - 85 С. В процессе оттаивания прн легком встряхивании кювет хорошо просматривается физическое состояние их содержимого, т,е. момент перехода замороженной спермы из твердой фазы в жид.кую. В это время кюветы извлекают из воды, оценивают замороженно-оттаянную сперму по активности спермиев и используют лля оссменспия. Сравнительные данные активности и оплодотворяннцей способности замороженно-оттаянной спермы, обработанной известным ипредлагаемым способами, представлены втабл. 1,Активность оттаянных спермиев в зависимости от скорости замораживания представленав табл, 2,Данные, представленные в табл. 1, свидетельствуют о том, что предлагаемый способ.достоверно (Р ) 0,999) превосходит известный по оплодотворенности яиц (на 30,2%) ивыводу гусят (на 22,8%) Биологическаяполноценность (активность) спермиев увеличивается на 0,5 балла и составляет 5,5 баллов.Результаты исследований, представленные втабл, 2, свидетельствуют о том, что прискорости охлаждения 40 - 60 град в минкритическая зона наступает после охлаждения спермы до -98 - -127 С, т.е, снижатьдалее температуру спермы с этой же скоростью нецелесообразно, так как в этом случае неминуемы большие потери биологической полноценности спермиев. Необходим переход на другую скорость, более медленную,критическая зона которой уже пройдена(габл. 3). Оптимальным является переходна скорость 10 град в мин с допустимымипределами колебания от 8 до 15 град в мин.Влияние температуры оттаивания замороженной спермы гусаков па активность спермиев отображается в табл, 4,Результаты исследований, представленные в табл. 4, свидетельствуют о том, что замороженную сперму следует оттаивать при 80 - 85 С.Исследования по оптимизации количества спермы, помещаемой в одну кювету, показывают, что высокая активность замороженно. оттаянных спермиев (в среднем 5,5 баллов) достигается при условии замораживания в одной кювете 0,1 - 2,0 мл спермы. При увеличении объема спермы более 2,0 мл активность замороженно-оттаянных спермиев снижается до 4 - 2 баллов,Использование предлагаемого способа замораживания спермы по сравнению с известным обеспечивает повышение биологической полноценности (до 5,5 баллов) и оплодотворяющей способности замороженно-оттаянной спермы (на примере спермы гусаков: оплодотворенность яиц увеличивается на 30,2%, вывод гусят - на 22,8%), в частности предлагаемый способ позволяет получать дополнительно от каждой тысячи инкубируемых яиц228 голов суточных гусят, а также предлагаемый способ обеспечивает повышение производительности труда, простоту осуществления.Скорость замораживания спермы, град в мин ктивность сне рмиев,баллы от- .127 С до-196 С,4+0,12 замо 40 -35 Способ замораживания спермы птиц, преимущественно гусаков, включающий разбавление, эквилибрацию и замораживание спермы в парах жидкого азота, о т л и ч а ющ и й с я тем,что, с целью повьппения активности и оплодотворяющей способности спермиев, сперму после эквилибрации помещают в тонкостенные металлическне кюветы со изе 691132,6621,Составитель А, ФилипповаТехред С,Мигунова Корректор Н. Стец едактор Л. Плиса Заказ 1196/ Подписное Тираж 717 ВНИИПИ Государственного комитета ССС по .делам изобретений и открытий 3035,Москва, Ж - 35, Раушская наб., д. 4ород, ул. Проектная Филиал ППП "Патент", г. ула изобретения Температура Активность спер.оттаивания, миев, баллы в количестве 0,1 - 2,0 мл в каждую, а раживание осуществляют со скоростью 60 град в мин до -98 - -127 С, зате скоростью 8 - 15 град в мин до - 196Источники информации,принятые во внимание при зкспер 1. Авторское свидетельство СССР И кл. А 61 О 7/02, 1977.2. Авторское свидетельство СССР Я кл. А 61 О 7/02, 1976.