Штамм panus тigrinus frsing ибк-131-продуцент биомассы

Союз Советскик Социалистических РеспубликОП ИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ 1883177 Н АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(Я)М, Н,з С 12 И 15/00 с присоединением заявки Йо Государственный комитет СССР по делам изобретений и открытий(088.8)А. С. Бухало, В. Г. Бабицкая, Э. 4. Соломко,А.Н. Капич, И.А. Дудка и И,В. СтахезвИнститут микробиологии АН БелорусскстйЫРи Институт ботаники им. Н,Г. ХолодногоАН Украинской ССР(54) ШТАММ РАМО 5 Т6 гО 5 (г В. ) 5гС ИБКПРОДУЦЕНТ БИОМАССЫ Изобретение относится к микробио. логической промьаленности, а именно к штаммам высших базидиомицетов продуцентов пищевой или кормовой биомассы на жидких средах.Известны культуры базидиомицетов из рода .епкпцо, близкого к роду апцнв, являющихся продуцентами биомассы на средах, содержащих.в качестве источника углерода различные кислоты или углеводороды. Получаемая биомасса должна обладать высоким содержанием протеина и хозошей переваримостью белка 11 и1. Наиболее близким к изобретению по технической сущности и достигаемому эффекту является штамм вида Ранца сдгПцз 3 .Однако у .известного штамма низкая скорость роста.Цель изобретения - штамм грибов Рапцв сдгпцв (гг.) 5 пд ИБКпродуценк биомассы, обладающий высокой скоростью роста, специфическим грибным ароматом и высоким выходом культурального мицелия при выращивании на дешевых жидких питательных средах, представляющих собой отходы пищевой промышленности,Предлагаемый штамм ИБКвыделен из плодовых тел Ранца сдг)пцв(пилолистника тигрового), которыебыли собраны со стволов лиственныхцеревьев в окрестностях г. Киева.Культура хранится на нейтральном сусло-агаре при 4 ОС в коллекции отделамикологии и бриологии Института бо- .таники им. Н,Г, Холодного АН УССР,шифр штамма ИБК.Полученный штамм имеет следующиеморфологичЕскую и физиологическую характеристикиМорфологические признаки. Шляпка 15 гриба ( 1-3 см в диаметре) воронковидная, асимметричная с завернутЫм внизкраем. Кожица шляпки сухая, грязнобелая, с черновато-бурыми чешуйками.Пластинки нисходящие, кремовато-беже вые. Ножка (длиной 1-4 см) белая, коснованию буроватая, слабо-чешуйчатая. Базидиоспоры округло-цилиндрические, бесцветные 5,5-8,0 х 2,5-3,0 мкм.Вегетативные гифы двух типов: тонкие 1-1,2 мкм в диаметре, без перегородок и пряжек и более толстые 2,34, 0 мкм в диаметре, септированные спряжками.Культуральные признаки, На сусло агаре и картофельно-глюкозной агаризи883177 Таблица 1 Глюкоза Ксилоза Галактоэа Сахароза Лактоза Крахмал Культура Поверхностная 100 Глубинная 100 227 227 218 254 436 44, 1 29,4 29,4 105,9 Культура Различные источники азота Поверхностная 100 570 945 950 1375 Глубинная 100 62 68 82 154 рованной среде колонии быстрорастущие, белые, пушистые, войлочные, свбзрастом становятся плотными, кожистыми, бугристыми, окрашиваются вбуровато-коричневый цвет, обладаютсильным грибным ароматом, На кожистых участках колонии наблюдаются многочисленные лимоновидные хламидоспры размером 10,0-15,0 х 7,5-12,5 мкм.а уплотненных бугристых участках поверхностного мицелия образуются зачатки плодовых тел в виде роговид- Оных выростов, при действии света происходит их дифференциация на ножкии шляпки.На поверхности жидкого пивногосусла ( 40 по Баллингу) образуется пу шистая войлочная пленка, которая пристарении местами буреет и на ее поверхности образуются плодовые теласо зрелыми базидиоспорами.При глубинном выращивании на жид цком пивном сусле и других испытанныхсредах гриб растет в виде мецилиальных шариков. Мицелий обладает грибным ароматом.Физиологические признаки. Аэроб,оптимум роста при 26 С. ОптимальныйрН 6,0-7,0. Отношение к источникамуглерода: ассимилирует глюкозу, фруктозу, ксилозу, сахарозу, лактозу,мальтоэу, рафинозу, крахмал и целлюлозу,30Отношение к источникам азота: использует нитратный и аммонийный азот,пептон и аспарагин.Штамм обнаруживает положительнуюреакцию на экстрацеллюлярные оксида- З 5зы, отмечено образование протеолитических ферментов с оптимумом прирН 7,0.П р и м е р 1. Штамм Рапцз 19 г 1 пцз ИБКхорошо растет на ряде ком-щплексных сред, являющихся отходамипищевой промышленности и не требуетпри этом дорогостоящих ростовых добайок в виде витаминов или аминокислот. Даннйе роста Рапцз С 1 дгпцз на минеральной среде с различными источШтамм Рапц цгпць ИБКисследовали в лабораторных условиях наразличных жидких средах:а) сусло пивное (4 по Баллингу)при рН 6,0-7,0;б) среда с пентоном, содержащаяг/л глюкозу 30,0, пептон 3,0, К НРО2,0; КСГ 1,2, Н 950,7 НО 0,25; вод/1 1водопроводную 1 л; рН 6,5,в) минеральная среда с мелассой,содержащая г/л мелассу 25,0, (МН 4)53,0; К НРО 4 1,2, дрожжевой экстракт2, 0; воду водопроводную 1 л, рН 6, 5 .г) минеральная основа, которая добавлялась к различным сложным субстратам (свекловичный жом, клеточныйсок картофеля, картофельная меэга идр.), содержащая г/л: МН 4(М 09) 3,0;КН 2 РО 4. О, б,; К 2 НРО 4 О, 4; Н 95 04 7 Н 00,5, рН сред 6,0.Мицелий гриба культивировали поверхностно в колбах Эрленмейера различной емкости, глубинно в пробиркахна качалке при 220 об/мин и в колбахна круговой качалке при 160-180 об/мин.Отдельные эксперименты проводили вферментере АК,.с мешалкой турбинного типа объемом 15 л, с рабочимобъемом среды 10 л при скорости перемешивания 300 об/мин и интенсивносги аэрации 1 л/л 1 мин. Температура инкубации во всех экспериментах 25-26 Сб(оптимальная), Посевной материал выращивали на пивном сусле или среде спептоном в колбах на 500 мл с 50 млсреды. На дно колбы насыпали фарфоровые бусы, с помощью которых перед посевом измельчали мицелиальную пленку путем энергичного встряхивания.Среды инокулировали полученной взвесью в количестве 0,4-0,6 г/л по сухому весу. Данные роста Рапцз с(9 гпцз на минеральной среде с различными источниками углерода (проценты к весу мицелия на среде с глюкозой) приведены в табл, 1. никами азота (проценты к весу сухого мицелия на среде с Ма МО ) приведены в табл, 2Таблица 2883177 Таблица 3 Состав сред клубневая фракцияг/л (по сырому3 г/л Нестандартна картофеля 15 весу) + МН, М 12 45,0 зга 20 г/л(по сухому векурузного эксная основа,0 12,дах сотретьитабл. 4 Таблица Состав среды 26,2 2,1 8,2,4 10 35,4 При выращивании гриба на среде с крахмалом и хлористым аммонием в поверхностной культуре оптимальным соотношением С ; й являлось 12 ; 1, а на среде с глюкозой и азотнокислым аммонием в глубинной культуре - 40: 1.П р и м е р 2, Исследовали рост штаммов пилолистника тигрового на ряде комплексных сред, где в качестве субстрата были использованы дешевые отходы пищевой промышленности. Так,Клеточный сок картофеля + + 5 г/л крахмала + минеральная основа Показатели накопле:.ия биомассы и содержания в ней протеина при культивировании гриба на срем 20 г/л по сухому весу Жом 20 г/л + 0,2 кукурузного экстракта Жом 20 г/л + 0,2 кукурузного экстракта + минеральная основа При культивировании гриба на молочной сыворотке на четвертые сутки нако ено биомассы 15,5 г/л, протеина в ней содержится 35,8,Таким образом, предлагаемый штамм съедобного гриба Рапо цгпи (пилолистник тигровой) обнаруживал хороший рост при культивировании на жидких средах, содержащих недорогие и доступные источники углеродного, азот- ного и минерального питания.На указанных средах при рН 6,0-7,0 60 и температуре выращивания 25-26 О С получен следующий максимальный урожай культурального мицелия (по сухому весу): на пивном сусле ( 4 по Баллинру) при поверхностном выращивании на максимальный урожай мицелия при глубинном культивировании на минеральной среде с мелассой составлял: на третьи сутки культивирования 4 г/л, на седьмые 10,0 г/л по сухому весу.Данные роста и содержания протеина в мицелии гриба Р. с 9 гпцв на третьи сутки культивирования на средах, включающих отходы картофелекрахмального производства, представлены в табл, 3. Биомасса, Протеин,г/л по к весусухому весу биомассы свекловичным жомом наутки представлены в омасса, Протеин,л по к весухому весу биомассы 12-ые сутки - до 12 г/л, на среде с пептоном на 7-ые сутки глубинного культивирования - до 17 г/л; на минеральной среде с мелассой - до 10 г/л, на среде с отходами переработки картофеля на 3-ьи сутки в глубинной культуре - до 12 г/л", на средах со свекловичным жомом - свыше 13 г/л, на творожной сыворотке - 15,5 г/л на 4-ые сутки культивирования.Содержание сырого протеина (общий азот по Кьельдалю х 6,25) в биомассе предлагаемого штамма составляло 26,0- 45 на сухой вес биомассы в зависимости от состава среды. Содержание аминокислот от веса протеина в образцах мицелия, выращенного поверхностно/Формула изобретения Составитель В. ЗайцеваРедактор Т. Киселева Техред З.Фанта Корректор О.Билак Заказ 10125/38 Тираж 531 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 на пивном сусле, Ъ; лизин 4,79; треонин 4,34; гистидин 2,10; аланин 4,01", аргинин 2,41, валин 3,46; аспарагиновая кислота 1,81; метионин 0,93;серии 3,28, лейцин 3,12, глицин 14,60, изолейцин 3,25, глутаминовая кислота 4,69 и фенилаланин следы.5Сырая мицелиальная масса, выращенная глубинно или поверхностно на указанных средах, обладала сильным гриб" ным ароматом. Мицелий, высушенный при 40 С, сохранял аромат в течение нефскольких месяцев.Предложенный штамм Рапцз й 9 гпоз ИБКобладает высокой скоростью роста и выходом мицелиальной биомассы при глубинном культивировании на 15 различных углеводных средах, включая дешевые отходы пищевой промышленности. Мицелиальная биомасса имеет приятный грибной аромат, высокий уровень протеина (до 45) и содержит все 2 О основные незаменимые аминокислоты. Кроме того, штамм образует в куль туре на плотных и жидких средах плодовые тела со зрелыми спорами,. что может быть использовано для быстрой его идентификации по макропризнакам, а также для селекционных работ. Штамм Рапса С 9 гпо 5 (Гг,) 5 п 9ИБК- продуцент биомассы. Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1. Патент Японии 9 50-29034, кл. С 12 В 1/00, опублик. 1975.2. Патент Японии У 50-16433, кл. С 12 В 1/00, опублик. 1975,3. Торев А.К. Промышленная технология за производство на мицел от висшигьбы. София, 1973.