Способ постановки реакции непрямой гемагглютинации для выявления вирусных антигенов

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК 1780008, А Ь 3 ЗЗ/55 5)5 0 ИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ АВТОРСКОМУ ЕТЕЛ У ци пр Во ра, кроме абилизат рогосто эритро имене створа( ) ОО о 100 мл денного ует до- рН ста 1. К 9 порциям о раствора (до ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОВЕДОМСТВО СССР(71) Казахский научно-исследовательский ветеринарный институт Восточного отделения ВАСХНИЛ(56) Саятов М.Х, и др. Эффективный стабилизатор для приготовления антительных эритроцитарных диагностикумов к вирусам гриппа А и В, - Вопросы вирусологии, 1986, М 6, с. 674-679.Корнеева Э.П, и др. Применение реаки непрямой гемагглютинации для эксесс-диагностики вспышек гриппа. - просы вирусологии, 1977, М. 5, с. 628-632,Изобретение относится к ветеринарии,в частности к вирусологии, а именно к способам разработки эффективных методов,предназначенных для ускоренной диагностики вирусных инфекций,Известен способ стабилизациицитарных диагностикумов путем прния в качестве стабилизирующего ранеионного детергента.Недостатком известного способа является ограниченность области широкого ееприменения в практических лабораториях,а также в полевых условиях,Известен также способ стабилизацииэритроцитарных диагностикумов путем использования в РНГА бычьего сывороточногоальбумина.Однако известный способ требполнительных рабо по подведению(54) СПОСОБ ПОСТАНОВКИ РЕАКЦИИ НЕПРЯМОЙ ГЕМАГГЛЮТИНАЦИИ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ ВИРУСНЫХ АНТИГЕНОВ (57) Использование; биотехнология, диагностика вирусных инфекций, Сущность изобретения: использование крахмала в качестве стабилизатора при постановке реакции непрямой гемагглютинации (РНГА) для выявления вирусных антигенов, Исследуемый материал разводят физиологическим раствором, содержащим крахмал(концентрация раствора крахмала 0,004-0,006;4), и далее осуществляют РН ГА обычным способом, Применение крахмала позволяет существенно упростить и ускорить постановку РНГА без снижения эффективности выявления вирусных антигенов, 3 табл,билизирующего раство т меняемый в качестве ст о мин является до ящ остродефицитным.Целью изобретения является упрощение способа постановки реакции непрямой гемагглютинации (РНГА).Указанная цель достигается тем, что согласно способу постановки РНГА, включающему разведение исследуемых антигенов физиологическим раствором со стабилизатором, внесение сенсибилизированных антителами эритроцитов, используют в качестве стабилизатора 0,004 - 0,005 - 0,0060-ный крахмал на физиологическом растворе, с последующей инкубацией панелей при 18-22 С.Пример ифизиологическог ведо кипения) добавляют 1,5: .,5: 3: 4; 5; о: В:10: 20 мг крахмала. После того, как растворосгынет до пределов комнатной температурьп ставяРНГА по общепринятой методике, используя О-образные панелимикротитрэторэ Такачи", Панели оставля)от цри ко,)натной температуре (18-22 С) доосецания эоитроцитов в контролях. Показа;о, .то максимальное количество выявляемого эголгенэ вирусов парагриппа овец:. Эрбов)лрусов в исследуемом материае достлгается при 0,004-0,005-0,006 /,цых коцентрациях крахмала Г 1 ри 0,0015;0,0025; 0.003;/, ных концентрациях крахмала нэб/Одэется сгОнтэннэя эГГлютинс)цияэритроцг 1 тарньх диаГносГикумов, я исГ)о/)ьзос)г)ние 0,0: 0,02 и 0,008-;4-ных коне 1 ТраИи приводило к сникению титравмяв)яемого энтигенэ (табл,1).С 1 э тэбг). 1 видно, что наиболее высокие.Итры антигенов получены при минималь,О 1-1 конце)трэцИ)1 крэхмэлс 0,004% и мэкси,".:эльной концентрации 0,006%Г Г) ле р 2, Как и в первом примере, к00 "с)Из олог)ческого раствора добавля, по - , Мг крэхмэг/1, ПО общепринятой мето/,1 кг-. стэвяч РН ГА. Исцользуя О-образные: 1"ели микротитрэторэ "Такэчи". Результаты ч ):,ТьвэОт посга инкубации панелей вусловиях раэг)ь)х температур 18-22 ОС, 35" .".; 36-37" С.Розульгаты, представленные в табл, 2,посэзьвэю)т, чо наибольшая чувствительность Р 1 ГА проспяется при инкубации па еай Ои комнат)ой )емпературе (18-22 С)к то;.1 Г)ерэт)/ре 5-6 С, Очнэко при 3-5 С:зрамл;,чегэ реакции удлиняется по сравне, и;о с )нкуОэц),ей при 1 8-22 С нэ 30-40 мин,:с существе)но важно в г)лане граждансой обороны цри выг)с)лнении задач по ингИк;),1, и Э 1 руснс)го а)Тигена При 35-37с)тьечэось они)ение чувс.вительностиР-, /), нэ 2-4 цог)ядеса1; и л е р 2. П)роверкэ сг)ецифлчностииндикации вирусОЭ 10 п)едгэгаемому способу, РНГА стэвиг)и, используя в качествес: Гэби/)ээОр)э 0.005 /о "ный крахмал на фи 3 Л 0 Л О Г И Ч Е С К О М Р а С Т Б О Р Е И Г О С Т Я Н О В К И Р Е Э Кции при 18-22 "С Указанным примером вгабл, . доказано специфичность предлагаемого сгс)соба индикации парагриппа овец, эрбовирусов в инфицированном матеРИЭГЕ (КУ/1 ЬТУРЭЛЬНЭЯ ЖИДКОСТ Ь, МОЗГОВЭЯс,/спензия). Антительнье эри)ооцитарныедлагност)лкумы взэлмодействовали только сгомологич) ыми вирусными антигенэми исоверше):л о реэировэли с гетеролсгичНЫМИ,П О )л м е р 4, Проверка специфичностии Г)елмус)ествэ црдлагаемого сцособэ мо 5 10 20 25 30 35 40 45 50 55 дификации РНГА. Стабилизирующие растворы готовили обычным и предложенными методами.Приготовление стабилизирующего раствора по обычному методу Готовят 0,15 М одно-и двухзамещенные фосфатные буферные растворы. Затем готовят на них фосфатный раствор рН 7,2 под контролем рН-метра, после чего к 90 мл физиологического раствора добавляют 10 мл фосфатного буферного раствора (рН 7,2) и 10 мг сухого бычьего сывороточного альбумина.Приготовление стабилизирующего раствора по предлагаемому способу. К 100 мл физиологического раствора (доведенного до кипения) добавляют 5 мг крахмала и дают остыть до комнатной температуры.Результаты подготовки ингредиентов реакции показали значительные преимущества во времени, используемых средствах и простоту подготовки ингредиентов реакции по предлагаемому способу Эффективность выявления вирусного антигена предлагаемым способом не уступала обычному,Г 1 р и м е р 5, Предлагаемый способ был использован практическими лабораториями ветеринарной службы в хозяйствах по содерканию мелкого рогатого скота в Талды-Курганской области Казахской ССР, По мнению специалистов предлагаемый способ удобен в применении, экономичен и не требует дефицитных и дорогостоящих препаратов, дополнительного оборудования (рН-метра). а также проведения дополнительных работ по приготовлении зэбуференного раствора и его подтитровки рН 7,2, Предлагаемый способ легко воспроизводим, эффективен и рентабелен.Эким образом, преимущество предлагаемого способа постановки РНГА с использованием в качестве стабилизатора 0,005%-ной концентрации крахмала на физиологическом растворе по сравнению с обычным методом заключается в экономич. ности, простоте и воспроизводимости методики, в результативности, позволяющей широко использовать указанный метод в практических учрежденияхЗаявляемый способ является техническим решением способа постановки реакции непрямой гемагглютинации. поскольку упрощает и повышает результативность и эффективность способа выявления вирусного антигена в инфицированном материале, отвечающих современным требованиям службы гражданской обороны в областл индикации вирусов,Формула изобретения Способ постановки реакции непрямой гемагглютинации для вь)явления вирусных1780008 Таблица 1 Продолжение табл.1 и е . Здесь и в последующих таблицах титр величинах. СА - спонтанная агглютинация име ны в обратных блица антигенов, предусматривающий разведение исследуемого материала стабилизирующим раствором, добавление сенсибилизированных антителами, эритроцитов, последующую инкубацию и учет результатов, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью упрощения способа, в качестве сталибизирующего раствора используют раствор крахмала в концентрации 5 0.004-0,006%.1780008 Таблица 3 Составител ь А. Баря моваТехред М,Моргентал Корректор Т.Палий Редактор Л.Волкова Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул.Гагарина, 101 Заказ 4433 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб 4/5