Способ получения средства, обладающего иммуномодулирующей активностью

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК 9) (11) 1 К 35/78 ОПИСАНК АВТОРСКОМ ТЕН ЗОБ ЕТЕЛЬСТВ аев И.П. Справочстениям. - М.: МеА, ОБ- РУЮИЯ СРЕДС НОМОДУЛ бретение о способа и иммуномо рья растит ия. Цель -тносится олучения дулируюельного и повышечастьженнь2 ч,в ное ра ную) р ол- очока етГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯПРИ ГКНТ СССР(56) Соколов С.Я., Заманик по лекарственным рдицина, 1984, с. 29,(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНЛАДАЮЩЕГО ИММУЩЕЙ АКТИВНОСТЬЮ(57) Использование: изок медицине и касаетсясредства, обладающегощей активностью, из сыживотного происхожден Изобретение относится к медицине и касается способа получения средства, обладающего иммуномодулирующей активностью, из сырья растительного и животного происхождения.П р и м е р. Измельчают траву багульника болотного 80 г, чистотела большого 60 г, корни левзеи сафлоровидной 200 г, заливают двумя литрами воды при 1=100 С и настаивают на водяной бане в течение 20 мин. После фильтрации полученного извлечения в него добавляют 300 г пчелиного меда, доводят вновь водой т=100 С до 2 л, затем полученный полупродукт заливают в две емкости. В первую, большей вместимостью (5/6 частей полупродукта), опускают отрицательно заряженный электрод, а во вторую, меньшей вместимостью, емкостью(1/6 ние специфической активности средства. Сущность изобретения: экстракции водой при 100 С в течение 20 мин подвергают растительное сырье при следующем соотношении компонентов: трава багульника болотного - 80 г, трава чистотела большого - 60 г, корневища с корнями левзеи сафлоровидной - 200 г, полученный экстракт фильтруют, добавляют пчелиный мед - 300 г, и полученную смесь электролизуют в течение 2 ч, после чего отбирают щелочную фракцию - целевой продукт. Положительный эффект, полученное средство обладает более выраженной иммуномодулирующей активностью, чем экстракт левзеи, 1 ил., 1 табл,полупродукта) - положительно 3 рй электрод. Длительность электролиза течение этого времени происходит изделение на фракции (кислую и щел аствора заданной концентрации.Для осуществления электролиза используют выпрямитель-зарядный агрегат ВАЗ б - 12 - б - УУ с напряжением 12 В (электроды алюминиевые, расстояние между электродами 2 см).На чертеже показана схема электролиза.Для электролиза берут емкость 1 большей вместимости, брезентовую емкость 2 меньшей вместимости, отрицательно заряженный электрод 3, положительно заряженный электрод 4,После отключения электрического т фракции разделяют и исследуют на рН-мре: щелочную фракцию при -8,75; кислуюфракцию при рН - 3,5,В качестве иммуномодулирующегосредства используют щелочную фракцию.Тестирование препарата и чсго на смешан ной кул ьтуре лейкоцитов человека.Исследование выполнено на смешанной культуре лейкоцитов человека, полученных из венозной крови четырех практическиздоровых лиц и четырех больных с иммунологической недостаточностью, согласно общепринятой методике, принцип которойсостоит в том, что на большинство лимфоцитов теофиллин оказывает тормозящее влияние.Теофиллинрезистентные Т-лимфоциты,т.е, те, на которые обработка препаратомне влияла, обогащены клетками схелпернойактивностью, а теофиллинчувствительныеТ-лимфоциты, которые прекращают розеткообразование после обработки этим препаратом, обогащены клетками ссупрессорной и цитоклической активностью.В связи с этим Е-РОК с теофиллиномиспользовали как простой, быстрый, достаточно хорошо ориентирующий метод дляоценки субпопуляций Т-супрессоров и Т-помощников в норме и при различных заболеваниях.Использовались препараты следующейконцентрации: цельный препарат в количестве 0,05 мл - 0,05 мл культуры лейкоцитов;разведенный 1;10 (0,05 мл+0,05 мл культурылейкоцитов); разведенный 1:100 (0,05мл+0,05 мл культуры лейкоцитов); разведенный 1;1000 0,05 мл+0,05 мл культуры лейкоцитов); контроль (среда 199 0,05 мл+0,05 млкультуры лейкоцитов),Инкубация лейкоцитарной взвеси в четырех концентрациях препарата и контролеосуществлялась в течение 1 ч. Результатыисследования представлены в таблице,Из представленных в таблице данныхвидно, что индекс стимуляции препарата втесте спонтанного розеткообразования былэффективным (более 10%) по сравнению сконтролем в широком диапазоне доз от разведения 1:10 до 1:1000.На смешанной культуре лейкоцитов убольных иммунозависимой патологией индекс стимуляции был достоверно выше, чему практически здоровых лиц и составил соответственно 1,3-1,62 и 1,18-1,33, Наиболее высокие показателирозеткообразующей способности Т-лимфоцитов отмечены в разведениях препарата вдиапазоне 1:100-1:1000. Эта закономерность прослеживается у всех восьми наблюдаемых человек, Анализ активности препарата в тесте теофиллинзависимого розеткообраэования свидетельствует о достоверном повышении как теофиллинчувствительных, так и теофиллинрезистивных Т-лимфоцитов.У больных иммунозависимой патологией индекс стимуляции теофиллинрезистивных Т-лимфоцитов был более выраженным, превышая аналогичный показатель здоровых лиц на 11% в разведении препарата 1:10, на 28 и 21% соответственно в разведениях 1:100-1;1000.В то же время отмечалась обратная картина в показателях теофиллинчувствительных Т-лимфоцитов, которые значительно увеличивались в группе здоровых лиц и менее выражено в группе больных.Наиболее высокие показатели индексов стимуляции в тесте теофиллинзависимого розеткообразования выявлены в разведениях препарата 1;100 - 1:1000, а по теофиллинчувствительным Т-лимфоцитам в разведении 1;100.Таким образом, можно предполагать, что для стимуляции теофиллинчувствительных Т-лимфоцитов необходимо увеличить дозу препарата,В высоких концентрациях (цельный препарат) происходило снижение индекса стимуляции на 14% у здоровых лиц и на 12% 5 10 15 20 25 30 у больных.В других разведениях (1;10,1:100,1:1000) снижение индекса стимуляции не зарегистрировано ( Р 0,05).Оценка фагоцитарной активности нейт 35 40 45 рофилов свидетельствует о выраженной стимуляции фагоцитоза в разведении препарата 1;100 как у больных, так и у здоровых лиц,Менее выраженные сдвиги в процентном содержании фагоцитирующих нейтрофилов выявлены в разведении препарата 1:1000.Аналогичная закономерность отмечается при анализе фагоцитарного индекса.Таким образом, тестирование препарата Зп чтго на смешанной культуре лейкоцитов свидетельствует, что препарат вызывает стимуляцию клеточного иммунитета и фаго 50 55 цитарной системы,Наиболее эффективными являются разведения препарата 1:100-1:1000, а для иммунорегуляторных теофиллинчувствительных Т-лимфоцитов в разведении 1:10.Кроме этого проводились экспериментальные исследования по изучению токсичности средства, оценке его иммунотропной активности п что, действия на хемилюминесценцию лейкоцитов, а также на хемилю1731225 минесценцию лейкоцитов в присутствии вирусов кори и паротита.Проведенные эксперименты свидетельствуют о том, что препарат, полученный предлагаемым способом, является иммуномодулятором и практически нетоксичен. экстракции подвергают траву чистотела и траву багульника при следующем соотношении компонентов, г/л:Трава багульника болотного (.ебцв 5 ра 1 цзтге) 40Трава чистотела большого (СпеИбоп 3 цтва 3 цз) 30Корневища с корнями левзеи сафлоровидной ( ецгеа сагйагпобез) 10010 экстракцию проводят при 100 С в течение20 мин, после фильтрации добавляют пчелиный мед 150 г, полученную смесь доводят водой до 1 л и электролизуют в течение 2 ч и отбирают щелочную фракцию.15 Формула изобретения Способ получения средства, обладающего иммуномодулирующей активностью, путем экстракции корневища с корнями левзеи и фильтрации экстракта, о.тл и ча ющ и й с я тем, что, с целью повышения специфической активности, дополнительно Т-спонтанные лим о иты Е-РОК 1:1000 10;100 Цельный 1:10 Пациенты 1,18+О,06 1,3 0,05 1,24-0,05 1,33.0,11,43+О,091,380,08 1,28+0,081,62-0,11,45-0,08 ЗдоровыебольныеСумма 91 +0,020,98 0,0230,95"-0,02 циты Е-РОК Т-тео иллин е зистентные лим о 1:1000 10:100 1;10 Па иенты ельный 1,15+0,061,36-0,071,26+0,06 1,21+0,08 1,49-0,07 1,35+0,05 1,13-0,041,240,061,19-0,06 0,91+0,003 0,92-0,04 0,91 0,03 ЗдоровыебольныеСумма оциты Е-РОК Т-тес иллинч в ствительные лим 1;1000 10:100 1:10 Па иенты ельный 1,24-0,06 1,110,07 1,18+0,06 1,85+0,09 1,25+0,07 1,55-0,08 2,23+0,08 1,280,06 1,76 0,07" В-лим о иты (Е ЗдоровыебольныеСумма 0,87+0,05 0,88+0,07 0,88+0,06 АС- РОК) 1:1000 10;100 1:10 Па иенты ельный 0,940,041,02-0,03.0,98+ 0,04 1,07 -0,08 0,99+0,06 1,03 0,07 0,86+0,050,88+0,03 0,87 0,04 ЗдоровыебольныеСумма 1,06+0,06 1,03-0,03 1,05 0,05 Фага итоз,1:1000 10:100 1.10 Пациенты ельный ЗдоровыебольныеСумма 0,96 0,06 0,96-0,05 0,960,06 0,89 -0,050,81 .0,03 0,85+0,04 2,33 0,08 1,58 0,07 1,96+0,08 1,1+0,05 1,12.0,061,11 0,06 агоцита ныи ин е кс Пациенты 1;10 10:100 1.1000 ельный Здоровые больные Сумма 1,16+0,03 1,02+0,03 0,98.0,04 0,94+0,04 0,99+0,06 1,03-0,07 0,84+0,05 0,88+0,03 0,87-0,04 1,35 -0,04 1,03+0,051,05 "0,05 20 П р и м е ч а н и я: Индекс иммуностимуляции определяли путем соотношения показателяв опытной пробе по отношению к контролю. - Статистически значимь 1 е различия с контролем Р 0,05 - 0,01).1731225 Составитель С,фирс Техред М,Моргентал орректор А.Ротма Редактор Е.Пап Тираж ПодписноеГосударственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб 4/5 Заказ 1528 Н Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101