Способ хранения микроорганизмов

сук; в, кцк ц;боо трчдцгх длц цол - держаия ц кранеця.Ятамы стацотро 1 цых бактерий, проверенные ц хранение предлагаемым способом, и указанные в табл . 1, хранятся в 11 БФИ АН СССР в лаборатории радоактивц 1 х изотопов.Проверку выживаемости культур мнкрооргаьцзмов после хранения проводят суспецдировацисм клеток с бумаги н питательной среде, просчетом общего числа клеток в фиксированных и окрашенных препаратах ликвоты суспензии под микроскопом, ц прора 1 иванием равной аликвоты на твердых средах для выявления жизнеспособных клеток, образующих колонии.П р и м е р 1. Чистую культуру Иег 11 у 1 отпопав егЬапдса 12 выращивают ца косяках с агаризованной средой (27 агара "Дифко"), следующего состава, г/л дистиллированной воды): КИО 1,0; И 8504 7 Н гО О,; СаС 1 г 0,0;11 аНРО 4 5 НгО 1,5; 1 ЛгРО 0,7; мг/л: 25 трилон Б 0,5; ГеБ 04 7 НгО 2,0; Еп 504 Х 7 Ч 0 0,1; .1 дС 1 г 4 НО 0,03; СоС 16 НгО 0,2; СоС 1 г 5 Н О 0,1; 11 гС 1 6 Н О О,д; НаИо 04 3,03, рН среды 6,9-7,1. Среду стерилизуют при 1 атм в течение 30 1 ч. Выращивание проводят в вакуумном эксикаторе, заполненном смесью метана и воздуха (1:1).Петлей переносят клетки с косяка на полоску стерильной бумаги ватман У 1, помещенную в стерильный пенициллиновый Флакон. Флакон закрывают резиновой пробкой и помещают в холодильник (-70)-(-81)о С,Анализ выживаемости метанотроЬов через 13 мес хранения показывает, что за это время ч жизнеспособность баю терий полностью сохраняется, загрязнение культуры посторонней микроФлорой це наблюдается. Бактерии начинают 45 расти через двое суток после перенесения полоски бумаги на влажную твердую среду или через трое суток при перенесении полоски бумаги в пробирку с жидкой средой.П р и м е р 2. Способ осуществляютпо примеру 1, но выращивают культуру1 ег 1 у 1 ососсв г 1 егпорЬд 1 ыв, а дляхранения используют стекловолокнистуюбумагу СГ/Е, Через 13 мес жизнеспо 55собнасть клеток полностью сохраняется.П р и и е р 3. Способ осуществляютпо примеру 1, цо выращивают культуруИег 11 у 1 оБасгог с 1 гоососсо, а для храцеия Испо ьз уют ха)и 1 о;)цФТес кую бумагу иатмац3. Жи цесиособцость клеток полностью сохраняется в течение 13-14 мес.П р и м е р 4. Способ осуществляют по примеру 1, цо выращивают культуру Иегйу 1 осувс.1 в есЬдпо 11 ев, а для хранения используют стекловолокцистую бумагу СГ/А и хранят цри температуре жидкого азота (-196 С). Выживаемость клеток после замораживания сохраняется близкой к 1007.П р и м е р 5, Рвеойопопав вцггег 1. ВКИ Ввыращивают в течение суток на МПА при 300 С. Далее способ осуществляют по примеру 1, но хранят при -40 С, Жизнеспособность клетокополностью сохраняется через 14 мес.П р и м е р 6. ИегЬу 1 орй 11 ив я 1 осовеох 1 апв ВКИ В(ограниченно-Факультативный метилотроф) выращивают на минеральной агаризованной (27 агара "ДиФко") среде следующего состава, г/л дистиллированной воды: КНРОф 2,0; (НН 4)г.804 2,0; ИдБ 04 7 НО 0,175; Ре 804 7 НО 0,002. рН доводят до 7,2 раствором ЯаОН, стерилизуют при 1 атм 30 мин, Перед эастыванием в стерильную среду вносят 0,5 Х (об/об) метанола. Выращивание проводят при 30 С. Далее способ осуществляют по примеру 1. Жизнеспособность клеток через 13 мес хранения близка к 1002П р и м е р 7. ЕвсйегдсМа со 1 д К 802/р 1 ЬЬ 435 (1 д 8 Т 4) (продуцент ДНК- лигаэы фага Т 4) выращивают на МПА в течение суток при 30 С. Далее способоосуществляют па примеру 1. Через 13 мес жизнеспособность клеток и биохимическая активность сохраняются.П р и м е р 8. Сапс 1 Ыа вегЬу 1 дса ВКИ Увыращивают на сусло-агаре при 29 С в течение суток. Далее споособ осуществляют по примеру 1. Выживаемость клеток через 14 мес хранения близка к 1002.П р и м е р 9. Культуру Яггергопусев аогеоГасдепв АТСС 10762, ИЮ,Ь 2209 (продуцент хлортетрациклина) выращивают в течение 2 сут при 29 С на среI де, содержащей, г/л: глюкоза 4,0; дрожжевой экстракт 4,0; мальтэкстракт 10,0; агар 12,0, рН 7,2. Для осуществления консервации проводят полоской бумаги по культуре на агаре (снимают реплику), с помощью пинцета переносят бумагу в стерильный Флакон, закрывают11;и цл бч л 1 сР об 1 с с. Кс 1:11 с с.тс 1;. с -то к и р О с ч и т ьн а ют с Ос1 е с у с 11 е1,р с 1 1 с - ция бактерий с бумаги в гтерил,ну жидкую среду с помощью камеры Горв ва под микроскопом, и соличесто изцеслособцх клеток оредеяст логе прорашивация полученной суспец:гии ца агарзованцой среде по числу кооц 1. Полученные результаты обрабатывают статистическ 1.,достоверность расчето составляет 957.В табл . 2 приведены результаты исследований по выживаемости микроорганизмов в процессе консервации известным и предлагаемым способом,Преимущество предлагаемого способа по сравнению с известным заключается в простоте процедуры коцсерации (отсутствие криопротекторов и специальных установок по криоконсервации) при сохранении высокой выживаемости (до 1007) в течение 13 - 14 мес хранения даже у тех культур микроорганзмов, которые не могли быть законсервированы ни одним из известных способов. Кроме того, предлагаемьп способ удобен для хранения культур не только в крупных коллекциях, но и в лабораторных условиях и на производстве.Формула изобретенияСпособ хранения микроорганизмов,предусматривающий выращивание культуры на агаризованной среде и последующее замораживание при температуре от. -40 до -196 фС, о т л и ч а ющ и й с я тем, что, с целью упрощения способа при сохранении или повышении степени жизнеспособности клеток, перед замораживанием культуру помещаот на хроматограЬическую или стекловолокнистую бумагу.Т а б л и ц а 1МикроорганизмЧисло циклов замораживания - оттаивания с сохранением жизнеспособностиМеЖу 1 ошопав пеСЙа -пдса штаммы 1223,68 Не менее 6,Иекмар оррек Редактор Н,Рогулич Тираж 361 комитета по иэо Москва, Ж, Р одписное 803Госуд а ВЮъения венног 113035 ая енно - издательский комбинат Патент, г.ужгор Проиэводс Гаг а,Меспу 1 ошопаМеспу 1 оЬас 11 очогцв ВКММег 11 о 1 орЬ 1.1 цхЫапв ВКММдЬу 1 оЬасгрЬ 11 цщ АТССЕвсЬегдсЬ 1 аВДВас 111 цв вцВТ Меспу 1 оЬасгег 1 пе 1 апд 11 штаммы 30,87 Не менее 6:1 егЬу 1 ососсцв г 11 ег -пи)р 111 цв штаммь 1 104,108, 112 Не менее 6Мегпу 1 ососсцв сарвц 1 аГцв штаммы113, 114, 120 Выживаемость, 7. от контроля 1, 84-4, 6 60,4+3, 6 58, 8+2,6. О, 34, 1 79,6+3,6 76,8 л 4, 1 открытиям при ГКНТ СССР д. 4/5