Способ определения иммунологической реактивности организма

(19 11 33 Л 3,(51) ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ. ГКНТ СССР ЗОБ СПИ АН ЕНИЯ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТ(56) Чернушенко Е.Ф, и КолосоИммунологические исследованиянике, - Киев; Здоровье, 19-78,1вышение точности за сче тения опр ед лимфо измер песце еления рецепторного аппаратацитов и фагоцитов. Производятение люминолзависимой хемолюминции нестимулированных сепсибиованных лейкоцитов, лейкоцитов,лированных латексом без антигелейкоцитов, стимулированных лам, нагруженным бактериальнымканевым антигецом, сопоставляитут и с н Л.С. клитекс и т от полученныеии хемилюмине ЛОГИОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИММУНОРЕАКТИВНОСТИ ОРГАНИЗМАобретение относится к мнайти применение в диаефицического клеточногопри острых и хроническивиях инфекционно-аллергитоиммунного генеза.Цель цы между показателямипецифический стимулятоеделяют гипергическийеакции, а при наличии едицине гнос- иммух зач еского изобр еними определяют гипеммунной реакции, Точсоставляет 622, по ность спосо прототипу -латекса. в концентрации 10 до 1 мл антигепов (используются ртные бактериальные, грибковые, вые, пищевые или производстантигены, а также тканевые ы, полученные общепринятым обрет ени ет найти специфич а, а так ч тицвпяю относится рименение ицине иагнос и танда ыпьце енные ого клеточного и я ег станов нитпа рияхоимм стрых нфекунного и гиче ьног о ционного, алле профессионал ва ау др о ом и а и антигена помещае отделение холодиль осле чего ее центриадочную жидкость вымесь лате не ют в морозильноЦель изобретения -. пов точности способа за счет ния рецепторного аппарата и клеток.Способ осуществляется образом в два этапа.1-й этап включает насл гена на латекс. К 1 мл су пределе" лимфоцит мп физиологичесслед сводят иссл ой хемилюми едованес ценцитов. оение антиспензии из люминолзависенсибилиэи ванных леи(54) СП ЧЕСКОИ , (57) Из и может тике сп нитета болева и хронических забол жащеи специфич сутствии рази р еа кции па нес и без него опр тип иммунной р разницы между гический тип и анные и при повышеценции в пробе, содерский стимулятор, и от 1629848Кровь.из пальца или вены набирают в4 гепаринизированные капилляры.Герметически закрытые капилляры центрифугируют 5 мин при 1500 об/мин,Лейковзвесь из четырех капилляров,образованную на границе плазма -эритроцит, растворяют в 8 мл раствора Хенкса, образуя 16 проб (2 контрольных и 14 опытных), При необходимости исследовать одновременно большее или меньшее количество антигенов описанным способом готовят нужное количество проб из расчета. 1 капилляр периферической крови, растворенный в 1,5 мл раствора Хенкса накаждые 3 пробы.Смесь лейковзвеси и раствора Хенкса разливают по 0,5.мл во Флаконыдля хемилюминесцентного исследования, после чего добавляют: в 1-йконтрольный Флакон 0,1 мл Физиологического раствора,во .".-Й контрольныйФлакон 0,1 мл раствора частиц латекса в дистиллированной воде в концен. трации 10, в 3 - 14-й опытные флаконы поО, 1 мл частиц латекса, нагруженногобактериальными, грибковыми или тканевыми антигенами в конечной концентрации 109В каждую пробу добавляют 0,1 мл2,8 ММ раствора люминола, пробы инкубируют в термостате 30 мин и провоцят замер хемилюминесценции в режиме счета Фотонов с помощью фЭУа.Сопоставляют результаты хемилюминесценции, полученные во 2-й контрольной пробе с опытными, выявляяпробу, хемилюминесцентное свечениекоторой существенно выше по сравне 40нию со 2-й контрольной, на основаниичего диагностируют наличие специфической иммунной реакции по отношениюк данному антигену.Для уточнения напряженности иммунитета, т.е. типа иммунологическои45реакции сопоставляют показатели 1-йи 2-й контрольных проб, диагностируягипергический тип клеточного иммунитета при отсутствии разницы междупоказателями спонтанной хемилюминесценции и стимулированной .инертнымлатексом (неспецифическим"стимулятором), тогда как гиперерический тип иммунной реакции определяют при наличии разницы между этими показателями. 55 1П р и м е р 1. Вольной К., 7 лет, поступил в детское отделение с диагнозом", левосторонняя очаговосливная бронхопневмония ДН , левосторонний экссудативный плеврит.Иммунологическое исследование выполнено согласно методике, описанной в предыдущем разделе. У больного изпальца произведен забор крови в 3 гепаринизированные капилляра. Лейковзвесь из капилляров получали описанным способом, растворяли в 6 мл раствора Хенкса, смесь распределяли по0,5 мл на 12 проб,Ко всем пробам добавляли 0,1 мл 2,8 ММ люминола, пробы инкубировали в термостате в течение 30 мин и проводили измерение хемилюминесценции каждбй пробы в течение 10 с. Получаютхемилюминесцентное свечение в 1-йконтрольной пробе в течение12500 имп/с, а во 2-й контрольнойпробе - 11950 импс,Значения хемилюминесценции 1-йопытной пробы (стимулированной частицами латекса, нагруженными антигеном гемолитического стафилококка составили 19200 имп/с, что существенно вышепо сравнению со второй контрольнойпробой. Данные хемилюминесценциидругих опытных проб достоверно не отличались от 2-й контрольной пробы. На основании полученных данных диагностировано наличие специфической иммунной реакции по отношению к гемолитическому стафилококку, Отсутствие существенной разницы в покязателях хемилюминесцентного свечения 1-й и 2-й контрольных проб позволяет определить гипергическую иммунную реакцию к выявленному антигену гемолитического стафилококка. Низкая напряженностьиммунитета указывает на активныйинфекционно-воспалительный процесс,вызванный стафилококковой инфекцией,что было подтверждено выявлением вплевральпой жидкости гемолитическогостафилококка в высоких титрах - 10бПолученные данные подтверждены также нарастанием титров антистафнлококковых антител в динамике заболевания(через 2 недели от начала болезнититр антистафилококковых антителвырос в 6 раз по сравнению с исходным уровнем.При исследовании известным способом существенной разницы в показателях спонтанной, стимулированной ФГА и стимулированной гемолитическим стафилококком РБТЛ не выявлено (пропент бластных клеток соответственноУстановленный диагноз подтвержденпутем проведения комплекса иммунологических исследований. Аутоиммунную 5реакцию на легочной антиген выявлено путем проведения реакции поглощения комплемента (по Кондрашовой Н,И.),которая была положительная .Специфичность антигена нейссериякатарралис и туберкулина подтвержденапутем постановки кожных проб. Кожнаяпроба с аллергеном нейссерия катарралис была положительначерез48 ч (отмечался волдырь в диаметреболее 12 мм), Проба Манту - папула19 мм (через 32 ч).При исследовании известным способом РБТЛ спонтанная составляет 123,РБТЛ с ФГА - 237., РБТЛ с аллергеном 20 нейссерия катарралис - 22,67, РБТЛ слегочным антигеном - 23.6 Е, РБТЛ стуберкулином - 41,47., что свидетельствует об отсутствии положительныхреакций со специфическими антигенами 25 легких (нейссерия катарралис): положительная реакция отмечена только вотношении туберкулина.В приведенном примере высокая точность предлагаемого способа подтверж дена комплексом иммунологических исследований, выявляющих наличие специфической сенсибилизации к антигенам различного вида.В то же время обследование предлагаемым способом не дало положительных реакций к двум из трех специфических антигенов. Это указывает набольшую точность предлагаемого способа по сравнеюпо с известным.40 П р и м е р 3, Больной В., 36 лет,поступил в кли.1 ику ВНИИГИНТОКСА сдиагнозом: бронхиальная астма, профессионального генеза.,Из проф. анамнеза выяснено, что в 45 течение 11 лет работает аппаратчикоми цеху антибиотиков по производствубиомицина на Немешаевском бпохимза 50димо установить наличие сенсибилизаспецифическому антигену. 55 Для решения поставленной задачи согласно методике предлагаемого спо 5 16 298 составил: 77, 17,2 Е и 18,12), в связи с чем определение реактивности специфического клеточного ыкмунитета было невозможным. Это свидетельствует о преимуществе предлагаемого способа по сравнению с известным, диагностика с помощью которого невозможна при гипергических реакциях иммунитета.П р и м е р 2. Больная К., 13 лет, поступила в стационар с диагнозом: хроническая пневмония в стадии ремиссии, деформирующий бронхит.Проведено иммунологическое обследование по предлагаемому способу.Из двух капилляров крови, взятых у больной из пальца приготовлено 6 проб: 1-я контрольная с физиологическим раствором, 2-я контрольная с латексом без антигена, 1-я опытная с латексом, нагруженным легочным антигеном, 2-я опытная с латексом, нагруженным стафилококковым антигеном,3-я опытная с латексом, нагруженным стрептококковым аллергеном, 4-я опытная с латексом, нагруженным комплексным пневмококковым аллергеном, 5-я опытная с латексом, нагруженным аллергеном нейссерия катарралис, 6-я опытная с латексом, нагруженным синегнойной палочкой, 7-я опытная с латексом, нагруженным туберкулином.В результате измерения хемилюминесценции подготовленных проб получены следующие результаты: 1-я контрольная проба 11200 имп/с, 2-я конт-. рольная проба 17020 имп/с. Среди опытных проб повышение хемилюминес-. ценции отмечалось в пробах 1-й, 5-й и 7-й, на основании чего диагностирована специфическая реакция иммунитета по отношению к легочному антигену, антигену нейссерии катарралис и туберкулину. Сопоставление результатов исследования 1-й и 2-й контрольной проб позволило установить существенное повышение хемилюминесцентного свечения в 1-й пробе по сравнению со 2-й, что свидетельствует о повышенной (гиперергической) реакции иммунитета к данным антигенам, что может быть связано с хроническим инфекционным процессом.Проведенное обследование позволило уточнить окончательный диагноз: хроническая пневмония, гиперчувствительность замедленного типа в отношении легочного антигена, антигена нейссерия катарралис и туберкулина. воде. Для подтверждения диагноза необхоции к производственному антигену(биомицину) и выявить напряженностьиммунитета по отношению к вь 1 явленному соба создано три пробы: 1-я контрольная нестиюулированная, 2-я контрольная, стимулированная инертным латексом, 3-я опытная, стиммулированная1629848 вить специфический антиген, но и определить напряженность иммунитета в отношении данного антигена, в плане уточнения гиперерической или гиперэргической реакции иммунитета, что позволяет также отдифференцировать острый и хронический инфекционный, аллергический или аутоиммунный процесс.Практическая значимость способа определяется широкой информативностью, позволяющей исследовать специфические реакции иммунитета в отношении самых различных антигенов (инфекционных, тканевых, атопических, производственных, медикаментозных и др.), быстрым получением результатов (через час после взятия крови 10 15 для исследования), тогда как при исследовании известным способом - только на 5 - 7-е сутки, а также высокойобъективностью, поскольку результаты исследований Регистрируются печатным устройством установки по измерению хемилюминесценции. 20 25 Формула изобретения Способ определения иммунологической реактивности организма путем добавления к лейкоцитам крови больного специфического и неспецифического стимулятора с последующим учетом показателей реакции на стимуляторы и 30 без них, о т л и ч а ю щ и й с я теМ, что, с целью повышения точности спо 35 4045 юкова ваКорректор М,Демчик Заказ 436 Тираж 407 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Производственнр-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул, Гагарина, 101 латексом, нагруженным раствором биомицина в разведении 1:10.Получены следующие результаты:хемилюминесцентное свечение 1-йконтрольной пробы составляет12950 имп/с, 2-й контрольной пробы -28732 имп/с, 3-й опытной пробы -44260 имп/с.На основании полученных данных,свидетельствующих о существенном повьппении хемилюминесценции в пробе,содержащей производственный антиген(биомицин) по сравнению с контролем,а также повышение свечения во 2-йконтрольной пробе по сравнению с 1-йконтрольной диагностировано наличиесенсибилизации к биомицину и гиперэргическую реакцию иммунитета по отношению к этому антигену. Это подтверждает возможность возникновения хронического заболевания (бронхиальнойастмы), вызванного производственным .антигеном.Диагноз гиперчувствительности замедленного типа, вызванный производственным антигеном (биомицином), подтвержден постановкой реакции торможения миграции лейкоцитов (миграциялейкоцитов в агарозе, содержащейбиомицин в разведении 1;100 , былана 206 Х меньше по сравнению с контролем).При,постановке РБТЛ (по известномуспособу) существенной разницы междупоказателями спонтанной, стимулированной ФГА и стимулированной специфическим антигеном (биомицином) невыявлено, что свидетельствует о большой точности предлагаемого способапо сравнению с известным,Предлагаемым способом обследовано110 детей с различной соматическойи инфекционной патологией, а такжеболее 280 взрослых лиц в отделенияхклиник терапевтического профиля,профзаболеваний и туберкулеза. Точность способа при этом возрасталана 62(по известному 323).Преимущества способа заключаютсятакже в возможности не только выяСоставитель Г.КрРедактор Н.Лазаренко Техред Л.Сердюко1 соба за счет определения состояниярецепторного аппарата лимфоцитов.ифагоцитирующих клеток,в качестве стимулятора используют частицы латекса,нагруженные специфическим .и неспецифическим антигеном, далее проводятреакцию хемилюминесценции и при повы-.шении специфической хемилюминесценции и отсутствии разницы между показателями реакции на неспецифическийстимулятор и без него определяют ги:пергический тип иммуннойреакции,апри наличии разницы между ними определяют гипергический тип иммунной ре-,акций.