Способ получения макропрепаратов культур бактерий

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСНИХРЕСПУБЛИК И 9) 111) 1/ОО //С 12 К 1:01) С 12 И 1 /О (С 12 Я 1/ 1)5 РЕТЕНИ К рганизмов и их биохийств. Для повышенияатов и упрощения споконсерванта, которьпонии бактерий, выращпитательных средах ческих ва преаче б в качестывают пок ных на твер оптимальных о РА ПОЛУЧ ТЕРИИ тение может я мор н робио о для м ьзо ний микроорких свойств. яется повып Сущно том что тельных заливают метакрил а туры илдух йча при ком ния пол ер ил олигомерготовитс путем неполнои поли заГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР ОПИСАНИЕ(71) Свердловский государственный медицинский институт(56) Пиэ Д. Гистологическая техника в электронной микроскопии. М,: Иност ранная литература, 1963, с. 47-51.Билько И,П. Методика получения макропрепаратов культур микроорганиз мов для научно-педагогических целей. - Лабораторное дело, 1986, В 8, с. 508.(54) СПОСОБ ЕНИЯ МАКРОПРЕПА ТОВ КУЛЬТУР БАК(57) Изобре относится к микробиологии и быть использова о для изучени фологии колоний кИзобретение относитс огии и может быть испо зучения морфологии кол анизмов и их биохимичеЦелью изобретения яв ение качества препарат ие способа. ть способа заключается выполненные на тверды редах бактериальные ку жидким форполимером ме та и выдерживают на во тной температуре до ок еризации. Форполим ( ый полиметилметакр ат для их роста условиях, используютжидкий форполимер метилметакрилата,приготовленный путем неполной полимеризации смеси следующего состава,мас.%: диоктилфталат 5-20; азобисизобутиронитрил 0,5-1; метилметакрилатостальное. Полимеризацию консервантаосуществляют на воздухе при комнатной температуре. Макропрепараты, полученные предлагаемым способом, хорошо просматриваются на плотных пита- Жтельных средах, сохраняя морфологиюбактериальных колоний и специфические Ю 4проявления биохимической активностив течение 12 мес. 1 з.п. ф-лы, 1 табл. ции смеси следующего состава, мас.Х:метилметакрилат 80-95; диоктилфталат5-20; азобисиэобутиронитрил 0,5-;и содержит 30-403 свободного мономера - метилметакрилата, Различныеварианты составов полимера являются промежуточными продуктами в производстве органического стекла. Принеобходимости форполимер метилметакрилата можно легко получить в лабораторных условиях простым смешениемисходных компонентов. При этом в него для ускорения процесса окончательной полимеризации (отверждения) добавляют дивинильный мономер - технический дивинилбензол - в количестве5-107 от массы форполимера.Для приготовления форполимера метилметакрилата метилметакрилат смешивают с диоктилфталатом и азобисизобутиронитрилом в массовом соотношении9:1:0,005. Смесь нагревают в закрытойстеклянной емкости на водяной банепри 50 С в течение 20 ч, периодически перемешивая, Образующуюся вязкуюпрозрачную массу хранят в темной гер Оометично закрытой емкости при 4 С втечение 2 педель и используют по меренеобходимости.Выращивают любые необходимые микробные культуры на соответствующихплотных питательных средах в пробирках или чашках Петри при соблюдениивсех требуемых условий их культивирования. Выращенные культуры заливаютжидким форполимером метилметакрилата.исходя из расчета 5-10 мл полимерана одйу пробирку или чашку. Окончательная полимеризация осуществляетсяпри комнатной температуре в течение24 ч. Затем пробирки закрывают резиновыми или ватно-марлевыми пробкамии парафинируют, а чашки Петри герметизируют крьппками, смазывая внутреннюю поверхность последних указаннымполимером,30Качество препаратов в зависимости. от состава форполимера и режима полимеризации, рассмотрим на примерах 1-13, результаты .которых приведены в таблице,35Как видно из таблицы, при концентрациях свободного метилметакрилата,выходящих за пределы предлагаемых(примеры 1, 2, 6 и 7), ухудшаетсякачество препарата или из-за помут Онения полимера, или из-за невозможности длительной фиксации. Концентрацию свободного мономера - метилметакрилата - определяют путем вакуум-отгонки при остаточном давлении, равном 3 мм рт. ст и конденсации в ловушке, охлаждаемой смесьюосухого льда и метанола до -80 С.Помер 2 демонстрирует отрицательное влияние на качество препаратаповышенной температуры полимеризацйи.5 ОДля сравнения приведены результатыизвестных способов (примеры 12 и 13). Примеры 8 и 9 демонстрируют суще 55 ственность интервала концентрации диоктилфталата, а примеры 10 и 11 интервала концентраций азодиизобутиронитрила. Разработанный способ получения макропрепаратов испытан на культурах бактерий различных родов, полученныхиз следующих коллекций.Из коллекции ГИСК медицинских биологических препаратов им, Л.А.Тарасевича: А 1 са 1 тяепев Еаеса 1 я ССМ 1052; Вас 11 цв сетецв ССМ 2010; Вогйеге 11 а ретгцвяхя АТСС 979/; С 1 гтоЬасгег Ггецпй Во 35/57, ТНЕ (1974); СогупеЬасТегыщ йрпгЬегтае (Стапеля Сох 18 еп 1 с) 45, НИИВС, Москва (1955); ЕпйегоЬастег аетояепея 2531 ССМ (1979); ЕясЬегдсЬа со 11 Г, 026: К 60 (1958), П 9-41, 02:К 1:Н 4 (1950), П 5-41, 01:К 1:Н 7 (1950), Крым 1274, 0151:К-:Н 10 (1965), М 17 (1962);Найп 1 а а 1 чед 130 (1979); К 1 еЬве 11 а рпецщопхае К 80 РЕН (1966); Мсгососсцв 1 цгеця (1 уяойеЪг 1 сця) ССМ 169; М 1 сгососсця чаг 1 апя (Багс 1 па 1 цгеа) АТСС 9341; Г 1 е 1 яяег.а еопогтЬоеае 27, УКВИ (1975); Иевяет 1 а щеп 1 п 81 гЫя, (группа А) 2 смр ГИСК (1976) р Ба 1 щопе 11 а СурЫ 214, ЦНИИЭ (1971); Ба 1 щопе 11 а СурЬппцг 1 цщ 441, ЦНИИЭ(БтгерТососсця руодепея) 1512 (1953); БтгерСососсця йаеса 1 в (чаг 1 ЦцеГасдепя) группа Д 5/63 (1964) .Из коллекции профессора Зеелигера"Елейкин", НИИЭМ, Казань (1968), Рвецйощопая аетцупояа 61 р Институттеоретической медицины АН БССР, Минск (1949), Бегтат 1 а щатсевсепв 7, Институт теоретической медицины АН БССР, Минск (1951) Ьвгегы щопосутодепев 634 ВНИИВВиМ(1971), 9-72 ВГНКИветСостав смесн, мас.2 Пример Реяин Концентра.цня сваПризнаки препаратов отверкденияполимера:температу Пластификат Инициатор Вид границы Пузыри сноваиетилФиксированностьсвойствкультуры бадногманаме Состояние полимерного слоя Либутнл- Лиокгавлат) ерекись епэонла Лэсли лообу тирокультуРа-полимер кр злат тил- фтала духа ра, С(время, ч) ннтр 2 (ч 19,5 0,5 Не Псваэмок"ностьфиксацииНевазмокность длптельнойфиксацииВазмакность длительной ут ныл спцывтая 89,ч) и достачная етость 19,3 80,0 0,5 еткая Прозрачный фиксации 8 О,о 22 ( 19,5,5 Четка ет роэ ачн 5 800 6 80,0 19,19,Есть 1 ееазмак" ость лл тельномфиксацю ео,оЕ 25,0 19,5 2 й 5 25 зо МутныйПроэ -рачню 1 Яет 0,О,Распль.вчатая 15973 препаратов (1958) 9-129, ЕГНКИветпрепаратов (1958), 9-127 ВГНКИветпре:паратов (1958), 1197, ВГНКИ ветпрепаратов (1952).Для получения макропрепаратовкУльтУр микроорганизмов на основе Форполимера метилметакрилата требуется значительно меньше временных и материальных затрат по сравнению с известным способом получения аналогичных препаратов на основе ПААГ, поскольку устраняется необходимость приготовления отдельных компонеитов ПААГ, их смешивания в определенном ,соотношении и применения таких анти 15 бактериальных средств, как Формалин или этиловый спирт. Применение форполимера метилметакрилата дает возможность готовить макропрепараты культур микроорганизмов на питательных средах в чашках Петри, поскольку после окончательной полимеризации он образует твердую бесцветную прозрачную структуру с гладкой поверхностью. Кроме того, Форполимер метилметакрилата при контакте с питательными среда)ы и культивируемыми на них микроорганизмами не вызывает изменения их внешнего вида и не изменяется сам.Преимущество предлагаемого способа заключается в том, что предлагаемый состав полимеризующейся смеси и режим ее отверждения обеспечивают значительное улучшение качества макропрепаратов по сравнению с известз ными способами (четкость границы культура - полимер, отсутствие пузырьков воздуха на поверхности питатель 21 ой среды и в блоке полимера, прозрач 40 82 бность полимерного слоя, возможность длительной Фиксации морфологических свойств и прижизненной биохимической активности микробных культур на различных селективных и дифференциально- диагностических средах без каких-либо воспринимаемых визуально или с помощью микроскопа изменений размеров, формы, окраски, консистенции характе" ра поверхности, структуры этих культур и самих сред). Формула изобретения1, Способ получения макропрепаратов культур бактерий, включающий выращивание микробных культур на плотных питательных средах в оптимальных для роста условиях и помещение их под слой. жидкого консерванта с последующей его полимеризацией, о т л и ч а ющ и й с я тем, что, с целью повышения качества препаратов и упрощения способа, в качестве консерванта используют жидкий форполимер метилметакрилата, содержащий 30-403 свободного метилметакрилата, а полимериэацию консерванта осуществляют на воздухе при комнатной температуре.2. Способ по и. 1, о т л и ч а м)- щ и й с я тем, что Форполимер метилметакрилата получают путем смешигания диоктилфталата, азобисизобутиронитрила и метилметакрилата при следующем соотношении компонентов, мас.7.:Диоктилфталат 5-20Азобисизобутиронитрил 0,5-1Метилметакрилат Остальное1597382 Продолжение таблицы Состав снеси, мас.2 Пример Признаки препаратов Пластнфикаторы Инициатор Состояниеполимерлого слоя Дибутилфталат Дипктилфталат Лзоли- изобуПерекись бенэоила тиронктрил з 40 35 9 97,0 1 О 80,0 2,519,8 0,5 0,2 ЕстьНет, ТехредМ.Дидык Корректор М.Пожо Редактор С.Пекарь Тираж 495 Подписноекомитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР Москва, ЖРаушская наб., д. 4/5 Заказ 3032 ВНИИПИ Государственного 11303 5, П изводственно-издательский комбинат Патент , г.ужгороде ул, Гагари а,111 11Гн 101рои Основа(метилметакрылат) Концентрация свободиогомонокера Реникотвернденияполимера 1температураС