Способ количественного определения содержания алкалоидов в семенах и вегетативной массе люпина

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИН А ВТСРСНОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ 57) Из бретение относи ений и может бь тся к биохить использо оводстве люмии расвано в лекции и сем одстве при также в животно енин качества со мов. Целью изобр ащение времени а го трудоемкости жой точности оп ина, а предел ин кор держащих люетения являетнализа и снипри сохранеределения. Осзатрат и реаккции и семеночению кормов экономию времени, тру тивов в работах по сел я со ение тву люпина, по иго основе. 4 табл ии вь биохимиильзовано Изобретение отн тся ипиалькал-.раствожет быть исп семеноводств растении и мв селекции иа также пои е люпина,ачества соредел ени и ормов,ения яв жащих люпи Целью изоб крашитом в нойорганиется сокранижение его щение времен трудоемкости налива и си условиипекин,охранения точности оп ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР(71) Отделение по Нечерноземной зоне РСФСР Всесоюзной академии сельскохозяйственнь 1 х наук им В,И.Ленина и Калужская государственная областная сельскохозяйственная опытная станция (72) Ф,К. Терехов(54) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ АЛКАЛОИДОВ В СЕМЕНАХ И ВЕГЕТАТИВНОЙ МАССЕ Л 10 ПИНА(51)5 0 01 И 33/50, С 07 0 5/00 нову предложенного способа составляет введение нового метода экстракцииалкалоидов из растительного материала, предусматривающего использование1 ОЕ-ного раствора трихлоруксуснойкислоты (ТХУ). Замена многоэтапнойэкстракции с применением комплексаминеральных и органических веществодноступенчатой процедурой обработки пробы раствором ТХУ в совокупности с быстрым окрашиванием экстрактайодат-йодистым реактивом позволиласократить время анализа (по сравнению с известным способом ) примерно в10 раз. Новый способ пригоден дляопределения содержания алкалоидов какв семенах, так и в вегетативной массе, он может быть использован дляанализа высокоалкалоидных и безалкалоидных видов люпина. При этом результаты определения полностью совпадают с данными наиболее точного весового метода, Применение изобретенияв практике обеспечит значительную Достижение пос тавл енной цели обеспечивается введением принно нового метода экстракции алдов с использованием 107-ногора ТХУ с последующим определеалкалоидов в экстракте путемвания их йодат-йодистым реагекислой среде, Замена многоэтаэкстракции с помощью комплекс(для алкалоидных видов люпина) или2,5-5+0,001 г (для малоалкалоидныхвидов) воздушно-сухой пробы растительного материала, размолотой на мельнице, помещают в коническую колбу (на250 мл ), приливают 50 мл 1 ОЕ-ногораствора трихпоруксусной кислоты,Содержимое хорошо размешивают покачиванием и выдерживают 45 мин для укрупнения осадка белков и перехода алкалоидов в раствор. За время настаивания смесь размешивают два-три разас интервалами 10-15 мин, после отстаивания снова энергично встряхивают и переносят содержимое на бумажныйФильтр средней плотности. Па определение берут 1-2 мл фильтрата для апкалоидных и 5-10 мл Фильтрата для малоалкалоидных видов, Отобранный объемфильтрата помещают в мерную колбу на100 мл, добавляют 10 мл 0,2 н. НЯОи дистиллированную воду до 80 мл,затем размешивают,Вносят 5 мл йодат-йодистого реагента, допивают водой до 100 мл иперемешивают 3-кратным перевертывани 55ем колбы. Через 5 мин регистрируют оптическую плотность по отношению кконтрольной пробе, которая содержитвсе компоненты, кроме Фильтрата, Измеческих и минеральных реактивов одно- этапной процедурой с использованием ТХУ и применение в цветной реакции йодат-йодистого реактива обеспечиваУ 5 ющего быстрое развитие окраски, позволяют сократить время анализа до 1 ч по сравнению с 9-10 ч в известном способе. При этом по данным статистического анализа получаемые предлагаемым методом данные практически полностью совпадают (имеют высокий показатель сходимости) с результатами параллельных анализов, выполненных по стандартной методике (табл,2 и 3). 5В табл, представлены сравнительные операции проведения анализа на содержание алкалоидов известным и предлагаемым способами,В табл,2 представлена оценка метрологических характеристик предлагаемого способа (А) и весового метода (Г) при определении содержания алкалоидов в семенах и вегетативной массе люпина (1; о з = 2,09), 25В табл.З представлена оценка показателя сходимости. рения проводят н проточной кювете с длиной оптического пути О мм при длине волны 500 нм.Содержание алкалоидов (Е) рассчитывают по Формулеа Ч 1 ОО 00ООО Н ч 1,00-Ь)10 а л 1,ч 1,100-Ь 7где а - содержание алкалоидов в100 мл раствора, определенное по калибровочной кривой,мг;Ч - общий объем вытяжки, мп;Ч - объем Фильтрата, взятый наопределение, мл;И - навеска растительного материала, г;Ь - влажность пробы, Х.В табл,4 приведено содержание (7.) в семенах и вегетативной массе различных видов люпина, определенное предлагаемым (А) и известным (Б) способами.Приведенные данные свидетельствуют о том, что предлагаемый способможет быть использован для определения содержания алкалоидов как в семенах, так и в вегетативной массевысокоалкалоидных и безалкалоидныхвидов люпина. При этом результатыанализа практически полностью совпадают с данными весового метода ( поМаху и Ледерлею), хотя предлагаемыйспособ позволяет получать их в 1 О разбыстрее,Применение изобретения обеспечивает значительную экономию времени,трудозатрат и реактивов в работахпо селекции люлина и получению кормов на его основе.формула из обретенияСпособ количественного определения содержания алкалоидов в семенах и вегетативной массе люпина, включающий их экстракцию из растительного материала, проведение цветной реакции, колориметрирование окрашенного растворра и сопоставление интенсивности окраски опытных и стандартных образцов, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью сокращения времени анализа и снижения его трудоемкости, алкалоиды экстрагируют 1 ОХ-ным раствором ТХУ,15415 5 Продолжение табл. 1 Таблица 1 Колориметрирование 1 мин Известному Предлагаемому Общее время58 мин Взятие навески1 минНастаиваниес 107.-ным раствором БаОН30 минЭкстрагированиехлороформом ваппарате Сокслета 2 ч 30 минПромывка экстрак",ционной колбыэтиловым эфиром 2 мин Взятие навески1 минНастаивание с07-ной трихлоруксусной кислотой45 минФильтрованиечерез бумажныйФильтр 5 мин Перенос частифильтрата в мернуюколбу на 1 О мл,прибавление воды,окрашивание йодатйодистым реагентом и 0,2 н. НЯО.1 минЛобавление водыдо метки и отстаивание 5 мин . Встряхиваниеэкстракта спорциями по10 мл 0,02 н,Няо,1, 5 ра.30 мин Таблица 2.1 ф 103 Б Средние результаты Интервалконцентраций, Х КоличествоаналиА Б зов 20 2,800-1,000 2,194 2,:091 13 33 1,76 20 0,700-0,210 0,535 0,531 4 11 1,62 20 0,084-0,023 0,049 0,049 1 2,4 1,94 Т абл иц;а Э Д 103 Количествоанализов Интервал концентраций,% 8 ск 15 2,800-1,00 34,3 0,030 . 0,083 15 0,700-0,210 9,07 0,008 0,022 15 0,084-0,023 2,26 0,002 0,006 в качестве цветореагентз используют йодат-йодистый реактив, а обработку им проводят в присутствии сернойкислоты,Операции и их длительность по способуОперации и их длительность по способу 5Известному Предлагаемому Упаривание кислотного экстрак О та и измерениеобъемачВыделение алкалоидов в окрашенныйосадок прибавле кием 1 ОХ-ной ФосФорно-молибденовойкислоты 4 чФильтрованиеосадка через 20 стеклянныйфильтр 30 минПромывка водойи восстановлениеосадка щелочным,раствором хлористо-го олова 30 минПеренос окрашенногокомплекса в мернуюколбу на 100 мл, З 0 доведение водойдо метки и отстаивание 15 мин.Колориметрирование 1 мин35 Общее время 9 ч53 мин54515 Тя бл ия" 4 Проба Год Сорт Содержание алкапои- дов Составитель О. Скуратовская Редактор И. улла Техред М,Дидык Корректор П, ПатайПодписное Заказ 277 Тираж 507ВИИГИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР113035, Москва, Ж, Раушская наб., д, 4/5 Производственно в издательск комбинат "1 атент", г.ужгород, ул. Гагарина,10 Многолет ний люпин 2 (семена) 34 5 6 7 8 9 10 11 Узколист ный лнпин 47 Немчиновский 846 49 ( семена) 50 Узколист ный люпин 57 Немчиновский 846 59 (вегета тивная масса) 1982 1982 1982 1982 1982 1983 983 1985 1985 1986 1984 1984 984 1084 1983 1983 1983 1986 1986 2,710 2,866 2,794 2,710 2,644 2,710 2,794 2,710 2,866 2,233 2,266 0,076 0,044 0,050 0,058 0,067 0,043 0,025 0,028 0,084 0,074 2,705 2,800 2,700 2,738 2,650 2,743 2,770 2,685 2,860 2,236 2,204 0,080 0,042 0,050 0,056 0,064 0,040 0,022 0,029 0,080 0,070