Способ определения массовой доли нерастворимого осадка молокосвертывающих ферментов

СО)ОЭ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИН А 1 ОБРЕТЕН цт Б,:ь .,. ЕЛЬСТВУ нологиче лов етодыдукто971,евой куСОВОЙ ДОЛИ ОСВЕРТЫВАЮ спользовано прикосвертывающихдля определенияворимого осадка логии и может быть оценке качества мо афичесочек раэтностиовой дорментов, а имени ссовой доли нера в них.Цель изобретеникорение способа.- упрощение и ус Согласно препсин растворя воде. Нераствор ты различной хи создают суспенз ческих плотност эии (растворенн рившаяся часть) раствора (раств ляют значение,ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР ОПИСАНИЕ АВТОРСКОМУ СНИ(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ МАНЕРАСТВОРИМОГО ОСАДКА МОЛОЩИХ ФЕРМЕНТОВ Изобретение относится к биотехн лагаемому способу т в дистиллированной мые частицы - продук ической природыю. По разности оптий у раствора суспенй пепсин + нераствои отфильтрованного ренный пенсии) опред(57) Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано при оценке качества молокосвертывающих ферментов, а именно для определения массовой доли нерастворимого осадка в них. С целью ускорения и упрощения способа перед фильтрацией измеряют оптическую плотность раствора, после фильтрации вторично измеряют оптическую плотность раствора, а затем массовую долю нерастворимого осадка определяют по формуле: Н = 3,52 Е+0,136, где Н - массовая доля нерастворимого осадка, Е, Е - разность оптических плотностей раствора до и после фильтчрации, о.ед;3,52 и 0,136 - постоянные коэффициенты. 1 ил, 1 табл,мои Формуле находят массовую долю нерастворимого осадка.На чертеже представлена гр кая зависимость с указанием т броса разности оптической пло до и после фильтрации от масс ли нерастворимого осадка, при колебании последней от 0,7 до 77.В опытах используют 5 видов молокосвертывающих ферментов: овечий, говяжий, свиной фпи фп, Повторность опытов 7-10 кратная, Массовую долю сырого осадка определяют по существующей методике, а разность оптических плотностей - по предла. гаемой методике.Исходя из графика следует, что между массовой долей нерастворимого3 145 осадка молокосвертывающих ферментов и разностью оптических плотностей раствора до и после фильтрации существует Функциональная зависимость, описываемая линейным однофакторным уравнением вида;у=ах+Ь,где ,.а и Ъ " постоянные коэффициенты.Коэффициенты а и Ь рассчитывают, по методу наименьших квадратов,При обработке экспериментальныхданных получены значения коэффициен тов; а = 3,52; Ь = 0,136.Проверку адекватности полученногоуравнения вида Н = 3,52 Е + 0,136:экспериментальным данным проводят путем определения критерия Стьюдента ипоследующего сравнения полученногорезультата с табличными при довери тельной вероятности р = 0,95.Значение табличного критерия53114установлена Функциональная зависимость между массовой долей нерастворимого осадка и показателем оптической плотности.Предлагаемый способ осуществляется следующим образом.Навеску молокосвертывающего ферментного препарата 0,1 г взвешивают 10 с точностью до 0,001 г, растворяютв 10 мл дистиллированной воды, нагретой до 35 ф 0,5 С, выдерживают 10 мин при указанной температуре в ультра- термостате, затем содержимое перемеши вают 10 с и определяют процент светоН = 3,52 Е+0,136; %20 25 пропускания раствора в неизбирательной области спектра на фотоэлектрокалориметре при ширине кюветы 1 = 1 см.Далее переводят по таблице процентсветопропускания на показатель оптической плотности и,зная разность оптических плотностей растворов до ипосле фипьтрования (Е) находят массовую долю нерастворимого осадка поуравнению:чение,иничного- среднее зна значениетата,улькания пропус фильтр Показа 19,20 и По- число опыто ции сем измерениям0,48, Тогда тель светокания пос,37/0,48 пропуле ФилЗатемнт све ьтра по т о л тическои п дующие з Показа до фильтр=3,52 1,35 ь составипадовательно,4, 88,",. с 1 с /8 сс,,где Й - среднее значение разностирезультатов анализа, определенных различными методаЫ - среднее квадратичное откло 9нение,Среднее квадратичное отклонениенаходят по уравнению: Яс 1 /и ср Бс 1 с, 0- 0,79.Так как рассчитанная втерия Стьюдента 0,79 меньго значения 2,02 (при колтов 40 и доверительной в р0,95), то отсутствует систематическая погрешность метода.Таким образом, в результате длительного эксперимента (более 100 оп-, ределений) выявлена возможность создания экспресс-метода для определения массовой доли нерастворимого осадка,30 35 40 П р и м е р 1. Для исследований берут 0,1 г овечьего пепсина, навеску растворяют в 10 мл дистиллированоной воды, нагретой до 35 С, содержимое перемешивают 10 с, определяют светопропускание раствора в неизбирательной области спектра на фотоэлектрокалориметре.фЭК при ширине кюветы 1 = 1 см (разбавление 1;2). Далее раствор фильтруют через бумажный фильтр Р 90 и в профилированном растворе вновь определяют процент светопропускания.Получены следующие значения,Показатель светоции 15,50блице переводят прускания в показателтности и получают чения.ель оптической плотностиции 0,72 х 3 (степень разд 2,16, после фильтрациитон эксперимента. Точность эксперимента повышается за счет снижения количества производимых операций (4-кратное взвешивание в известном).Технические преимущества предлагаемого способа заключаются в упрощении и значительном ускорении способа определения качества молокосвертываюшего препарата по массовой доле нерастворимого осадка, Время определения по известному способу составляет 5-6 ч с учетом проведения всех операций, по предлагаемому способу определение может быть выполнено за 20-30 мин. Уменьшается также объем навески в предлагаемом способе О, 1 г, в известном -г, Учитывая дефицит молокосвертывающих ферментов, сложность их вьделения,можно значительно экономить материал.Формула изобретения пропускания дофильтрацииПоказатель свето 16,2 20 Способ определения массовой доли нерастворимого осадка молокосвертывающих ферментов, предусматривающий взвешивание навески, растворение ее в воде, вьдержку, фильтрацию раствора фермента и последующую оценку результатов, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью упрощения и ускорения процесса определения, оценку результатов проводят путем измерения показателей оптической плотности растворов фермента до и после фильтрации и расчета по формуле 3,52 Е+0,136,где Н 3,52 и0,136 - постоянные коэффициенты Статистические показа- Известный матод Предлагаемый метод тели Среднее арифметическоеи его сшибка 3,49+0,165 3,43+0,081 Относительная погрешность измерения 2,43 4,72 3,75 Коэффициент вариации, 7. 6,86 5 14 553Одновременно массовую долю нераст,воримого осадка в овечьем пепсине определяют известным способом по разности весов фильтра без навески и5 после фильтрации через него с последующей сушкой до постоянного веса.Массовая доля нерастворимого осадка по известному способу составила 4,90%. Отклонение результатов по 10 сравниваемым методам составило 0,07 или 123 еП р и м е р 2. Для исследований берут 0,1 г говяжьего пепсина. Технологические приемы аналогичны опи санным в примере 1,Показатель светопропускания после фильтрации 53,5Показатель оптической плотностидо фильтрации 0,79 х 3=2,37 25Показатель оптической плотностипосле фильтрации 0,27Разность оптических плотностей 2,37-0)27=2,10Расчетная массовая доля нерастворимого осадка в ферменте Н = 3,52" Ф 2,10 + 0,136 = 7,392,Массовая доля нерастворимого осадка по известному способу составила 7,56. Разность составила 0,17 или 2,253.Результаты сравнения по ферментному препарату фп, представлены в таблице, (количество опытов 8). 40Как видно из таблицы при определении массовой доли нерастворимого осадка предлагаемым методом снижается относительная погрешность измерения примерно на 503, что обеспечива ет получение более надежных результамассовая доля нерастворимого осадка, Е,разность оптических плотностей раствора до и послефильтрации, о.ед,.о.зводс-венно-полиграфическ аказ 7452/53НИИПИ; осударс Тираж 788 Подписноенного комитета по ри ГКНТ С 3035, Москва, Жизобретениям и открытиям п5, Раушская наб д. 4/5