Среда для разбавления и замораживания спермы животных

,.ЯО.1197660 СОЮЗ СООЕТСНИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУЬЛИН 107 ТНЕННЬЙ КОМИТЕТ СОСИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКР 00 ДЕЛАМ ЫТИЙОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ Н АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ льноную сольслотутноше 0,0 0,05(56) Авторское свидетельство СССРВ 604556, кл. А 61 О 7/02, 1976.Авторское свидетельство СССРВ 655285, кл. А 61 0 7/02, 1978.Авторское свидетельство СССРВ 852324, кл. А 61 0 7/02, 1979.(54) (57) СРЕДА ДЛЯ РАЗБАВЛЕНИЯ И ЗАМОРАЖИВАНИЯ СПЕРИЫ ЖИВОТНЫХ, содержащая дисахарид-лактозу, желток куриного яйца, глицерин, трис-(окси метил) аминометан и воду, о т л ич а ю щ а я с я. тем, что, с целью повышения выживаемости и оплодотво ряющей способности спермиев восле замораживания, она дополнит содержит двунатриевуюдвувод зтнлендиаминтетрауксуснув к и декстрин при следущцем со нии компонентов, мас.й:Дисахарид-лактоза 6,0- Трис-(оксиметил)аминометан -0Двунатриевая двуводная соль зти- лендиаминтетрауксусной кислоты О, Декстрин . 3 Желток куриногояйца 1 ГлицеринВода дистиллированная Осталь 2. Среда ио п. 1, о т л и щ а я с я тем, что двунатри двуводная соль этилендиэминт уксусной кислоты и трис-(окс тил)аминометан взяты в моляр соотношении 1:2,5.Изобретение относится к сельскомухозяйству, в частности к искусственному осеменению сельскохозяйственных животных, например овец.Целью изобретения является повышение эффективности среды.Предлагаемая среда содержит дисахарид-лактоэу, желток куриногояйца, глицерин, трис-(оксиметил)ами"нометан, двунатриевую двуводнуюсоль этилендиаминтетрауксусную кислоту, декстрин и воду при следующемсоотношении компонентов, мас,7.Дисахарид-лактоза 6,0-10,0Трис-(оксиметил)аминометан 0,05-0,10Двунатриевая двуводная соль этилендиаминтетрауксусной кислоты 0,06-0,12Декстрин 3,0-5,0Желток куриногояйца 13, 0-14, 0Глицерин 8,0-90Вода дистиллированная ОстальноеПричем двунатриевую двуводнуюсоль этилендиаминтетрауксусной кислоты и трис-(оксиметил)аминометанвзяты в молярном отношении 1:2,5.Примеры составов используемойсреды приведены в табл. 1.Каждый состав среды испытывалсяв лабораторных условиях на подвижность и выживаемость сперматозоидовпосле оттаивания спермы (число проб.эякулятов 10).Полученные результаты представлены в табл. 2,Пример приготовления среды. Вчистую .химическую колбу вносят порецепту лактозу, трис-(оксиметил)аминометан, двунатриевую двуводнуюсоль этилендиаминтетрауксусной кислоты, декстрин, заливают прокипяченной горячей дистиллированной водой(80-90 С). Колбу помещают в воднуюбаню с кипящей водой до полногорастворения всех компонентов. Растовор охлаждают до 35-40 С и вносятжелток куриного яйца и глицерин,Свежеприготовленная среда передразбавлением спермы должна бытьисследована по внешнему виду, цвету,запаху и периодически по показателюводородных ионов и осмотическомудавлению.Предлагаемая синтетическаясреда по физико-химическим свойствам должна отвечать следующим, требованиям; внешний вид - однородная 97660 1эмульсия беэ осадка и механическихпримесей, цвет - светло-желтый,беэ запаха, рН 6,7+0,1, осмотичес"окое давление при 0 С в атмосфере(без глицерина) 9, 0 й 0,5,Приготовленную среду используютдля разбавления спермы в течениене более 6 ч. Хранят при температуре 4-18 С, перед употреблением1 О нагревают до необходимой температуры,При использовании испытуемой средысперму вначале 1:1 (в 2 раза) разбавляют рецептом, в состав которогоне входит глицерин, а затем вновь15 . раза - средой с глицерином24 + 2 С. Разбавление производят медленно, среды (особенно с глицерином)добавляют небольшими порциями постенке при постоянном помешивании.20 В табл. 3 представлены результатыобоснования состава предлагаемой1синтетической среды.Если содержание ингредиентоввыходит за границу крайних нижних;или верхних значений предлагаемойсреды, то это дает худшие результаты и не приводит к достижению поставленной цели (табл. 3).Оптимальный (второй) вариантпредлагаемой среды, мас.Х: лактоза 8,0, трис-(окснметнл)аминометан0,07, двунатриевая двуводная сольэтилендиаминтетрауксусной кислоты 0,09; декстрин 3,3; желток куриного яйца 13,3, глицерин 8,8 ф водаЗ 5 дистиллированная до 100, имеет более высокие криозащитные свойствав сравнении с другими вариантами иконтролем. Подвижность после оттаивания составляет 4,50,06 баллов,абсолютный показатель выживаемости22.1 + 17,3 усл. ед.Результаты испытания приведеныв табл. 4.Испытания показали, что предлагаф емая среда обладает лучшими холодоэащитными свойствами при более высоких степенях разбавления, в результате чего повышается оплодотворяющая способность спермы, разбаво ленной в 4 раза (1:3), на 12 посравнению с контролем. Эффективностьиспользования спермы повышаетсяв 1,3 раза, так как оплодотворяющаяспособность. спермы, замороженной55 в предлагаемой среде прн разбавления 1:3, не уступает сперме, замороженной в контрольной среде н раз. бавленной всего лишь 1:2.Таблица Составы Компоненты 2-ой 3-ий 6,0 10;0 8,0 Лактова Трие-(оксиметил)аминометан 0,1 0,07 0,05 Двуиатриевая двуводнаясоль этилендиаминтетрауксусной кислоты 0,06 0,12 0,09 5,0 3,3 3,0 9,0 До 100,До 100 До 100 Таблица 2 Состав среды (вариант) 4,2+ 0,08 219+ 11,1 Первый вариан Второй вариан 4,5 + 0,0 б 4,3 ф О 220+ 15 ь174 ф 16;3 ретий вариантонтроль (ЛЖГТЦ среда) 4,0 + 0,08 Таблиц Ингредиенты среды и качественные Качественные показатели оттаиной показатели оттаянной спермы при следующем содержании ингрециемас.Х пермыов,10,2 Лактоэ(оксиметил аминомета 0,1 трневая двуводная сольндиаминтетрауксусной кислоты,14 5 2,кстри Трис Двун этил ДекстринЖелток куриного яйцаВода дистиллированная Подвижность сперматозоидов после оттаивания спермы в баллах (5 параллельных образцов в каждой пробе т,е. 5 10 = 50 проб)М ф а бсолвтный показательыживаемости в оттаяннрйперме (в условных единиах при 2-4 С,И+ вЭПродолкение табл.З,1197560 14,3 12,5 Желток куриного яйца 7,6 Глицерин До 100 До 100 Води дистиллированная ПоказателиПодвиаиость. (И а)3,5 й 0,03 3,0 1 0,04 1281 98 Абсолютный показатель выаиваемости (И й а) 108 1 12,4 вю Таблица 4 Иэ них объягнил Осемененоовец Сиате среда сканов 4 ои абико-трис-цитратиая среЛактозо-иелтоЧно Составитель И,Велоусова. Редактор Т,Матейко Техред Т.Тулик . Корректор.И.ИаксимищинецФаЕ иакав. 218 Тираз 722ПВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам иаобретений и открытий113035, Иосква, %-35, Рауаская наб., д. 4 одпис(оптимальныйвариант)Степень разбавления спермы средой 1 г,3,: . 145, 85:1 г 3 . 185891 г 3 . 97 57 аэница в ольэу . редлагаеой средыЪ Ю