Способ определения тиамина в кормах

СОЮЗ СОВЕТСКИХСО,ВВФШЮЕП 3%РЕО 1 УБЛИК 091 1111 зав 6 01 Ю 31/08 ОБРЕТ АНИ Я СТВУ ТОРСНОМУ с- мГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ(71) Всесоюзный научно-исследоваский институт комбикормовой промывленности(56) 1. Букин В.Н. Витаминные ресы и их использование, Сб. 3. И.изд-во АН СССР, 1965.2. Флоренская Н.К. Технологичкий контроль качества сырья и кбикормов. И., "Колос", 1968.(54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТИАИИНАВ КОРМАХ, включающий экстракцию тиамина из пробы корма, перевод его втиохром окислительной смесью и флуорометрирование, о т л и ч а ющ и й с я тем, что, с целью повышения точности и сокращения времениопределения, экстракцию тиамина изпробы корма осуществляют растворомхлорида калия при соотношении от 1:10 до 1:15, а флуорометрированиепроводят с использованием хининагидрохлорида или хинина суль -фатаИзобретение относится к техникеколичественного определения содержания тиамина (витамина В 1), широкоприменяемой при контроле качествапродукции в комбикормовой промышленности,Тиамин является одним иа биологически активных веществ премиксов,используемых для обогащения комбикормов и белкововитаминных добавок. 10В премиксы его вводят в количествах200;300 г/т. В организме животныхон входит в состав ферментов и играет роль в водном, углеводном, белковом и фосфорном обмене, имеет большое значение для роста, развития ипродуктивности. Поэтому важным моментом при контроле качества продукции является количественное определение содержания тиамина, для чего необходим точный, экспрессный и простой способ его анализа.Известны способы определения содержания тиамина, основанные на выделении (экстракции) и гидролизе 25фосфатных его соединений с помощьюэнзиматической или химической (кислотной) обработки, превращения в щелочной среде при добавлении окислителя (калия железосинеродистого) З 0в тиохром и измерении интенсивностифлуоресценции ЦНаиболее близким к предлагаемомуявляется способ определения тиаминав комбикормах, включающий экстракцию тиамина раствором серной кислотыпри кипячении на водяной бане, затем тиамин переводят в тиохром окислительной смесью и флуорометриру- ..ют 2.40Недостатками известных способовявляется их продолжительность (от 3 чи более), невысокая точность анализа, обусловленная разрушением тиамина в процессе гидролиза и неустойчивостью рабочего стандартного раствора (годен к применению в течение2 ч).Цель изобретения " повышение точности и сокращения времени определения тиамина.Поставленная цель достигается тем,что согласно способу определениятиамина в кормах, включающему экс"тракцию тиамина из пробы корма, перевод его в тиохром окислительнойсмесью и флуорометрирование, экстракцию тиамина из пробыкорма осуществляют раствором хлорида калия при соотношении от 1:1 О до 1:15, а флуорометрирование проводят с использованием хинина гидрохлорида или хининасульфата.В результате экспериментальныхисследований установлено, что введенный тиамин в течение 10 мин экстрагируется из навески пробы премикса57-ным раствором хлорида калия всоотношении от 1:10 до 1:15. Растворы солей хинина (хинина гидрохлоридахинина сульфата) флуоресцируют в области 320-390 нм, характерной дляпоглощения тиамина, переведенногов тиохром; причем интенсивность флуоресценциимкг/мл соли хинина соответствует 1 мкг/мл тиамина, переведенного в тиохром. В связи с этимколичественное содержание тиаминаопределяется по интенсивности флуоресценции стандартного раствора солихинина с концентрацией 1 мкг/мл, нетребующего обработки окислительнойсмесью. Растворы солей хинина являются неограниченно стойкими, особеннопри хранении в посуде из темногостекла.Способ осуществляют следующимобразом.Н р и м е р . Берут навеску премикса массой 5 г, помещают в мернуюколбу вместимостью 100 мл, приливают 50 мл 57,-ного раствора хлоридакалия и встряхивают на качалке 10 мин. Затем доводят объем вколбе до метки раствором хлорида ка-.лия, перемешивают и фильтруют черезбумажный фильтр, отбрасывая первые10 мл фильтрата,1-2 мл фильтрата переносят в мерную колбу на 50 мл и доводят до метки раствором хлорида калия. Берут40 мл разбавленного фильтрата и 40 млизобутилового спирта в делительнуюворонку и тщательно перемешивают втечение 2 мин. После расслоения нижний водный слой сливают в цилиндрдоводят до первоначального объема(до 40 мл) раствором хлорида калия,перемешивают и используют для анали-за. В две делительные воронки вносятпо 8 мл испытуемого раствора, приливают 6 мл окислительной смеси, перемешивают, добавляют 20 мл изобутилового спирта и встряхивают 2 мин.После расслоения нижний слой водный) отбрасывают, а верхний (спирто.анализ , мпК - количество хинина в 1 млстандартного раствора,Мкг, 45 3 113 вЫй) филЬтруют через бумажный фильтр с безводньм сульфатом натрия во флуорометрическую кювету и флуорометрируют, настроив предварительно прибор по стандартному раствору хини-. на, 20 мл которого помещают в кювету.Для гашения флуоресценции к испь 1- туемым растворам добавляют по 1- 2 капли (0,05 мл) концентрирован-. ной соляной кислоты:, перемешивают содержимое и измеряют остаточную флуоресцейцию.Стандартный раствор хинина готовят следующим образом.Навеску кристаллического хинина " гидрохлорида массой 1 О мг растворяют в мерной колбе вместимостью 100 мл в 0,1 н. растворе серной кислоты. Затем берут 1 мл этого раствора и разводят 0,1 н. раствором серной кислоты в мерной колбе вместимостью 100 мл (концентрация хинина гидрохлорида 1 мкг/мл) . Раствор стойкий.Содержание тиамина (Х) в граммах на тонну премикса рассчитывают по формулеА-Д, К Ч Чг О,Х 12 Ч Ч ать 10гпе А - показания флуорометра дляиспытуемого раствора догашения;А - показания флуорометрадля испытуемого растворапосле гашения;- объем раствора, в которомнаходится навеска, мл;11 - объем раствора, взятогона окисление, мл;Ч 7 - объем разбавленного фильтрата, мл; 1 П - масса навески премикса, г;72 - постоянная величина флуоресценции. стандартногораствора солей хинина; %10 - величины для пересчетасодержания тиамина в г/т,П р и м е р 2Берут навеску премикса массой 5 г, помещают в мернуюколбу вместимостью 100 мл, прили 1 р вают 75 мл 5 Х-ного раствора хлоридакалия и далее проводят анализ поп.1 примера осуществления способа.Стандартный раствор хинина готовят следующим образом.Навеску кристаллического хининасульфата массой 10 мг растворяютв мерной колбе вместимостью 100 млв 0,1 н. растворе серной кислоты,Затем берут 1 мл этого раствора иразводят О, н,раствором серной кислоты в мерной колбе вместимостью100 мл (концентрация хинина сульфата 1 мкг/ми). Раствор стойкий.Полученные результаты испытанияпредлагаемого и известного способовприведены в таблице (введено тиаминав премиксы 200 г/т).1Анализ таблицы показывает, чтосодержание тиамина в премиксах, опЗо ределяемое предлагаемым способом присоотношении массы навески пробы иэкстрагента от 1:10 до 1:15, составляет 199,7 -2,3 - 201,1.-2,8 г/т, апри соотношении 1:8 - 180,05,8 г/т;при определении известным способом 186,54,8 г/т с.отклонением в меньшую сторону до 7,0 - 29,0 г/т поотношению к введенному количеству.Использование предлагаемого спо,щ соба определения тиамина в кормахпозволяет повысить точность и сократить длительность анализа. Годовой экономический эффект по отраслиот внедрения способа составит44640 руб.130800 Определено содержание тиамина, г/т, по способу пп при соотношении массы навескийремикса, и экстрагента предлагаемому Известному 1:1 О 1:15 1:8 198,1 2 197,9 3 208,0 4 187,3 5 197,7 6 160,0 7 169,0 8 184,0 9 208,0 190,0. 1 О 192,0 Мш 180,0-5,8 201,12,8 186,5-4,8,199,7-2,3 Составитель О. ВоробьевРедактор Е. Лушникова Техред И.Гергель . Корректор И. Эрдейи Заказ 9603/32 Тираж 822 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретнний и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д.4/5