Способ определения состояния иммунореактивности

(56) 1. Ляпон А. . 1,о)иг)сксн)й с)нс)лиз ТИМфц)Итон В МСС)С рОЗСТКООбрс)зцвс)ння. Лбордторнцс;ссг)о, 18(, Л. 1, с. 36- 392. с)барс,сссв А. 1. тоги нки и тсники, М., Иммунц.и. . 4. 1974. 5.4 (57 с.;11 Ос;ОЬ С)11 Л)ЛГ.Л 1.НИЯ С:С)- С:ТОЯНИ Я ГММ;1 ИР 1.АКТИВ(.Н:ТИ ИТСМ Иоетс)ВОВКИ РСс)КИИ РОЗСТКОЦбРс)30- ваш)я лимфо)итон с зритро)ситми барана В ИРИЛ тСтВИИ СтИМУ 1 ятоРс), ОтЛЧа)ции(г т(м, что, с )сс.1 ьк) п(вышсиия тцчшсти с)ирс;сс,)си и 5), 0;)нцврсмсннО Осмиссствгиот рсак- )сн К) рцЗСТК(Н)брс)ЗОВВ НИ 5 В И р И СТСТВИ И и утоиг Вз м ь.Изобретение относится к медицине, аименно к иммунологии и может быть использовано для определения иммунологическихсостояний организма.Известен способ определения иммунореактивности лимфоцитов к действию лимфоцитактивных веществ 1 п чего (левамизола, спленина, зимозана, тимозинаи др.) 1 .Однако известный способ недостаточноточен, поскольку исключает участие гуморальных факторов в иммунном ответе.Цель изобретения - повышение точности определения состояния иммуннореактивности.Указанная цель достигается тем, чтосогласно способу определения состоянияиммуннореактивности путем постановкиреакции розеткообразования лимфоцитовс эритроцитами барана в присутствии стимулятора, одновременно осуществляютреакцию розеткообразования в присутствии 20аутоплазмы.Способ осуществляют следующим образом.Выделение лимфоцитов проводится встандартных условиях способа 2),Кровь больных собирают в пробирки,куда предварительно был внесен гепарин(25 ед/мл крови) . Затем кровь разводятв соотношении 1:3 изотоническим буферным раствором, наслаивают на смесь фикола-гипак плотностью 1,077 г/мл и центрифугируют в течение 30 мин при 20 при400 . Собирают слой клеток с интерфазного слоя и 3 раза буферным раствором,Определяют количество клеток и дово 6дят суспензию до концентрации 2,10 /млклеток.Далее в три конические пробирки вносят по 0,1 мл взвеси лимфоцитов и затем в 1 пробирку вносится 0,1 мл левамизола в концентрации 10 мг и 0,1 мл среды, во 40 вторую пробирку - 0,1 мл левамизола и 0,1 мл пазмы крови, в третью пробирку - 0,2 мл среды, Все три пробирки помещают в термостат и инкубируют при 37 в течение 60 мин. Затем пробы один раз центрифугируют при 150 р 5 мин и взвешивают осадки клеток в объеме 0,1 мл. Во все три пробы вносят эритроциты объемом 0,1 мл 0,5 ц/ю-ной взвеси. Далее пробирки центрифугируют 5 мин при 50 у инкубируют 5 мин при 37 в термостате и затем 60 мин при 4, Затем ресуспензируют и добавляют 0,05 мл 3/,-ного глютаральдегида и через 20 мин 2,0 мл Н,О. Центрифугируют, осадок клеток взвешивают в объеме 0,1 мл и наносят на стекло по каплям. После высыхания капель клетки фиксируют метанолом и окра шивают. Подсчитывают процент розеткообразующих клеток в каждой пробе под микроскопом. Пример 1. Больная Г. Оперирована по поводу внутри мозговой злокачественной опухоли. Спустя 10 дней взята кровь для исследования. Определение состояния реактивности указанным способом показало, что в первой пробе процент Е-РОК равен 60, во второй с левамизолом - 67/ в третьей с левамизолом и плазмой - 54 Й, Следовательно, у больной имеется относительно чувствительное к иммунной стимуляции состояние иммунной системы, так как в плазме присутствует блокирующий фактор, который снимает эффект стимуляции.Пример 2. Больной Ш. Поступил в клинику института с диагнозом: опухоль правой затылочной теменной области. Исследование состояния иммунореактивности до операции показало, что в пробе 1 (контрольной) процент Е-РОК равен 35, а пробе 2 с левамизолом - 41/, а в пробе 3 с левамизолом и плазмой - . 23/в. Следовательно, у больного в крови имеется блокирующий фактор, снимающий эффект иммуностимуляции 1 и иго. Состояние иммунореактивности можно оценить как относительно чувствительное к иммуностимуляции.Пример 3. Больная М. Поступила в клинику с диагнозом: опухоль правой лобно теменной области (глиобластома). Иссле. дование состояния иммунореактивности показало; в пробе- процент Е-РОК равен 47, в пробе 2 с левамизолом -- 48/о, Е-РОК в пробе 3 с левамизолом и плазмой - 56/с. Следовательно, стимулирующий эффект левамизола проявляется только в присутствии плазмы крови. Состояние иммунореактивности можно оценить как чувствительное к стимуляции.Разграничение состояний иммунореактивности (нечувствител ьное, чувствительное или относительно чувствительное) основано на различии показаний трех реакций. Количественные показатели этих реакций, на основании которых делается заключение о состоянии иммунореактивности, зависят от воспроизводимости (надежности или точности) способа.Учитывая многолетний опыт работы с этой реакцией, а также разноречивый характер данных об уровне Е-РОК в крови от 35/о до 80/о Е-РОК у практически здоро. вых людей в зависимости от способа поста- вовки можно сделать вывод, что разница в показаниях 3 - 5/, не существенная, не достоверная, Различие свыше 6/о - досто. верное различие в показателях проб. Отсюда: рефрактерное нечувствительное) со. стояние, когда в пробах с иммуноактивным веществом процент розеткообразования такой, как в контроле без препарата илина 3 - 5 О/о выше или ниже; чувствительное состояние, когда в обеих пробах с лимфоактивным веществом количество Е-РОК выше или ниже на 6/О и более, чем в контрольной пробе без препарата; относительно чувствительное состояние, когда в пробе с лимфоактивным веществом и плазмой количество Е-РОК ниже на бо/О и более, чем в пробе без плазмы.Способ апробирован на 32 больных с черепно-мозговой травмой. При использо вании известного и предлагаемого способов получены следующие результаты, представленные в таблице 1.Таким образом, применение двух способов диагностики на одних и тех же боль-.15 ных с черепно-мозговой травмой позволяет их сравнить и оценить. Предлагаемый способ диагностики выявляет группу относительно чувствительных к иммуностимуляции больных, у которых имеются блокирующие плазменные факторы, способные ниве лировать эффект стимуляции.Эта группа относительно чувствительных составляет в данном случае около 40/о от всех чувствительных к стимуляции, Тогда как у 60/о больных с черепно-мозговой травмой лимфоциты крови стимулируются левамизолом. Но почти у головины из них в плазме имеется блокирующий фактор, который снимает эффект стимуляции.Подобные данные получены и с другими иммуностимуляторами. В подтверждение ЗО этого приводится табл. 2, где лимфоциты здоровых лиц (доноры крови) инкубировались совместно с левамизолом, тимозином, спленином, зимозаном в присутствии аутоплазмы или без нее. Как видно из табл. 2 у 4-го и 5-го доноров снижен уровень Т- З 5 РОК (синоним Т-лимфоцитов) - 28 О/о и 29/о соответственно. Следовательно, эти два донора могут рассматриваться как условно здоровые лица, так как у них имеется дефицит количества Т-лимфоцитов в 4 О крови. При воздействии левамизола в присутствии аутоплазмы отмечено, что он практически не влияет на уровень Т-РОК клеток у первых трех доноров (колебания в пределах воспроизводимости способа) . Тогда как у 4-го и 5-го доноров наблюдается увеличение розеткообразования на 1 О и более процентов. Аутоплззма ни в одном из примеров не влияет на стимуляцию левам изолом.При воздействии спленина нз лимфоциты доноров наблюдается другая картина, а именно спленин сам по себе без плазмы вызывает угнетение РОК, особенно выраженное у 3-го донора, и усиливает Т- розеткообразование у 4-го и 5-го доноров. В то же время при действии аутоплазмы крови угнетающее действие спленина снижается у 1-го и 3-го донора и не проявляется у 4-го и 5-го донора. Следовательно, спленин оказывает иммуномодулирующее воздействие на лимфоциты и аутоплазма снимает или,усиливает действие спленинз. Зимозан также оказывает неоднозначное действие на Е-РОК, и аутоплазма, в свою очередь, коррелирует эффект зимозана. Например зимозан у первого донора усиливает Е-РОК, а у второго и третьего угнетает. Плазма в присутствии зимозана усиливает Е-РОК у первого и четвертого доноров и не влияет на Е-РОК у третьего. Тимозин оказывает иммуномодулируюее действие нз Е-РОК лимфоцитов, особенно в присутствии плазмы крови, у лиц с низким содержанием Е-РОК происходит увеличение, а у лиц с нормальными значениями нет эффекта.Таким образом, оценка состояния иммунореактивности у пяти доноров с помощью четырех иммуностимуляторов показывает, что предлагаемый способ оценки применим не только к левамизолу, но и к другим препаратам. Таким образом, предлагаемый способ определения состояния иммунореактивности значительно повышает точность и объективность за счет включения в реакцию 1 п ч 1(го плазмы крови, тем самым значительно расширяется представление о причинах сниженной реактивности и отсутствия эффекта иммуностимулирующих лекарств в организме, тогда как известный способ не позволяет выявлять все формы сниженной иммунореактивности,1 Ф о оЕЮ5 о Ео о хй о н ех с Щй 1 й Еа цл йо ч . с о от м лт м с й о о, о х о о Е сх о й с ох о а о оц с мм сх о х о с х х о. Э в х а Ю х 1сцов мсиа ххй х о Ео х о щ Р, сЕ х сй оо Еоьс хо хи о о е Е Ц Е 3 х Е а л 3 о ой о х о о 1" Е ю ио со л л .т м м м охо О1 сн о со - ф о щт лт с сч а О О О аО 0 0 0 Ох х х х0 0 0 0 0с 1 сг ц с стхх ссЗ 1 1 1 1сч сс Редактор И. КасардаЗаказ 8036/8 Составитель Г. Крюкова Техред И. Верес Корректор М. Розман Тираж 687 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж - 35, Раушская набд, 4/5 Филиал ППП Патенть, г. Ужгород, ул. Проектная, 4