Способ получения антитоксической сыворотки

СОЮЭ СОВЕТСНИХСОЦИАЛИСТИЧЕСНИХРЕСПУБЛИК 19) 01) А 58А 61 К 39/02, 3940 3с ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ. Райкис о-исследователвороток ства антитокси(прототип).ЧЕНИЯ АНТИКИ путем иммуОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТ(71) Ставропольский научиский институт вакцин и сы(54) (57) СПОСОБ ПОЛУТОКСИЧЕСКОЙ СЫВОРОТ низации лошадеи-продуцентов и взятия крови с последующим выделением сыворотки крови, отличающийся тем, что, с целью повышения активности целевого продук. та, в крови продуцентов определяют содержание аутоантител к лизату эритроцитов и иммунизации подвергают лошадейпродуцентов, у которых отсутствуют аутоантитела или степень положительной реакции микропреципитации по Уанье составляет 1 - 2 балла.1:, нк Г(ни( (и ццс,ся к мс,ппИне и к с,с я прои нц,(с(33 питцкси:сскои сыорц ки, примсцн чцй лля лс и.Ния и про,. Ик ики;ц;-р)бнх инфекций.11 с"ц соб получения яцтитцкси-(С К(,,К13 Х "Г С 3 13Х М И 3 с 1 ц И И Г ц , н й 31с Б с послслукнцим вы,с, и псч;,;, сп крови 1..И(,3;ч;Гцыи .Носцб нс;1 т Воз;и)жнни; 10 л лить об иммунцлц ич( - КП НРИ ЦЛЦЦ(ЛГИ ЖИВОТИЫХ Д 151 ЦОЛ С. ция 31 цкцкти)нц)3 анти(ксической сывц ) ( ) к 1 1 .1 ел ь и ц) р(.тс н и я по Б ы ц 1 С н и с с 1 к 13 13- шс ги цс,и нцгц продукт.К 1 Н И 351 П(1 Ь ДЦСТИ )СГС 51 Гс)1, ТЦ СЦ,13(ИЦ С по(0 ЦО 1 УЧС(П(51 с 1 ИИ 1 ЦКСИ ЧС- ( кци сыворц ки ит(х и1ниН(и и, н) ц 1- тсй-прцлуцентов и Взятия крви с пслслу 011 иБЛ(х(1 исч сьеОРО 1 КР БиВ КР)ви 1 РЦЛ) ЦСН ГЦВ ЦПРС 1 С 15301 СЦ СРК 1133 С с 1, 10 ;игитсл к л)з)т -рпрццпцн и ичун.353. ши подвергют лц 3)лси.прцлуцснтов, у ко торых цтсутств10 у г(антител; или степень н.ожителннй р(якпнц чикропрсцици ИИ 13 ИО; яньс состсВГ 5 ст 1 2 Олл.г, пок) б цсн(сстВЛ 5 те 51 сл слс 1013(и м ОбОч.Г 1 м(стз заготОВОКОИ 1 лсй перел грунлиммуцизцией опрслсляк)т содержание в крови аутцантител по отцнпсцио к ли зту яутоэригроцитов и прогн(ируют Б про луннпь тех животных, у которых исслслу- (ЧЫЕЧТ(НТИТСЛ) ОТСМтСГ(У)цт, Я Б СП ЧЯС БЫ 5 в,ини 53 чров(нь их н( п 1)е 13 ыпст лнчх 0, , Ов Б РС,1 к(ни мик 1)оп Рсципитсции по вянь( в модификации Н. Н. Клсмпярской.3 ОВ( . Прогнозирование пролуцентовн гитоксической сыворотки, нпример, ЛОН 1;и.Й О(Ч(ЦЕСТБ,35 Ют В ДВЗ Э 1 ЯП.Н первом этапе на месте зягцт(вки у ;10 п,1 и, 01 ОГ)Риной по поксзатсгнх (1 н( и цлн ической ш)лноцецццсти, берут 5 ч. кровин)оявляют 1 мл 5/В-ного рас вор штрят натрия, Г 1 олученную схесь пня г(ль цо псрсчешивают и цснтрифу ируют при 1 ООО обчин в течение 40 миц. 11 л;чу цтссынкг Б Отдельную пробирку и ис)цгьзук 1,(ля нрелеления в нси яутояцгитс с ННГОИИГЫ, ОСТЗВПИЕС 5) 13 црцбнрКС 13 ОС- л( (пссывяния плазмы, трижды ирцчывзют иц 1 пче ким рстворо)1 и)13 р(.нцой со.и.1 с.с к к.ннО ирОмы Ва ци 53 с) сцснзик) эритрнитв 1( прифугируют нри 1 ООО об)м 3 н В т(чспис 15 мин. К промытым эритроцитам .ннБ,Кп лис гиллированную лолу ло исхцл, ц б ьс:крови и цснтрифугирукт 15 3)п цри ЛГ)(Н) обчи 3, нялосядочцук) жидКС Ь ССынК) 1 И 3 СНОСвЧК) Г В КаСС 3 ВС3 13СЯ .11 Второ)3 этап(. Осун(сстВГЯк)т В 153 влецис (3 103 г Ит(л в пг)язхс.,1 ля этого оер); 1,7 мл плчы крови исслслуечого жи Гногц и 1,7 чл лис пллировянной Вц.(ы ; кцп 3 роль), цчг пют В ккветы прибор Ч.;)Ь,1И И:Х)ср 53 К)т НСр 301 сЧ 3 ГПНЧК) ПГ)Т Ц". ,1 ТР А В КК) ВЕТЫ С Ц 1 Ч(Н В 3 С 511 Ч, ЯНТ 3 Г(.Нс (,1 ИЗЯТ сЧ ГЦЭРИ 1 РН.: ЦБ),(чинЯ с р;зв(лсци 1:103(3 ( н(елхГ- пич рязвслсии(ч Брзя, 1,н" сницк)т ,.тсклянной палочкой и через 1,5 - мипосле каждого разведения опре лс 1 Величину оптической плотисти. Ип.", чсциь ( 3(и(1)РО(ь 1 х )спцых стР 051 т 3 Рс(н 1 к, цс 1 к) гором иобряжсн тся хц,( изчснс;я цп- ИЧ(.КЦЙ П,ЦТНОС Б ;ИСИЧСИлсРж,и 5 В цг,мс Я. Гцс 11 тс;3, 0 1 еле;Г - .3 ОЕ СО(ПИЦСНИС КЦ РЬХ 1331 ЗЬПс)СТ ООР- ЗОБЗИИС "ИКПццрПцПТ 3 Тс 3, ПО 3(отцрц 1( И прогнозир) ю цм (х ц:)ло ичсскуо реактивсксть Гинц,п кк пр ун.нтя.ЦС НК( , П Г Ц. Р(. сК ЦИИ ОсПс СТБ -.)(ЧКИИП ЧннроцреИПИЧ 1 ццн Пц ХсНЬС Б ,ификяши 11. 1. Кл(чпарской(з( 2. ДГ 51 цн нки и мч) нологиче ской р(яктигицсти животных но цоказате,51", реакции мик(ннрсипцтяции были под р:ут,1 изу и цик 105 лцшялей -- будущих лпнрцв пр(пив(стол(нячной сыворотки, 11 0 цц(3)ци нок 1:31(гелей солержания аут(з тиг(л Б крови;и отц(нценик В лизату у гцэритропитц;О жи(цтных были рас- ПРСНХСНЫ ЦЯ ЛВ(. ГР ЦЦЫ.К первой (опытнойгруппе отнесенылошади в коли иствс 33 голов, у которых исслслусчьн Гх то нтитсла отсутствуют, а в случае выявления уровень их не превышает двух бллцв в реакции чикронреципитации цо Уньс в молификации Н. 1. Клечпарскцй. (.)рслний уровень аутошпитслцобрзования В лц ой группе 0,5 оялл, Ост(льн)е животные (17 голов, у которых ицливилуяльныс показатели солсржяния;у ояпите. цо отношению к литу яуэтцэри грццпцц Оцениваются в 3 - 4 0.г и сре,(ций показатель реакции микронрсцицитации и) Узнье 3,9 оалла, вклкчспы в псрвук) контроль у:ц группу, с(0Вторую контрольную групп сст(3 ляют55 лц(п)лс 1, отобранных для с,сч. прои.нолеБа пр(пи вост(лбцячной сы(;Огк:ССТЗ Х Зс ГОТОВКИ ПО ИХ ФИЗИО, ) ГиН,С К 1 нлнн(ннсти согласно трсбцц;и:ярс с 3 "1 цс ц(1 ОП 1)СЛ. Н. НИ Я ца 1 И П.5 ":Птел.Вс(сттронн 331 ян,из тсрьы,рят и выхцл продукции приипх г: - собак отбор;),ннпадей Б :рол,;пыр.- ТИВОСТО;1 ОН 53 НОИ СЫВОРОТКИ П(.: ЧН50 на непрюиз)оли Гс;)ьны 1 и(. ри С:(",; к -Ння ЛОШдЕй ццрЕЛГ)ЗГ)ЕМС:(Н с т- НОМУ СПОСОбя Х Зстр)Ч И Б;(СТОП 3 (",3. ; П; количесто врсчеци. 1-)п(с(:, н(сво непроизволитсльнгц Б с"н н: я "и; "- 55ВЕТСЯ ПрИ ГЧ 5 орс .10 нс 1.3 С ; ;С Ы по предлагаемому спосо(, ц: и р: 111 л: по известному способу Врсч(ни и.1;(; БКЧ;ОЦсЛЕП 13 ИРОЛЧЦСГГЫ . "1 . иБЬСТС больше Б срсл е 120 .и(равнин;)ч изучение имчунолгической продукт)о("и лошадей, отобранных по двч ) он с)( ч в иродуе цты цроти востолбця ц(ой сывротки, устацвле)ю явное преимуцгество предлагаемого способа по с)двнецин) с иЗвестць.Сравните)ьцая характеристика способов отоора лошадей в продуцецты противостолбцячцой сыворотки приведена в таблице.Го завершеник) подготовительного цикла гицериммуцизации из состава опытной группы животные по предлагаемому способу отобраны по низкому показателю аутоацтителообразования) переведено в продуценты 32 лошади, что составляет 96/,. Вместе с тем в первой контрольной группе выход в продуцецты составляет всего 41/О 17 лошадей) и среди животных вторая контрольная группа), отобранных в хозяйствах по известному способу, этот показатель составляет 76/о.Использование предлагаемого способа отбора лошадей для целей сывороточного производства показывает, что гипериммунизация в подготовительном периоде резко стимулирует антитоксинобразование у лошадей с минимальным содержанием в крови аутоантител. Так, средний титр столбнячного антитоксина по предлагаемому способу 952 МЕ/мл. В контрольных группах первой и второй) накопление специфических антител протекает менее интенсивно и составляет соответственно 394 и 594 (МЕ/мл.При рассмотрении динамики накопления титра столбнячного антитоксица в период последук) щей ги пери м муниза пипк) пред 1 агаемочу и известному способам отбора лошадей в продуценты его показатели характеризуются все улучшающимся качеством полученных сывороток - до 1059 МЕ/мл по предлагаемому способу ца десяточ цикле. Титр ацтитоксина в группелоп(адей, отобранных по известному сносбу,в течение десяти циклов находился на уровне 594 в 7 МЕ/мл.В последующих производственных циклах гипериммунизации также отмечаетсяболее высокое содержание столбнячногоантитоксина в группе лошадей, отобранныхв продуцецты по низкому уровню аутоантцтелообразования по сравнению с животО ными, которые поставлены в продуценты поизвестному способу.Таким образом, иммунологическую реактивность или перспективность лошадей (какбудущих продуцецтов противостолбцячнойсыворотки) можно оценивать по кос)ичест 5вешюму содержанию аутоантител в кровина местах их заготовки и к перспективнычпродуцентам относить тех животных, у которых аутоантитела по отношению к лизату аутоэритроцптов отсутствуют или пх сор," держание не превышает двух баллов в реакции микропреципцтации по Уацье в хн)дцфцкации -. Н. Клех)царской.Предложенный способ, разработанныйна лошадях-продуцентах протпвостолбняч)юй сыворотки, был применен ц а группе, )Оц)а.(еп, цр. лзц(ч(. ц ц)длц( низццц бОт Лц ц ВЬ Ч ГОКС ц цпх Гц Па 1(,Таки) обрз.), 1),);ч)(ч( с,(сб ч- жет быть испо)ьов;,) ( ) ), (. ):)о),)цро,в и( цтов др); х )д(;,(.-(.(;(,; ).;с),вороток.с)ог)ьзон) .., ): ; ,; ( (о. ;,т 1 сс" 1 ерс ведс.но лошадсй н родупец 15 с с о антиность С:1 с с,1 О цодго- токситы товина в процент К С 1.Г 1 И -чество тиц 1111- цс цт по аа- вершецию да 1. Предлагаеый 50 96 111 952 32 бб 33 33 тел 120 394 41 33 17 17 2. Регламентный 55(вторая контрольнаягруппа) 76 120 594 Сосгавитель П. Бонарцев Редактор С. Саенко Техред И. Верес Корректор В. Бутяга Заказ 7100/4 Тираж 687 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж - 35, Раушская наб., д. 4/5 Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4